新教材高中生物微生物的选择培养和计数

微生物的选择培养和计数

1.基于实例分析，说明选择培养基的概念和如何设计培养基来

3.1.3举例说明通过调整培养基的配方可分离分解尿素的细菌。（科学思维，科学探究）

有目的地培养某种微生物2.通过学习稀释涂布平板法，运用分析与综合的科学方法,总结

3.1.4概述平板划线法和稀释涂布平板法分离微生物的过程。（科学思维）

是实验室中进行微生物分离和纯化的常用3.基于稀释涂布平板法和显微镜计数法，运用归纳与概括的科

方法学方法,概述测定微生物数量的常用方法。（科学思维）

3.1.5概述稀释涂布平板法和显微镜计数4.基于微生物的选择培养和数量测定原理，通过稀释涂布平板

法是测定微生物数量的常用方法法接种并分离得到分解尿素的细菌菌落，对实验结果进行分

析与评价。（科学探究，科学思维）

必备知识•素养奠基

一、选择培养基

1.实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻

止其他微生物的生长。

2.选择培养基概念:在微生物学中，允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培

养基。

3.选择培养基配方的设计：

（1）原理:分解尿素的细菌合成的酥酶将尿素分解产生Nfto

（2）培养基配方设计：以尿素为唯一氮源的选择培养基。

激疑

如果要从土壤中分离出固氮微生物,那么对培养基有什么要求呢？

提示:固氮微生物能利用空气中的瓯因此培养基中不应添加氮源,这样就只有固氮微生物才能生存。

二、微生物的选择培养

1.方法:对样品进行充分稀释,然后将菌液涂布到制备好的选择培养基上。

2.稀释涂布平板法的操作过程：

⑴系列梯度稀释操作:

1mL1mL1mL1mL1mL1mL

10g土样+90mL无菌水9mL无菌水

（2）涂布平板操作。

①取菌液:取0.1mL菌液,添加到培养基表面。？

②涂布器灭菌:取出浸在酒精中的涂布器,放在火焰上燃烧,酒精燃尽后,冷却涂布器。

③涂布过程:用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面,涂布时可转动培养皿,使菌液分布均匀。

3.培养:待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入恒温培养箱中培养,观察。

下汲藏

在进行稀释操作时，需要在酒精灯火焰附近操作吗?解释原因。

提示:需要。在进行稀释操作时,如果不在酒精灯火焰附近进行,就有可能造成杂菌污染。

三、微生物的数量测定

1.稀释涂布平板法：

(1)统计依据。

当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上

的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

⑵操作。

①一般选择菌落数为30〜300的平板进行计数。

②选用一定稀释范围的样品液进行培养,在同一稀释度下,应至少对&个平板进行重复计数,然后求平均值。

2.显微镜直接计数:利用特定的细菌计数板或血细胞让数板,在显微镜下观察、计数,然后再计算一定体积

的样品中微生物的数量。

四、探究•实践一一土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1.提出问题:如何分离土壤中分解尿素的细菌?每克土壤样品中含有多少分解尿素的细菌？

2.基础知识：

组分含量提供的主要营养

KH2PO41.4g

无机盐

Na2HP042.1g

MgS04•7H200.2g

葡萄糖10.0g碳源

尿素1.0g氮源

琼脂15.0g凝固剂

定容至

H20水

1000mL

3.实验设计：

⑴土壤取样:先铲去表层土,取距地表之ecm的土壤层，将样品装入纸袋中o

02/15

(2)样品稀释:一般选用IX10\IXIO'、I*1()6倍的稀释液进行平板培养。?

(3)微生物的培养与观察:一般在30〜37°C的温度下培养1〜2天,每隔24h统计一次菌落数目，选取菌

落数目稳定时的记录作为结果。?

4.操作提示：

选出下列关于实验操作的正确说法酗⑤。

①本实验耗时长,应提前制订好计划,提高效率。

②本实验用到的器材比较多,应该对试管和平板做好标记。

③取土样的铁铲和取样纸袋使用前都要经过消毒。

④为了防止杂菌污染,从酒精中取出的涂布器应该直接在酒精灯火焰上充分燃烧灭菌。

⑤过热的涂布器不能直接放在盛有酒精的烧杯中。

5.结果分析与评价：

结合实验过程,判断下列实验分析的正误：

⑴由于使用了选择培养基,因此本实验不需要设置对照

组。(*)

提示:应该设置未接种的平板和接种在牛肉膏蛋白陈培养基的平板作为对照。

(2)在同一稀释度下，至少要涂布3个平板。(J)

(3)当菌落数目稳定时,选取菌落数在30~300的平板进行计数。(J)

⑷应该仔细观察培养基上菌落的形状、大小、颜色等特征，并要做好记录。(J)

(5)统计的分解尿素的细菌菌落数目就是样品中分解尿素的活菌数目。(X)

提示：统计的菌落数目还要经过计算才能代表样品中的活菌数目，而且数目偏低,因为当两个或多个细菌连

在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。

?激疑

选择培养基上生长分解尿素的细菌之后,pH会发生变化吗?解释原因。

提示:会升高。分解尿素的细菌可以将尿素分解成NH3,导致培养基的pH升高。

关键能力•素养形成

知识点一微生物的选择培养与计数方法

1.选择培养的目的：从众多微生物中分离出需要的特定微生物。

2.筛选微生物常用培养基一一选择培养基和鉴别培养基：

选择培养基鉴别培养基

特殊控制某一条件(如唯一氮源)或加入某种

加入某种指示剂或化学药品

成分物质(如青霉素)

抑制其他微生物生长,促进目的微生物的与微生物的代谢产物或培养基中的成分发生特定

目的

生长反应

用途培养、分离出特定微生物鉴别不同的微生物

培养酵母菌和霉菌,可在培养基中加入青可用伊红一美蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是

举例霉素，抑制细菌生长;用以尿素为唯一氮否有大肠杆菌(若有,菌落呈深紫色,并带有金属

源的培养基来培养尿素分解菌光泽)

3.稀释涂布平板法：

⑴主要操作环节:系列梯度稀释和涂布平板。

(2)系列梯度稀释和涂布平板后培养结果如图所示:

1mL1mL1mL1mL1mL

七

IO5

9mL无菌水

每个平板加

10g或10mLI

0.1mL样品

样品+90mJ

无菌水

।।।159162

菌落太多;以计数菌落数菌落数菌落数

(3)计算公式:

某一稀释度下平板上生长的平均菌落数

每克样品中的菌株数=涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)x稀释倍数

(4)计数结果：由于当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落,计算结果比实际值偏小。

4.稀释涂布平板法操作注意问题：

⑴稀释操作时:每支试管及其中的9mL水、移液管等均需灭菌;操作时，试管口和移液管应在离火焰1〜2cm

处。

⑵涂布平板时。

①涂布器浸在体积分数为70%的酒精中,取出时,让多余酒精在烧杯中滴尽,然后将沾有少量酒精的涂布器

在火焰上引燃。

②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。

③酒精灯与培养皿距离要合适,移液管管头不接触任何物体。

04/15

⑶同一稀释度的样液加到三个或三个以上的平板上,经涂布、培养,计算出菌落平均数。

5.两种纯化方法的比较：

主要方法平板划线法稀释涂布平板法

主要

接种环在固体培养基表面连续划线系列梯度稀释操作和涂布平板操作

步骤

接种工具接种环涂布器

在具有显着的菌落特征的区域挑取

菌体获取从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体

菌体

能否用

不能计数可以计数，但是操作复杂,需涂布多个平板

于计数

都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单细胞菌落,达到分离纯化微生物的目的，

共同点

也可用于观察菌落特征

6.显微镜直接计数:

⑴原理:此法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定体积的样品中微生物的数量。

(2)方法:显微镜下观察,细菌计数板或血细胞计数板计数。

(3)计算公式：

每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数X400X10000X稀释倍数

(4)缺点:统计的结果一般是活细菌和死细菌的总和，计算结果比实际值偏大。

二^素养案例

(2020•全国I卷)某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解,会对环境造成污染,只有某些细菌能

降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙

两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S,乙的组分为无机盐、水、S和Y。

接种稀释涂布平板挑单菌落接种多次筛选

⑤高效降

---A解S的

菌株

无菌水甲

回答下列问题:

⑴实验时,盛有水或培养基的摇瓶通常采用的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质

是o甲、乙培养基均属于培养基。？

(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2X10,个/mL,若要在每个平板上涂布100uL稀释后的菌液，

且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个,则至少应将摇瓶M中的菌液稀释倍。？

(3)在步骤⑤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时,某菌株对S的降解量反而下降,其原因可

能是(答出］点即可)。?

⑷若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数,请写出主要实验步骤

___________________________________________________________________________o?

⑸上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即

__________________„?

【解析】本题主要考查培养基的类型及其应用、无菌技术和微生物的分离与计数。

⑴常用高压蒸汽灭菌法处理盛有水或培养基的摇瓶。由图中③④过程可知，甲为液体培养基，乙为固体培

养基,所以乙培养基中需要加入的Y为琼脂。甲和乙培养基可以用于筛选能降解S的菌株,因此均属于选择

培养基。

(2)若要在每个平板上涂布100uL稀释后的菌液,且每个平板上长出的菌落数不超过200个，根据计算公

式:细菌细胞数=/义〃可知，稀释倍数沪2X107X—0=2X1074-1000X100+200=1()4(倍)。

(3)当培养基中的S超过某一浓度后,可能会抑制菌株的生长,从而造成其对S的降解量下降。

(4)要测定淤泥中能降解S的细菌的细胞数,可以取淤泥加无菌水制成菌悬液,稀释涂布到乙培养基上,培养

后进行计数。

(5)甲和乙培养基均含有水、无机盐、碳源、氮源等成分。

答案：(1)高压蒸汽灭菌琼脂选择

(2)104(3)S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长

(4)取淤泥加入无菌水,涂布(或稀释涂布)到乙培养基上,培养后计数

(5)水、碳源、氮源和无机盐

【误区警示】稀释涂布平板法分离微生物常见误区

⑴误认为不用涂布均匀:用涂布器涂布平板时一定要涂布均匀，否则难以得到单菌落。

(2)误认为不用冷却:涂布器使用前应进行酒精浸泡,然后灼烧灭菌,冷却之后再涂布,否则会由于温度过高

杀死菌种。

【素养•迁移】

(2020•枣庄高二检测)筛选是分离和培养微生物新类型常用的手段,下列有关技术中不能筛选成功的是

()

A.在全营养的LB培养基(普通培养基)中,筛选大肠杆菌

B.在尿素固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物

C.用纤维素为唯一碳源的培养基,筛选能分解纤维素的微生物

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D.在培养基中加入不同浓度的氯化钠,筛选抗盐突变体的微生物

【解析】选A。在全营养的LB培养基中，几乎所有细菌都能生长，不能筛选出大肠杆菌,A错误;在尿素固体

培养基中，只有能分解尿素的微生物才能生长,不能分解尿素的微生物因缺乏氮源不能生长,能够筛选分解

尿素的微生物,B正确;在纤维素为唯一碳源的培养基上,只有能分解纤维素的微生物才能生长,不能分解纤

维素的微生物因缺乏碳源不能生长,能筛选分解纤维素的微生物,C正确;在培养基中加入不同浓度的氯化

钠,能筛选抗盐突变体微生物,D正确。

【补偿训练】

下列关于测定土壤中微生物数量的叙述，不正确的是（）

A.显微镜直接计数计算的结果比实际值偏大

B.当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一个菌落

C.采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数

D.统计菌落数目时,只要菌落数目在30〜300的平板都可以计数,并以它们的平均值作为统计结果

【解析】选D。显微镜直接计数统计的结果一般是活细菌和死细菌的总和，计算结果比实际值偏大,A正确;

当样品的稀释度足够高时,一个活菌会形成一个菌落,B正确;采用平板计数法获得的菌落有可能是由多个

细菌形成的,所以往往少于实际的活菌数,C正确;统计菌落数目时,应选择同一稀释倍数下涂布的菌落数量

为30~300之间的平板进行计数,D错误。

知识点二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1.分离菌种的原理：

在以尿素为唯一氮源的选择培养基上,只有能产生服酶的微生物才能分解尿素,而缺乏JR酶的微生物由于

不能分解尿素,会因缺乏氮源而无法生长繁殖。

2.实验流程示意图:

TLL蚂

aelm(@

.a五.0?

..

lol0凹

.10『1r

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©

1③一④O

2④O

3尊—④©

4簸一砂

3.实验操作过程:

流程具体操作操作提示

先铲去表层土,取距地表3〜8cm的土壤①适宜在富含有机质，酸碱度接近中性的潮

土壤取样

层,将样品装入纸袋中湿土壤中取样

②取样用的铁铲和取样的纸袋使用前都需

要灭菌

制备分别配制牛肉膏蛋白陈培养基和以尿素牛肉膏蛋白族培养基作为对照组,用来判断

培养基为唯一氮源的选择培养基选择培养基是否具有选择的作用

①火焰旁称取土壤样本①注意无菌操作

样品的稀释②将稀释倍数为〜107的稀释液涂布②对所用的平板、试管做好标记

和涂布平板。每个稀释度至少涂布三个平板作为③初次实验对于稀释的范围没有把握,可选

重复组择一个较为宽泛范围10：'〜IO,倍的稀释液

①将涂布好的平板和空白平板放在适宜①空白平板作为对照,检测培养基制备是否

温度下的培养箱中倒置培养合格

②每隔24h统计一次菌落数目，比较牛肉②观察时还要记录不同菌落的形状、大小、

培养、观察

膏蛋白陈培养基和选择培养基中菌落的颜色等

和计数

数量、形态等，并做好记录③在同一稀释度下,至少对3个平板进行计

③当菌落数目稳定时，选取菌落数在30〜数,然后求出平均值,并根据平板所对应的

300的平板进行计数稀释度计算出样品中活菌的数目

4.实验结果分析:

内容现象结论

有无杂对照的培养皿中无菌落生长未被杂菌污染

菌污染培养基中菌落数偏高被杂菌污染

的判断菌落形态多样,菌落数偏高培养基中混入其他杂菌

选择培养

牛肉膏蛋白陈培养基上的菌落数目大于选择

基的筛选选择培养基具有筛选作用

培养基上的数目

作用

样品的得到3个或3个以上菌落数目在30~300的平

操作成功

稀释操作板

重复组的

若选取同一种土样,统计结果应接近

结果

5.鉴定原理:分解尿素的细菌合成的服酶将尿素分解为NH”使培养基的碱性增强,pH升高。在选择培养基中

加入酚红指示剂,培养某种细菌,若指示剂变红,可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

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分解尿素的细菌

脉酶

CO(NH2)2+H,O------------------->CO2+2NH3

I

酚红指示剂一变红色

【特别提醒】实验中的两种“对照组”与“重复组”

⑴两种对照组作用比较。

①判断培养基中“是否有杂菌污染”，需将未接种的培养基(空白对照组)同时进行培养。

②判断选择培养基“是否具有筛选作用”，需设置完全培养基(牛肉膏蛋白陈培养基)进行接种培养,观察两

种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。

(2)重复组的设置及作用：为排除偶然因素对实验结果的干扰,在每一稀释度下宜设置3个平板作为重复组,

选择菌落数均在30〜300且数目相差不大的三个平板，用“平均值”代入计数公式计算活菌数。

-素养案例

巴氏芽抱杆菌是一类具有较高)R酶活性，能够分解尿素的细菌，广泛分布在土壤、堆肥及污水中。这种细菌

能够将氮肥中的尿素分解成氨态氮被植物吸收,对土壤的肥力有着重要作用。研究人员拟从土壤样品中分

离该类细菌,如图所示为操作流程,①〜⑤表示操作步骤。请回答下列问题：

无菌水无菌水无菌水

①②③④⑤

⑴制备培养基时,按照培养基配方准确称量各组分,将其溶解、定容后,调节培养基的,及

时对培养基进行分装，并进行灭菌。？

(2)步骤②富集培养所使用的培养基按用途来分应为培养基,步骤②的主要目的是

?。?

⑶在步骤④的培养基中加入指示剂,根据培养基是否变红来鉴定是否为尿素分解菌。若用

该方法培养设置了3个培养皿,菌落数分别为163个、158个、159个,则可以推测富集培养后的菌液中每

毫升含活菌数为个,运用这种方法统计的结果往往较实际值______________。?

（4）要进一步分离纯化巴氏芽抱杆菌采用步骤⑤法进行操作,在该操作过程中接种工具至

少要灼烧次。?

【解题导引】解答本题的两个关键知识点：

⑴培养基灭菌的方法:常用高压蒸汽灭菌。

⑵培养基种类的判断:富集培养目的是增加巴氏芽抱杆菌的浓度,所使用的培养基属于选择培养基。

【解析】（1）制备培养基时，操作过程为计算、称量、溶化、配制培养液、调节pH、分装、包扎、灭菌、倒

平板，培养基需要进行高压蒸汽灭菌。（2）图中步骤②富集培养所使用的培养基属于选择培养基，目的是增

加巴氏芽抱杆菌的浓度（数量）。（3）鉴别尿素分解菌时需要使用酚红指示剂,根据培养基是否变红来鉴定是

否为尿素分解菌。富集培养后的菌液中每毫升含活菌数为（163+158+159）+3+0.IX103=1.6X106个，用稀

释涂布平板法进行计数时，由于一个菌落可能是两个或多个微生物细胞的后代形成的,所以统计的结果往

往较实际值偏低。（4）图中⑤分离纯化巴氏芽抱杆菌采用的方法是平板划线法，图中划线区域共4个,所以

该操作过程中接种工具至少要灼烧4+1=5次。

答案：（DpH高压蒸汽（湿热）（2）选择增加巴氏芽抱杆菌的浓度（数量）（3）酚红1.6X106偏低

⑷平板划线5

【误区警示】从土壤中分离微生物的注意事项

⑴一般步骤:土壤取样、选择（富集）培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。

（2）选择分离过程中需要使用选择培养基,要做到全过程无菌操作。

（3）常用的固体培养基上的接种方法是稀释涂布平板法和平板划线法。

【素养•探究一一母题追问】

（1）科学思维一一分析与综合

上题步骤②中用到的培养基的氮源是什么物质？

提示:步骤②中用到的培养基属于选择培养基，目的是增加巴氏芽抱杆菌的浓度（数量），应该以尿素为氮

源。

（2）科学思维一一演绎与推理

某同学发现他涂布的培养基上菌落数目过多连成一片，请你帮他分析可能的原因并提出合理的处理措施。

提示:可能是稀释倍数不够,导致菌液浓度过高,可以通过增大稀释倍数解决。

【素养•迁移】

尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解,就不能更好地被植物利用。下列有关土壤中尿素分解

菌的分离和培养的叙述，正确的是（）

A.培养基中加入尿素作为唯一碳源,该培养基是鉴别培养基

B.测定土壤中分解尿素的细菌数量和测定土壤中放线菌的数量可采用相同的稀释度

10/15

C.细菌合成的麻酶能将尿素分解成氨,氨会使培养基的碱性增强,pH升高

D.利用稀释涂布平板法可以直接完成土壤中分解尿素的细菌的分离计数和纯化鉴定

【解析】选C。培养基中加入尿素作为唯一碳源，该培养基是选择培养基,A错误;因为土壤中各类微生物的

数量不同,故为获得不同类型的微生物,要按不同的稀释倍数进行分离,B错误;细菌合成的服酶能将尿素分

解成氨,氨会使培养基的碱性增强,pH升高,可加入酚红指示剂进行检测,C正确;鉴定分解尿素的细菌应该

用加酚红的鉴别培养基,D错误。

【补偿训练】

在做分离分解尿素的细菌实验时,A同学从对应培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只筛选

出大约50个菌落。A同学的结果产生的原因可能有（）

①土样不同②培养基被污染

③操作失误④没有设置对照

A.①②③B.②③④

C.①③④D.①②④

【解析】选A。土样不同、培养基被污染和操作失误都会影响实验结果,对照的设置对实验结果没有影响。

【课堂回眸】

概念

微

生

物

的

选

择

培

养，稀释涂布平板法

和~（显微镜直接计数

计

数微生物的

土壤中分解尿素的

数量测定探究•实验药窗的分离与计数

课堂检测•素养达标

【概念•诊断】

1.下列关于微生物的培养与计数的描述正确的是①③④⑤。

①分离分解尿素的细菌要使用以尿素为唯一氮源的选择培养基

②对微生物计数可以使用平板划线法和稀释涂布平板法接种微生物

③使用显微镜直接计数的统计结果比样品中的实际活菌数偏高

④在实验过程中,应遵循平行重复原则，同一稀释倍数下至少涂布三个平板

⑤进行微生物培养时要每隔24h统计一次菌落的数目

⑥获得菌落数目为30〜300的平板就说明实验操作成功

【解析】选①③④⑤。在以尿素为唯一氮源的选择培养基上,只有能利用尿素的微生物才能生长，①正确；

对微生物计数使用稀释涂布平板法接种微生物,平板划线法无法计数,②错误;使用显微镜直接计数统计的

是活菌和死菌的数量,结果比样品中的实际活菌数偏高,③正确;在实验过程中,应遵循平行重复原则，同一

稀释倍数下至少涂布三个平板,④正确;进行微生物培养时要每隔24h统计一次菌落的数目，⑤正确;应是

在同一稀释倍数下,获得菌落数目为30~300的平板,且差距不能过大,说明实验操作成功,⑥错误。

2.能合成服酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是（）

A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3

C.CO?和尿素D.葡萄糖和尿素

【解析】选D。合成JR酶的微生物能够分解尿素，所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。

3.用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时（）

①可以用相同的培养基

②都需要使用接种环进行接种

③都需要在酒精灯火焰旁进行接种

④都可以用来计数活菌

A.①②B.③④C.①③D.②④

【解析】选Co平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基,可以使用相同的培养基,①正确;平板划线

法采用接种环进行操作,而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作,②错误;纯化时,要进行无菌操作,需要在

酒精灯火焰旁接种,避免空气中的微生物混入培养基,③正确;平板划线法一般用于分离而不是计数,④错

误。

4.（2020•浙江7月选考改编）下列关于微生物培养及利用的叙述,错误的是（）

A.利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物,而保留利用尿素的微生物

B.配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH

C.酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒

D.适宜浓度的酒精可使醋酸菌活化

【解析】选A。本题主要考查微生物的培养条件和应用。尿素固体培养基上，由于不能利用尿素做氮源的微

生物不能生长繁殖,而保留利用尿素的微生物,并非迅速杀死其他微生物,A项错误;不同的微生物所需的pH

不同,所以配制培养基时,应根据微生物的种类调整培养基的pH,B项正确;酵母菌不能直接利用淀粉,应用

酒曲中的根霉和米曲霉等微生物把淀粉糖化,再用酵母菌发酵得到糯米酒,C项正确;醋酸菌在有氧条件下

能利用酒精产生醋酸,所以适宜浓度的酒精可以使醋酸菌活化,D项正确。

5.下列关于菌种计数方法的叙述不正确的是（）

12/15

A.当样品的稀释度足够高时,能在培养基表面形成单个菌落

B.应该选取培养基表面菌落数目稳定时的记录作为有效数据

C.为了保证结果准确,一般采用密度较大的平板进行计数

D.在某一浓度下涂布三个平板，以它们的平均值作为统计结果

【解析】选C。当样品的稀释度足够高时，培养基表面一个活菌会形成一个菌落,A正确;应该选取培养基表

面菌落数目稳定时的记录作为有效数据,B正确;为了保证结果准确,一般选取菌落数在30~300之间的平板

进行计数,C错误;在某一浓度下涂布三个平板,若三个平板统计的菌落数差别不大,则应以它们的平均值作

为统计结果以减小实验误差,D正确。

【思维•跃迁】

6.自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯,然后进行数量的测

定。下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程,请回答有关问题。

⑴若取土样6g,应加入mL的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大,需要不

断加以稀释,配制成IO,〜IO,不同浓度的土壤溶液。将〜io,倍的稀释液分别吸取0.2mL加入固体培养

基上,用涂布器将菌液铺平,每个稀释度下至少涂布3个平板,这种接种方法称为。将接种的培养

皿放置在37℃恒温培养箱中培养24〜48h,观察并统计菌落数,结果如下表,其中倍的稀释比较

合适，由此计算出每克土壤中的菌落数为，这种方法测定的菌落数往往比活菌的实际数目

（填“低”或“高”）。?

稀释倍数103104105106107

菌1号平板478367277265

落2号平板496354261208

数

3号平板509332254293

/个

（2）若研究尿素分解菌的群体生长规律,可采用平板划线法分离土壤中的尿素分解菌。操作时,接种环通过

灼烧灭菌,在第二次及以后划线时，总是从上一次的