中间球海胆增养殖技术规范 第2部分良种生态适应性评价（征求意见稿）

DB22TechnicalspecificationforaevaluationonecologicaladaptabilityofimprovedvarietiesofStrongylocentrotusint：）本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：……。本文件主要起草人：……。本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话文件起草单位通讯地址：辽宁省大连市大连海洋大学（大连市沙河口区黑石礁街52号），联系电话义、评价指标、试验设置、评价方法和评价结果的本文件适用于辽宁省海域中间球海胆良种工厂化养殖、吊笼养殖推广的生态适应性评价工作。下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有中间球海胆良种在某一种不良环境因子胁迫培养条件下，能正常生长发育的环境因子的限值。中间球海胆良种机体对环搅中异常或不良的胁迫因子所引起的非特异性、生理性紧张状态评价指标包括环境耐受指数、生长指数、抗病害指数3个其中：环境耐受指数包括低盐耐受能力、高温耐受能力和低氧耐受能力3个二级指标，通过环境耐受试验获得。生长指数包括自然成活率和体重增加率2个二级指标评抗病害指数包括病害发生率和病害死亡率2个二级指标，通过养殖中试试验获得。特异性分子标记指数包括耐低盐分子相关标记、耐低氧分子相关标记、耐高温分子相关标记、抗病害分子相关标记4个二级指标评价。环境耐受试验包括：低盐耐受试验、高温耐受试验和低氧耐受试验。环境因子耐受试验梯通过把中间球海胆浸泡在含有不同浓度的灿烂弧菌海水中进行攻毒，设置3个试验梯度，表2抗病害试验梯度设置病菌梯度1梯度2梯度3灿烂弧菌1×103CFU/mL1×105CFU/mL1×107CFU/mL选择具有稳定遗传的优良性状的中间球海胆良种，规格13g-21g。选取活力良好、低盐耐受试验共设置5个盐度梯度（表1），每组放置15只中间球海胆。其他环境参数与暂养条件相同。试验所用不同盐度海水为砂滤后的自然海水添加淡水调配至相应盐度备用。按高温耐受试验共设置6个水温梯度（表1），其他设置同5.1.3。试验所用不同温度海水砂滤后的自然海水经加热棒加热至相应温度备用。按照每天升温0.5°C对中间球海胆良种进行驯化，以水温升至相应水温梯度作为试验起始低氧耐受试验共设置5个溶解氧梯度（表1），其他设置同5.1.3。试验所用氧气浓度的海水为砂滤后的自然海水冲入氮气达到对应的实验溶解氧浓度备用。按照每天DO降低或升高0.5抗病害试验共设置3个病菌浓度梯度（表2），其他设置同5.1.3.验所用氧气浓度的海水为砂滤后的自然海水冲入氮气达到对应的实验溶解氧浓度备用。经暂养后将海水每天升温1℃至中间球海胆良种置于60L塑料水槽中培养，在试验期间24h充气，投喂海带，每日投喂1试验周期60d。每日观察中间球海胆良种的生理状态、掉刺等应激反应或死亡的中间球海胆良种个数。以中间球海胆良种出现应激反应或死亡作为环境因子耐受能力标志，中间球海胆良种发生应激反应或死亡时的环境因子梯度值代表中间球海胆良种对该环境因子的耐受能力限海胆投放前进行数量统计。对每只个体进行称重，称完后立即放入水槽中。海胆实验过程中如果有病害发生，要对病害发生期间发病个体数量和死亡个体数量进行统计，对死亡个体及时清除。试验结束时，再次进行个体称重和数量统计。统计结果按公式(1)-(4)计算:Wt=W2−W1…………………(2)式中S表示成活率(%)，表示个体增重(g)，F表示病害发生率(%)，Dr表示病害死亡率(%)，N1为试验开始时个体总数量(只)，N2为试验结束时个体总数量(只)，W1为试验开始时个体平均重量,(g)，W2为试验结束时个体平均重量(g)，S为发生病害个体数量(只)，S1为病害死亡个体数量(只)Aiai123耐低盐能力(‰)C1耐低氧能力（mg/L）C346中间球海胆生态适应性评价方法中间球海胆生态适应性计算公式按（5）计算：式中，A表示中间球海胆生态适应性指数，数值越高表明适应能力越强；Ai表示第i个评价指标的权重值，Bi为第i个评价指数的评价值，见表1。各指数计算公式按（6）计算：式中，Bn表示B1（环境耐受指数）、B2（生长指数）、B3（特异分子标记稳定性指数），数值越高表明适应能力越强；ai表示第i个评价内容的权重值，其值利用层次分析法确定，Fi为第i个评价内容的赋值，见表3。7评价结果当2.5<A≤3时，生态适应性