高中生物：微生物的应用(试题部分)

第九单元生物技术实践

专题26微生物的应用

探考情悟真题

【考情探究】

5年考情

考点内容要求预测热度

考题示例素养要素难度

大肠杆菌

实验与探科学探究

的培养和2018浙江11月选考,32（一）,7分中★★★★☆

究能力科学思维

微生物的培养分离

和利用分离以尿

实验与探科学探究

素为氮源2016浙江10月选考,32（一）,7分中★★★★☆

究能力科学思维

的微生物

分析解读本专题包括了微生物培养和分离的一般方法,选考中往往与生产生活相结合，侧重于实际问题

的解决。预计今后的考查形式还是以非选择题为主，可单独考查，也可结合基因工程或食品加工等知识加以

考查。复习时重点掌握微生物培养和分离的相关操作技术,注意区分划线分离法和涂布分离法。

【真题探秘】

[2018浙江11月选考，32（一），7分]回答与微生物培养及应用有关的问题：

（1）对培养基进彳『高压蒸汽灰菌而7页菌肝荷颜时开始计时。Z（/%/而压力）下火西/5min

对于不耐热的液体培养基，一般可将其转入曲丽施褊H币丁菜百一君南新机施亚行一+QG6孔径乘小，体函不能源电

过滤灭菌。

（2）与酿造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加的

过程。灵醴化醋杆菌培养基由蛋白陈、酵母提取物和tr标面用就：真币福窿访询前扈”一℃乩0,

_____________o•”一。指淀粉•分为加持

（3）为筛选胞外a-武谿罅豆总疮菌神「二般双二一，瓦巢鬲树下…11.丙西而壬广商画

-允许口林微生物生庆，抑

厂周围.枯树周围）获得土样，用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培杂盘隔耒「二

D制其他微生物生仄

段时间后在培养基表面滴加碘液，可在菌落周围观察到透明的水解圈：若要筛选酶活性较高

的菌种.需挑选若干个—比值大的菌落，分别利用液体培养基振菊培养

进行扩增。然后将培养液离心，取用于检测酶活性。1

❶核心考点3.特定微生物的分离技术◎试题精析

微生物的培养和利用❸命题特点

参考答案及详解参见P301

❷知识储备1.基础性：考查微生物培养过程中基本的

操作方法和实验细节

I.灭菌方法

2.果醋的制作2.灵活性：注重考查相关知识的迁移应用

破考点练考向

考点微生物的培养和利用

【考点集训】

考向微生物的利用

1.（2019浙江绿色联盟联考,32）回答下列有关分离土壤中以尿素为氮源的微生物的实验：

⑴取1g土样后用逐步稀释,得到不同浓度的稀释液,取样时尽量只取。

（2）尿素溶液用（填工具）进行灭菌,下列关于该灭菌操作的叙述错误的是。

A.固定化酶的灭菌可使用该法

B.该工具灭菌后需用盐酸抽滤后直接干燥保存

C.其他培养基成分应用高压蒸汽法灭菌

D.菌液稀释、接种等均应在酒精灯火焰旁操作

（3）在合适的稀释倍数下，培养基中的红色圈直径大小不一,说明不同菌落的微生物可能是同一种菌的不

同—，这种用于筛选高表达量微生物的方法称为。

（4）若在10,浓度下培养皿的平均菌落数为13,则该1g土样中含分解尿素微生物的数量约为个

/mL。

答案（1）无菌水悬液（2）G6玻璃砂漏斗B

（3）菌株单菌落分离（或涂布分离）（4）1.3X107

2.[2019浙江五校联考,32（一）]某村庄有一条小溪,近几年由于上游几家乳胶厂不断向其中排放废水，小溪

变得不再清澈。某同学想测定该溪水中的细菌含量情况。回答下列问题：

（1）先根据所学知识制备LB培养基。制备该培养基的步骤:计算一称量一溶化一灭菌一倒平板,下列关于制

备LB培养基的叙述，错误的是（）

A.培养基应先调pH再进行灭菌

B.培养基应先灭菌再分装到培养皿

C.融化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦

D.灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在121℃,500g/cnr'压力下灭菌15分钟

（2）该同学利用上述制备的培养基来检测水样中的细菌数量，他所选择的分离方法应是;该同学

在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是。接种

在超净工作台上进行，工作台上实验前一段时间需打开,实验中需关闭的是（A.酒精灯B.照明灯

C.紫外线D.过滤风）。

（3）值得注意的是，他所选择的这种方法统计的结果往往比实际细菌的数目要低,这是因为

①:②

（不考虑实验操作原因引起的细菌数目的变化）。

(4)该同学欲将所分离出的某种细菌临时保藏,应接种到试管的培养基上,等菌落长成后,放入冰箱

低温保臧。

答案(1)0

⑵涂布分离法检查平板灭菌是否彻底C

(3)①该方法只能统计样品中活菌的数目,死菌无法统计

②当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

⑷斜面

炼技法提能力

方法区分消毒与灭菌

【方法集训】

1.细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理,这些方法依次用于杀灭哪些部

位的杂菌()

A.接种环、手、培养基B.高压锅、手、接种环

C.培养基、手、接种环D.接种环、手、高压锅

答案C

2.(2020届浙江七彩阳光高三联考,7)以下关于G6玻璃砂漏斗过滤灭菌的叙述,错误的是()

A.G6玻璃砂漏斗孔径小,细菌不能滤过

B.灭菌前应将漏斗用盐酸浸泡和抽滤去酸

C.过滤时可采用抽滤方式加快灭菌速率

D.该灭菌方法适用于加热易分解物质的灭菌

答案B

【五年高考】

A组自主命题•浙江卷题组

考点微生物的培养和利用

1.[2018浙江11月选考,32(-),7分]回答与微生物培养及应用有关的问题：

(1)对培养基进行高压蒸汽灭菌时,灭菌时间应从时开始计时。对于不耐热的液体

培养基，一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中,采用方式可较快地进行过滤灭菌。

(2)与酿造果醋相比,利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋,需增加的过程。某醋化醋

杆菌培养基由蛋白陈、酵母提取物和甘露醇组成,其中甘露醇的主要作用是。

(3)为筛选胞外a-淀粉酶分泌型菌种,一般从(A.果园树下B.肉类加工厂周围C.米酒厂周围D.

枯树周围)获得土样,用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加碘

液，可在菌落周围观察到水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种,需挑选若干个比值

大的菌落,分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心,取用于检测酶活性。

答案(1)达到设定的温度或压力值抽滤

(2)将淀粉分解为葡萄糖作为碳源

(3)C水解圈直径与菌落直径上清液

2.[2016浙江10月选考,32(-),7分]请回答从土壤中分离产眼酶细菌和眼酶固定化实验的有关问题：

(DLB固体培养基:取适量的蛋白月东、酵母提取液、NaCL加入一定量的蒸储水溶解,再加,灭菌

备用。

(2)尿素固体培养基:先将适宜浓度的尿素溶液，用灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤,因为G6玻璃砂漏

斗,故用于过滤除菌,然后将尿素溶液加到已经灭菌的含有酚红的培养基中,备

用。

(3)取适量含产眠酶细菌的10,IO,两种土壤稀释液,分别涂布接种到LB固体培养基和尿素固体培养基上,

培养48h,推测固体培养基上生长的菌落数最少的是(A.KT稀释液+尿素固体培养基B.10-6

稀释液+LB固体培养基C.10,稀释液+尿素固体培养基D.10-稀释液+LB固体培养基)。在尿素固体培

养基上产腺酶细菌菌落周围出现，其原因是细菌产生的眼酶催化尿素分解产生了。

(4)制备固定化脏酶时,用石英砂吸附腑酶,装柱。再用蒸储水洗涤固定化酶柱,其作用

是O

答案Q)琼脂(2)高压蒸汽孔径很小,细菌不能滤过(3)A红色环带氨(或NH)(4)除去游离

的的酶

B组统一命题、省(区、市)卷题组

考点微生物的培养和利用

1.(2019课标全国III,37,15分)回答下列与细菌培养相关的问题。

⑴在细菌培养时,培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是(填“蛋白月东”“葡萄糖”或

“NaNOJ)0通常,制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH,其原因

是。硝化细菌在没有碳源的培养基上(填“能够”或“不

能“)生长,原因是。

(2)用平板培养细菌时一般需要将平板(填“倒置”或“正置”兀

(3)单个细菌在平板上会形成菌落,研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种

的微生物,原因是„

(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过处理,这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。

答案(1)蛋白陈不同细菌生长繁殖所需的最适PH不同

能够硝化细菌可以利用空气中的C(M乍为碳源⑵倒置⑶在一定的培养条件下,不同种微生物表现出

各自稳定的菌落特征(4)灭菌

2.（2019课标全国II,37,15分）物质W是一种含氮有机物,会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基

表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌（目标菌）。回答下列问题。

（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是。

（2）在从土壤中分离目标菌的过程中,发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落（如图所示）。如果

要得到目标菌,应该选择菌落进一步纯化,选择的依据

是O

（3）土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气

中的氮气作为氮源,请简要写出实验思路、预期结果和结论，

即_________________________________________________________________________________________

（4）该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶（酶E）。为了比较酶E与天

然酶降解W能力的差异,该小组拟进行如下实验,请完善相关内容。

①在含有一定浓度W的固体培养基上,A处滴加含有酶E的缓冲液,B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液,C

处滴加,三处滴加量相同。

②一段时间后,测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈,说明;若A、B处形成

的透明圈直径大小相近，说明。

答案（DW（2）乙乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W⑶将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基

上,若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源（4）①缓冲液②缓冲液不能降解W酶E

与天然酶降解W的能力相近

3.（2018课标全国II,37,15分）在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。

回答下列问题：

（1）在实验室中,玻璃和金属材质的实验器具（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干

热灭菌。

（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点

是O

（3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能°在照射前,适量喷

洒,可强化消毒效果。

⑷水厂供应的自来水通常是经过（填“氨气”“乙醇”或“高镒酸钾”）消毒的。

（5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可能的原因

是O

答案Q）可以（2）在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少（3）破坏DNA结构消毒液（4）氯气

（5）未将锅内冷空气排尽

C组教师专用题组

1.(2015浙江自选，17,10分)某工厂为了生产耐高温植酸酶料添加剂，开展了产该酶菌株

的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下图所示：

土样中的植酸酶

菌种筛选特性分析

(1)土壤悬液首先经80℃处理15分钟，共目的是筛选出①o

(2)在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行②,然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培

养后观察到③,其周围出现透明水解圈，圈的直径大小与④____强弱有关。

(3)筛选获得的菌株经鉴定后，将优良菌株进行液体扩大培养。培养时需要振荡，其主要目的是⑤.

―。液体培养基与固体培养基相比，不含有的成分是⑥。

(4)在合适条件下，将提纯的植酸酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的钙离子溶液中，使液滴形成

凝胶固体小球。该过程是对酶进行⑦。

A.吸附B.包埋C.装柱D.洗涤

(5)温度与植酸酶相对于酶活性的关系如图所示。下列叙述错误的是⑧o

(

东

)

基

里

避

袭

至

温度(七)

A.测试温度中，固定化与非固定化植酸酶的最适温度分别为60°C和45°C

B.测试温度范围内，固定化植酸酶的相对酶活性波动低于非固定化植酸酶

C.固定化与非固定化植酸酶相比，相对酶活性在80%以上时的温度范围较宽

D.65℃时固定化与非固定化植酸酶的相对酶活性因蛋白质变性而位于最低点

答案(1)①耐高温菌株

(2)②稀释③单菌落④植酸酶的活性

(3)⑤供氧⑥琼脂

(4)⑦B(5)⑧D

2.(2012浙江自选,17,10分)幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内

采集样本并制成菌液后,进行分离培养。实验基本步骤如下：

|配制培养灭菌、倒平^一麻一福

请回答：

⑴在配制培养基时,要加入尿素和酚红指示剂,这是因为Hp含有①,它能以尿素作为氮源;若有Hp,

则菌落周围会出现②色环带。

(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是③灭菌。

A.高压蒸汽B.紫外灯照射

C.70%酒精浸泡D.过滤

(3)步骤X表示④。在无菌条件下操作时,先将菌液稀释,然后将菌液⑤到培养基平面上。

菌液稀释的目的是为了获得⑥菌落。

(4)在培养时,需将培养皿倒置并放在⑦中。若不倒置培养，将导致⑧。

⑸临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp,其基本原理是Hp能将14C标记的⑨分解为附和

I4

C02O

答案(1)①眼酶②红

⑵③D

(3)④接种⑤涂布⑥单

(4)⑦恒温培养箱⑧无法形成单菌落

⑸⑨尿素

【三年模拟】

时间：25分钟分值:45分

一、选择题(每小题5分共5分)

1.(2020届浙江嘉兴高三9月测试,17)如图是划线分离法接种微生物的示意图,下列叙述错误的是()

A.该接种过程一般需灼烧接种环5次

B.划线结束可看到划线末端出现不连续单菌落

C.若培养的是尿素分解菌，可加入酚红指示剂

D.该接种方法不能准确计数培养液中微生物数量

答案B

二、非选择题(共40分)

2.（2020届浙江嘉兴高三9月测试,29）（8分）回答与微生物培养、果胶提取及果酒制作有关的问题。

（1）在豆芽汁中加入一定量蔗糖和琼脂,用蒸储水定容后灭菌,得到M培养基。

①M培养基如用于培养霉菌,在培养基灭菌_（选填"前”或“后”）要把培养基的pH调至（选填

“中性偏酸”“中性”或“中性偏碱”）。

②欲从土壤中分离出产淀粉酶的微生物,在M培养基中用淀粉取代蔗糖,并加入显色剂，接种土壤稀释液并

培养。加入的显色剂是,在产淀粉酶微生物的菌落周围会形成O

（2）柚皮富含果胶,将柚皮汁进行过滤，加入出现絮状沉淀,再经和脱水得到果胶干制

品。

（3）利用葡萄匀浆酿制葡萄酒的两个简易装置如图所示.

①与甲装置相比,乙装置的优点有:避免发酵瓶中气压过高；（写出一点即

可）。

②某同学用乙装置制备果酒,实验开始后3天内都未看到气泡冒出。欲使发酵尽快发生，你的建议

是»

答案（8分，每空1分）

（1）①前中性偏酸②碘一碘化钾溶液透明圈

⑵无水乙醇过滤

（3）①避免因开盖放气导致杂菌污染②加入更多的酵母

3.（2019浙江金丽衢十二校联考,32）（7分）某同学要从土壤中分离出能分解尿素的细菌,并统计单位体积土

壤样液的活菌数目。按照培养基的配方称取,并将各种物质溶解后，用蒸储水定容、灭菌,制成固体培养基备

用。回答问题：

（1）配制该培养基应加入的凝固剂和显色剂分别是,加入培养基的三角瓶需用盖上后

灭菌。

（2）培养分解尿素的细菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。采用的检测方法

是O

（3）若要统计土壤样品中尿素分解菌的数目,宜采用法接种,根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释

液的体积,统计平板上的菌落数目就能大约推测出样品中的活菌数。一同学在稀释倍数为10'的培养基中测

得平板上菌落数的平均值为24.6,则每升样品中的活菌数是。与血细胞计数板计数法相比,此计数

方法测得的菌体数较，其原因是一

答案（1）琼脂糖和酚红（顺序颠倒不得分）封口膜⑵将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间

（或：37。恒温箱中培养），观察培养基上是否有菌落产生（3）涂布2.46X109少由于两个或多个细菌

连接在一起,往往统计的是一个菌落或死菌未计入,故用此方法测得的细菌数偏低（其他合理答案酌情给分）

4.(2020届浙江名校新高考研究联盟一模,29)(10分)乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类革兰氏阳性

细菌的总称，经革兰氏染色后呈紫色。分离乳酸菌常用MRS固体培养基:蛋白脐5g、牛肉膏5g、酵母提取

物2.5g、柠檬酸二钱1g、水500皿、乙酸钠2.5g、KzHPOJg、MnS04-4H200.12g、琼脂12.5g、MgSO「7H20

0.29g、CaC035g、葡萄糖10g。请回答：

(l)MRS培养基中琼脂的作用是。MRS培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌,灭菌时设置的压力和时间

分别为、。灭菌后制作平板用于实验,对平板进行无菌检测的方法

是。使用涂布分离法分离乳酸菌，培养后发现平板

上形成的单菌落周围会产生CaCO,溶解圈，溶解圈大小能够反映。

(2)若用革兰氏染色法对大肠杆菌进行染色，结果(填“呈紫色”或“不呈紫色”)。

(3)用乳酸菌制作酸乳时，可对乳酸菌进行固定化处理，方法:称取适量海藻酸钠配成水溶液,加入乳酸菌并

搅拌均匀,以一定速度滴入CaCL溶液中形成凝胶，使其凝固成珠状。上述采用的固定方法是,凝珠

捞出后要用无菌水冲洗,目的是洗去。

(4)乳酸菌可用于泡菜的制作,在对泡菜作亚硝酸盐定量检测时,若样液测定时的比色杯光程小于制作标准

曲线时的比色杯光程，则测得的样液中亚硝酸盐含量(填“偏大”“偏小”或“不影响”)；若泡菜

样液测得的0D值过大。超出标准曲线,则最适宜的做法是o

答案(1)凝固剂500g/cm230min将空白平板置于37℃恒温箱培养24小时，观察有无杂菌生长乳

酸菌产乳酸的量的大小(答“乳酸菌产乳酸的能力的大小”给分)

⑵不呈紫色

(3)包埋法凝珠表面的CaCb溶液

(4)偏小对样品溶液进行适当稀释

5.[2019浙江七彩阳光联考,32(-)](7分)回答下列与分离以尿素为氮源的微生物有关的问题：

(1)有些细菌含有,它们可以通过降解尿素作为其生长的氮源。请用化学反应式表示这类细菌降解

尿素的过程:O

(2)本实验需通过比较尿素固体培养基和LB固体培养基上的菌落数，了解土壤稀释液中能以尿素为氮源的

微生物的比例,因此要用(填方法)进行接种。配制培养基时选择琼脂糖作为凝固剂的原因

是。尿素溶液的灭菌选择的方法是。

(3)已知氨与纳氏试剂反应生成淡红色络合物。为了定量测定所分离的微生物对尿素的降解能力,可选用液

体培养基培养,并利用光电比色法测定培养液N出的含量。步骤如下：

第一步，预实验。将培养液过滤和脱色处理后，用纳氏试剂显色处理。用光程为1cm的比色杯在570nm处

测定光密度值。若光密度值偏低,应选择(A.增大光程，光波长不变B.增大光程，光波长增加C.

减小光程,光波长不变D.减小光程,光波长增加),再次测定光密度值,直到数据适宜为止。

第二步,标准曲线的制作。用蒸储水配制,与苗三酮试剂反应后,用比色计测

定,并制作以氨浓度与光密度值的标准曲线。

第三步,样品处理。将培养液过滤后,进行脱色处理,用纳氏试剂显色处理。

第四步,样品测定与计算。

答案（1）版酶（NH“£=O+Ha-2NH3+C0,（2）涂布分离法琼脂糖中不含N元素用G6