油菜黑胫病抗性鉴定技术规程编制说明

1油菜黑胫病室内抗性鉴定技术规程编制说明一、工作简况项目来源：本标准在自治区科技成果转化专项—油菜新品种NM88及化肥农药减施技术应用（2019CG014）、内蒙古与内蒙古农牧业创新基金项目-油菜病虫草害防控与化学农药减施技术研究（2016CXJJN04）的资助下开展了相关研究，内蒙古自治区市场监督管理局《关于下达2021年第一批内蒙古自治区地方标准制修订项目计划的通知》批准立项。起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院主要起草人：宋培玲、李子钦、杨永青、燕孟娇、皇甫海燕、贾晓清、皇甫九茹、郭晨。二、制定本标准的目的和意义1.油菜黑胫病是限制许多国家油菜产业发展的瓶颈因由小球腔菌属复合种Leptosphaeriamaculans和Leptosphaeriabiglobosa引起的油菜黑胫病（Phomastemcanker）为世界性的病害，在冬、春性油菜上均可发生危害。该病害能够在多种不同栽培措施和环境条件下爆发和流行。目前除中国和印度外，油菜黑胫病在世界各大油菜产区均已造成了严重的经济损失，已经成为限制许多国家2油菜产业发展的瓶颈因素。2.油菜黑胫病目前严重影响我国油菜产业的发展自1999年首次从我国海拉尔、武汉、合肥、贵阳等地Leptosphaeriabiglobosa以来，油菜黑胫病在我国的发生危害呈扩展蔓延趋势。目前，我国多个油菜产区内都有L.biglobosa的存在。2011年李国庆等对湖北省的10个主要冬油菜种植区进行了调查，发现所调查的10个油菜种植区都有黑胫病，发病率为1%-95%。2012年李强生等调查发现，我国16个省(市、自治区)60个市(县)的冬、春油菜产区中14个省的42个市(县)存在黑胫病，约10%的调查田块发病，重病田块发病率达92%，约有5%的植株整株死亡。2018年荣松柏等发现由L.biglobosa引起的油菜黑胫病在安徽、湖北、贵州、河南信阳和陕西汉中等地危害重，产量损失大，黑胫病已成为影响油菜产业发展的重要病害之一。油菜种植是我区阴山北麓及呼伦贝尔等冷凉地区的主导产业，更是促进这些区域经济增长的重要手段。油菜黑胫病的发生危害逐年加重，对我区的油菜安全生产构成了严重威胁。3.抗性鉴定为抗病育种奠定了基础选育和种植抗病品种是防治黑胫病最理想的方法，也3是控制油菜黑胫病的第一道防线。对现有种质资源进行抗黑胫病的筛选、鉴定研究，筛选、发掘以及创新抗病种质是开展黑胫病抗病育种工作的前提和基础。4.缺乏油菜黑胫病菌抗性鉴定技术规程目前，检索全国标准信息公共服务平台，国内外尚无一套有关油菜黑胫病菌抗性鉴定技术标准可循，因此，建立一套简单易操作的油菜黑胫病菌抗病鉴定的技术规程十分必要。本标准在自治区科技成果转化专项、内蒙古农牧业创新基金项目的资助下，明确了油菜黑胫病菌的培养条件、分生孢子悬浮液制备方法、子叶穿刺接种方法及黑胫病菌最适侵染发病条件等各项技术参数，为本标准的制定奠定了基础。制定《油菜黑胫病室内抗性鉴定技术规程》，为现有及新培育的种质资源进行抗黑胫病的筛选、鉴定研究提供技术支撑和保障。三、主要起草过程项目组以前期试验结果为依据，结合研究经验，自2020年12月开始，严格按照内蒙古自治区地方标准的编写格式、结构和表述规则起草了《油菜黑胫病抗性鉴定技术规程》的建议书和草案，经过充分讨论、修改，于2021年2月底汇总上报，7月内蒙古自治区市场监督管理局批准立项，8-10月团队成员完成了《油菜黑胫病抗性鉴定技术规程》编制说4明和标准征求意见稿的撰写，10月上报征求意见稿。12月收到专家修改意见同月按照专家意见逐条修改上报。四、制定标准的原则和依据本标准以实用、科学合理、可操作性强为基本原则，在不违背现行的法律、法规的前提下，结合实际研究过程中的实验数据制定了相关内容。五、主要条款的说明本标准规定了《油菜黑胫病室内抗性鉴定技术规程》，适用于油菜黑胫病抗性鉴定，标准中关于油菜黑胫病菌的培养条件、分生孢子悬浮液制备方法、子叶穿刺接种方法及黑胫病菌最适侵染发病条件有详实可靠的试验数据为依据，在建立抗性鉴定技术规程的过程中，我们主要开展了如下几方面的研究：1.不同油菜品种抗病性评价不同油菜品种对黑胫病的抗病性有一定的差异。团队成员对74份油菜品种（系）进行了抗性鉴定，结果如表1所示，供试的油菜品种（系）均不同程度的感病，病情指数20.47~94.24。以高感品种Drakka为对照，供试材料中没有高抗和中抗品种（系抗病性最好的为垦油6号，病情指数为20.47；32份材料表现低抗，22份材料表现低感，17份材料表现为中感，3份材料表现高感。5表1不同油菜品种（系）抗黑胫病水平油菜品种病情指数抗病性油菜品种病情指数抗病性垦油6号20.47低抗LRY12650.87低感LS垦油5号21.67低抗LR核优5651.25低感LS垦油4号22.89低抗LRLyy652.56低感LS苏油1号23.19低抗LRY16052.81低感LS赣两优2号23.67低抗LR中旗黄油菜54.89低感LS垦油3号26.33低抗LR华油杂10号55.00低感LS华双5号26.84低抗LR黔黄油21号55.43低感LS青杂3号27.50低抗LRY14256.52低感LSY828.46低抗LR绵新油56.73低感LSLyy130.00低抗LR华协10257.31低感LSLyy531.06低抗LR浙平4号58.26低感LS德核杂油831.15低抗LRLyy258.46低感LS武川黄油菜31.35低抗LRY12158.82低感LSY4231.37低抗LRLyy1459.57低感LSY181低抗LR中双11号60.00低感LSLyy1232.50低抗LRY12760.34中感MSLyy832.63低抗LR沪油杂1号60.89中感MSLyy1033.33低抗LRY10561.21中感MSLyy1133.33低抗LRY13461.86中感MS青杂4号33.48低抗LRY16661.96中感MSY3333.78低抗LR浙双7262.80中感MS青杂5号低抗LR秦优10号54.50低感MS滁杂油3号34.17低抗LR皖油2864.74中感MS青杂6号34.23低抗LRLyy965.45中感MSLyy335.92低抗LRY16166.00中感MS青杂7号36.40低抗LRY13967.62中感MSLyy438.26低抗LRY11069.49中感MS新疆黄油菜38.87低抗LRY9870.32中感MS滁核杂1号39.22低抗LRLyy771.33中感MS石宝黄油菜38.32低抗LR秦优11号74.88中感MSY940.00低抗LRLyy1675.24中感MS青油1440.00低抗LRY12475.45中感MSLyy1343.33低感LS扬油6号80.00中感MSLyy1543.75低感LS中油562881.46高感HS锡盟黄油菜44.00低感LSY5581.49高感HS石潭农家种46.82低感LSY14890.48高感HS华协1号核优4647.8950.00低感LS低感LS感对照种）94.24高感HS2.不同温度对病原菌侵染的影响6子叶期分生孢子悬浮液穿刺接种结果表明，温度对病原菌的侵染影响很大，21～24℃时最适合病原菌侵染发围呈轻微黑色或有微小病斑，虽病情指数和病斑面积随温度的升高而增大，但在温度低于18℃时病菌侵染发病能力明显降低；18～21℃病情指数和病斑面积随温度的升高而骤升；21～27℃供试接种的5个油菜品种中有4个品种的病情指数和病斑面积随温度的升高而减小。这表明，油菜黑胫病病菌为偏高温侵染型真菌，21℃以下有利于病菌侵入而不利于其扩展27℃的高温虽不适于病菌侵入，但有利于已侵入菌丝在寄主叶内扩展。图1温度对病原菌侵染的影响3.保湿时间对病原菌侵染的影响件下，保湿时间对病原菌的侵入有较大影响，保湿时间越长，7越有利于病原菌侵入、病斑扩展，病情指数越高，保湿时间越短，病情指数越低。保湿时间12h时供试品种中病情指数最高的只有20，而保湿72h时供试品种中病情指数最低的是90。图2保湿时间对病原菌侵染的影响4.不同保湿时间与温度组合对病原菌侵染的影响温湿度处理组合如图3所示，15~18℃时，各品种的病情指数均随保湿时间增长而缓慢升高，即使保湿时间达72h时，病情指数亦低于20；21℃时，保湿48h以上，各品种的病情指数均大幅上升；而27℃时，保湿48h以上，各品种的病情指数虽随保湿时间的增长而上升，但较21℃条件下缓慢得多。8图3不同保湿时间与温度组合对病原菌侵染的影响六、重大意见分歧的处理依据和结果无七、采用国内外同类标准水平的对比情况本标准是依据油菜黑胫病抗性鉴定试验实际情况所制定，未见国内外同类标准。八、其他应说明的事项无九、标准草稿征求意见情况汇总表9序号地方标准章条编号意见内容提出单位备注13.术语和定义建议将3.1有关油菜黑胫病定义去掉。因为病害名称不属于术语的范畴业大学名称不属于术但为定义23.病原物更改为4.病原物。其中的3.1病原菌分离自内蒙古呼伦贝尔产区的油菜患病植株，纯化并经分子鉴定为Leptosphaeriabiglobosa。建议更改为病原菌从内蒙古呼伦贝尔油菜地中采集的发病植株上分离获Leptosphaeriabiglobosa。致病力为中等水平。业大学采纳33.2.病原物的培养待菌落形成后，在菌落边缘打取直径为4mm菌丝块接于新的PDA培养基中央25℃下进行培养。由于第4条中已经提及到配置分生孢子液进行接种，所以这里就不需要打菌饼了。业大学采纳44.孢子悬浮液的制备这里需要明确接种用分生孢子液的浓度业大学采纳5接种伤口处接种1×107个/mL黑胫病菌孢子悬浮液，这里需要明确接种了多少毫升接种液，同时还需要设置接种清水的对照业大学采纳65.2病情调查表1油菜黑胫病子叶接种鉴定病情分级标准需要有参考文献标注业大学采纳7水平的划分表2油菜黑胫病抗性分级标准也需要有参考文献标注业大学采纳8标准名称“油菜黑胫病抗性鉴定技术规程”改为“油菜黑胫病室内抗性鉴定技术规程”牧业技术推广中心采纳9前言“本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。”改为“本文件由内蒙古自治区农牧业科学院提出。”牧业技术推广中心采纳1“本文件规定了油菜黑胫病抗性鉴定技术的术语和定义、孢子悬浮液制备、接种及抗病性评价等内容。”改为“本文件规定了油菜黑胫病抗性鉴定技术中的孢子悬浮液制备、接种方法、病情调查及抗性评价和鉴定”；删除“本文件适用于春油菜品种、品系抗性鉴定评价。”牧业技术推广中心采纳3.1由小球腔菌属（Leptosphaeriabiglobosa）引起的油菜病害改为“….侵染引起的..”;“分离自内蒙古呼伦贝尔产区的油菜患病植株，纯化并经分子鉴定为Leptosphaeriabiglobosa。”改为“内蒙古呼伦贝尔产区的油菜发病植株上分离，纯化并经分子鉴定的小球腔菌属Leptosphaeriabiglobosa。”牧业技术推广中心采纳与赵君教见类合赵修改5.2“接种7-14d后，根据油菜黑胫病子叶接种鉴定的标准(表1)调查、统计植株的发病情况。”改为“接种7-14d后，根据油菜黑胫病子叶接种鉴定病情分级标准(表1)对接种叶片进行调查。”；表1油菜黑胫病子叶接种鉴定病情分级标准，应明确参考文献。牧业技术推广中心采纳义标号3出现了2次，可改为3.1油菜黑胫病3.2病原菌3.2.1病原菌来源3.2.2病原菌培养学菌来能纳入术定义范畴液的制备L.biglobosa斜体；给出孢子悬浮液的孢子密度(含量)？学采纳5抗病性鉴定5.1黑胫病菌孢子悬浮液的孢子含量如何测定？是否需要补充方法？学采纳英文或拉丁词语言文字表述应使用“TimesNewRoman”字体，学名注意斜体。全文内容的逻辑、层次和语言表述需要改进。学题无法设置斜其余采纳二．制定本标准的目的和意义1)第1页倒数第5行，句子不通顺。建议：本行第二个“发现”改为“中”。2）第2页第一行的“油菜是我区….冷凉地区的主导产业”改为“油菜种植是我区….冷凉地区的主导产业之一