人感染H7N9禽流感感控手册

序言康教育内容，方便大家进行培训。本手册官方版本，并无意侵犯任何版权，如有涉及，请联系。欢迎大家批评指正，如有新文件，该手册会持续更新。【最新报道】卫生计生部门积极做好H7N9防控工作 1【感染防治】国家卫生计生委办公厅关于加强人感染H7N9禽流感医疗救治工作的通知 3 国家卫生计生委办公厅关于印发人感染H7N9禽流感疫情防控方案(第三版)的通知 9人感染H7N9禽流感疫情防控方案(第三版) 9国家卫生计生委办公厅关于做好人感染H7N9禽流感医疗救治工作的通知 16人感染H7N9禽流感诊疗方案(2017年第1版) 17【实验室管理】关于印发《医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序》等技术规范的通知 24医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序 25人感染H7N9禽流感病毒核酸检测实验室生物安全保障基本要求 44【省市防控】湖南省人感染禽流感危重症患者救治流程图(2017年版) 59湖南省人感染禽流感患者接诊转诊流程图(2017年版) 60浙江省卫生厅人感染H7N9禽流感应急预案 61【民众教育】H7N9防控知识问答 74人感染H7N9禽流感健康教育核心信息与释义(2017年版) 78世卫组织对中国境内H7N9病例的风险评估与建议 801冬春季是H7N9及其他呼吸道传染病高发季节。去年入冬以来，由于受气候异常等多种因素影响，全球动物禽流感疫情呈高发态势，波及亚洲、欧洲、中东的近40个国家和地区。我国H7N9疫情出现病例增多、分布地区广、散发程度高等特点，病例多数散发在长三角和珠三角地区。但疫情总体特点未发生改变，接触被感染的禽或暴露于活禽经营市场是人感染的重要危险因素。现有证据表明该国例数分别为3例、1例和4例，较前一阶段明显减少)。专家预测，最近一段时间，我国内地仍将有H7N9散发病例报告。国家卫生计生委高度重视疫情防控工作，坚决贯彻落实党中央、国务院统一部署，开展了以下工作：一是进一步研究布置疫情防控工作。通过召开全国会议、重点疫情省份座谈会、印发通知等方式，强化工作部署，指导各地卫生计生部门做好疫情防控工作。二是强化属地责任，发挥联防联控工作机制作用，推动源头控制措施落实。召开联防联控工作机制会议，研究安排防控工作，指导各地落实属地管理责任，加强源头防控。要求发现病例以及外环境病毒检测阳性的地区，关闭活禽经营市场(浙江、江苏、安徽、广东等省份的一些城市和地区采取这一措施后，新增病例明显减少或无新增病例出现)；加强活禽向外地调运的管控，未经兽医部门检疫合格的活禽要限制外调。要求尚未发生疫情地区的活禽市场，进一步严格活禽经营市场准入，加强活禽检疫和清洗、消杀等预防措施，降低人群患病风险。同时，积极推动疫情发生地研究落实全面停止活禽交易、推进家禽产业转型升级和实行冰鲜禽类产品流通上市等长效措施。三是强化疫情监测和风险评估。积极指导各地加强疫情监测和报告工作。同时，进一步加强风险评估。一旦发现病例，要求立即调查核实，并有针对性地落实好相关防控措施，防止疫情扩散。四是加强患者救治。完善诊疗方案，加大基层一线医务人员的培训，加2强病例筛查和早期诊断，努力实现早发现、早报告、早诊断、早治疗，全力减少重症病例发生。调配医疗资源，保障医疗设施、药品和防护用品等供应，加强重症救治，最大限度地降低病死率。五是做好宣传教育。依法公布疫情信息、防控工作进展。组织专家宣传疫情防控健康知识，提高公众自我防护意识，及时回应公众关切。六是强化疫情防控工作督查。近期，我委两次会同农业、工商、食品药品监管等部门组成联合督导组，对疫情重点省份防控工作进行督查，指导当地加强防控措施落实。目前，各疫情发生地党委、政府十分重视疫情防控工作。各地卫生计生部门在当地党委、政府统一领导下，充分发挥联防联控工作机制，积极落实相关防控措施。一是疫情发生省份强化防控工作部署。卫生计生部门会同农业、商务、工商、食品药品监管等部门加强对本地防控措施落实情况进行联合督查。二是推动源头控制措施落实，在疫情发生地的市区范围内，暂停或永久关闭活禽经营市场；对未关停或休市的活禽经营市场进行强化管理，严格实行“1110”(即一日一清洗，一周一消毒，一月一休市，零存栏)制度；加强市场监管、活禽跨区域调运监管，推行家禽“净膛杀白上市”措施。打击非法活禽交易。三是继续加强H7N9病例、禽类带毒和外环境污染情况监测。开展疫情趋势研判和风险评估。四是强化早诊早治，加强重症病例救治，尽最大努力减少重症病例和死亡病例发生。五是加强健康知识宣教。通过门户网站、微信公众号、微博等多种形式，有针对性地向广大群众宣传疫情防控知识，并加强对养殖业从业人员、市场管理人员、活禽交易从业人员的宣传教育，指导其做好个人防护。专家建议，公众在日常生活中应避免接触病死禽类，尤其在冬春季应尽量避免直接接触活禽类、鸟类或其粪便，若接触，须尽快洗手；应购买有检疫证明的冷鲜禽、冰鲜禽及其产品。生禽肉和鸡蛋等一定要烧熟煮透，加工处理生禽肉和蛋类后要彻底洗手；食品加工过程中要做到生熟分开；培养健康的生活方式，尽可能保持正常的作息，加强体育锻炼；若有发热及呼吸道症状，应戴上口罩，尽快就诊。3国家卫生计生委办公厅关于加强人感染H7N9禽流感医疗救治工作的通知国卫发明电〔2017〕10号各省、自治区、直辖市卫生计生委，新疆生产建设兵团卫生局：目前，我国处于人感染H7N9禽流感(以下简称H7N9)疫情高发季节，新发病例持续出现。为进一步提高各地“早发现、早报告、早诊断、早治疗”的能力，加强医疗救治工作，降低病死率，切实保障人民群众健康权益，现就加强H7N9医疗救治有关工作通知如下：一、高度重视医疗救治工作要充分认识当前H7N9疫情防控形势，始终把人民群众身体健康和生命安全放在首位，遵循“依法、科学、规范、统一”的工作原则，按照“有力、有序、有效、有度”的防控方针，进一步加强H7N9医疗救治工作，尽最大努力挽救群众生命。及时收集汇总相关病例资料，并于每月15日前报我委医政医管局。二、严格落实“四早”要求各级卫生计生行政部门和各级各类医疗机构要按照《人感染H7N9禽流感诊“早发现、早报告、早诊断、早治疗”的工作要求。(一)关口前移、重心下移，加强病例筛查和早期诊断。加大对基层医疗机构和一线医务人员的培训力度，提高早期识别能力。对发热伴呼吸遒症状的患者要询问流行病学史，尤其是禽类接触或活禽市场暴露史。要及时采集呼吸道样本，尤其是下呼吸道标本进行H7N9病毒核酸检测。对高度怀疑的病例，要重复采样送检。(二)尽早实施抗流感病毒治疗。符合以下情况的，应尽可能在发病48小时内给予抗流感病毒治疗，无需等待病原学检测结果：一是符合《诊疗方案》疑似病例诊断标准，发病前10天内有禽类及其分泌物、排泄物接触史或到过活禽市场；二是符合《诊疗方案》疑似病例诊断标准，与H7N9病例有密切接触史，新近出现发热、咳嗽、咳痰等症状；三是临床考虑为流感，具备《诊疗方案》中4易发展为重症的危险因素。三、集中收治、降低病死率要按照“集中患者、集中专家、集中资源、集中救治”的原则，对H7N9重症病例实施科学合理救治。结合疫情特点和医疗资源情况，指定具备较强综合实力、符合呼吸道传染病收治要求的医院，集中收治H7N9重症病例，并组织专家对重症病例进行“一对一”救治。加强对患者病情评估，科学甄别重症患者，及时转运至定点医院，降低病死率。要进一步加强医院感染管理工作，预防和控制H7N9医院感染，科学实施个人防护措施。联系人：国家卫生计生委医政医管局李亚电话：68791875邮箱：bmaylzyc@163.com国家卫生计生委办公厅(信息公开形式：主动公开)5各省、自治区、直辖市卫生厅局，新疆生产建设兵团卫生局：为进一步指导医疗机构做好人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制工作，降低发生人感染H7N9禽流感医院感染的风险，规范医务人员行为，我委组织有《人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制技术指南(2013年版)》。现印发给你们，请遵照执行。附件：人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制技术指南(2013年版).doc国家卫生和计划生育委员会办公厅为进一步指导医疗机构做好人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制工作，降低发生人感染H7N9禽流感医院感染的风险，规范医务人员行为，特制定本技术指南。一、基本要求HN传播途径和易感人群，结合实际情况，建立预警机制，制定应急预案和工作流程。(二)医疗机构应当开展临床医务人员的培训，提高医务人员对人感染H7N96禽流感医院感染预防与控制意识、报告与处置能力，做到早发现、早诊断、早隔离、早报告。(三)医疗机构应当加强医院感染监测工作，发现疑似或确诊人感染H7N9禽流感感染患者时，应当按照有关要求，及时报告，做好相应处置工作。(四)医疗机构应当规范消毒、隔离和防护工作，为医务人员提供充足、必要、符合要求的消毒和防护用品，确保消毒、隔离和个人防护等措施落实到位。(五)严格按照《医疗机构消毒技术规范》的规定，做好医疗器械、污染物品、物体表面、地面等清洁与消毒；按照《医院空气净化管理规范》的规定，加强诊疗环境的通风，必要时进行空气消毒。(六)在人感染H7N9禽流感感染患者诊治过程中产生的医疗废物，应根据《医疗废物管理条例》和《医疗卫生机构医疗废物管理办法》的有关规定进行管理和处置。二、医院感染预防与控制1.应当建立疑似、确诊患者隔离、转出和救治的工作流程，其建筑布局和工作流程应当符合《医院隔离技术规范》等有关要求。发热门诊出入口应设有手卫生设施。2.医务人员在诊疗工作中应当遵循标准预防原则，接触所有患者时均应当戴外科口罩，严格执行手卫生等措施。接触疑似患者或确诊患者时应当戴医用防护口罩。3.医务人员应当掌握人感染H7N9禽流感感染的流行病学特点与临床特征，对疑似或确诊患者立即采取隔离措施并及时报告。患者转出后按《医疗机构消毒技术规范》进行终末处理。4.医务人员进入或离开发热门诊时，要按照有关要求，正确穿脱防护用品。5.陪伴者及病情允许的患者应当戴外科口罩。(二)急诊。1.应当建立预检分诊制度，制定并完善重症患者的转出、救治应急预案并严格执行。2.应当设置一定的隔离区域以满足疑似或确诊患者就地隔离和救治的需7要。要3.医务人员应当严格遵照标准预防的原则进行个人防护和诊疗环境的管4.诊疗区域应保持良好的通风并定时清洁消毒。1.应当备有应急隔离室，用于疑似或确诊患者的隔离与救治，建立相关工作制度及流程，备有充足的应对急性呼吸道传染病的消毒和防护用品。2.病区(房)内发现疑似或确诊患者，启动相关应急预案和工作流程，对患者实施及时有效隔离和救治。3.疑似或确诊患者宜专人诊疗与护理，限制无关医务人员的出入，原则不探视；有条件的可以安置在负压病房或及时转到有隔离和救治能力的专科医院。患者转出后按《医疗机构消毒技术规范》进行终末处理。(四)收治疑似或确诊人感染H7N9禽流感感染患者的病区(房)。1.建筑布局和工作流程应当符合《医院隔离技术规范》等有关要求。2.对疑似或确诊患者应当及时采取隔离措施，疑似患者和确诊患者应当分开安置；疑似患者进行单间隔离，经病原学确诊的同类型感染患者可以同室安置。3.根据人感染H7N9禽流感的传播途径，在实施标准预防的基础上，采取飞沫隔离和接触隔离等措施。具体措施包括：(1)医务人员进入或离开隔离病房时，应当遵循《医院隔离技术规范》的有关要求，并正确穿脱防护用品。(2)原则上患者的活动限制在隔离病房内，若确需离开隔离病房或隔离区域时，应当采取相应措施如佩戴外科口罩，防止造成交叉感染。(3)用于疑似或确诊患者的听诊器、体温计、血压计等医疗器具应专人专用。非专人专用的医疗器具使用后，应当进行彻底清洁和消毒。(4)严格探视制度，原则上不设陪护。1.医务人员应当按照标准预防的原则，根据其传播途径采取飞沫隔离和接触隔离的防护措施。2.医务人员使用的防护用品应当符合国家有关标准。3.每次接触患者前后应当严格遵循《医务人员手卫生规范》要求，及时正确8进行手卫生。4.医务人员应当根据导致感染的风险程度采取相应的防护措施。(1)接触患者的血液、体液、分泌物、排泄物、呕吐物及污染物品时应戴清洁手套，脱手套后洗手。(2)可能受到患者血液、体液、分泌物等物质喷溅时，应戴外科口罩或者医用防护口罩、护目镜、穿隔离衣。(3)对疑似或确诊患者进行气管插管操作时，应戴医用防护口罩、护目镜、穿隔离衣。(4)外科口罩、医用防护口罩、护目镜、隔离衣等防护用品被患者血液、体液、分泌物等污染时应当及时更换。(5)正确穿戴和脱摘防护用品，脱去手套或隔离服后立即洗手或手消毒。(6)处理所有的锐器时应当防止被刺伤。(7)每个患者用后的医疗器械、器具应当按照《医疗机构消毒技术规范》的要求进行清洁与消毒。者的管理。1.应当对疑似或确诊患者及时进行隔离，并按照指定路线由专人引导进入病2.病情允许时，患者应当戴外科口罩；指导患者咳嗽或者打喷嚏时用卫生纸遮掩口鼻，在接触呼吸道分泌物后应当使用清洁剂洗手或者使用手消毒剂消毒双手。3.患者出院、转院后按《医疗机构消毒技术规范》进行终末消毒。4.患者死亡后，应当及时对尸体进行处理。处理方法为：用双层布单包裹尸体，装入双层尸体袋中，由专用车辆直接送至指定地点火化；因民族习惯和宗教信仰不能进行火化的，应当经上述处理后，按照规定深埋。9流感疫情防控方案(第三版)的通知国卫办疾控发〔2014〕9号各省、自治区、直辖市卫生计生委(卫生厅局)，新疆生产建设兵团卫生局，中国疾病预防控制中心：为进一步做好人感染H7N9禽流感疫情的预防控制工作，保护人民群众的身体健康和生命安全，我委组织专家对《人感染H7N9禽流感疫情防控方案(第二版)》进行了修订，形成了《人感染H7N9禽流感疫情防控方案(第三版)》。现印发给你们,请结合实际参照执行。。国家卫生计生委办公厅28号)要求，为进一步指导各地规范开展人感染H7N9禽流感病例的发现、报告、流行病学调查、实验室检测、病毒变异监测和密切接触者管理等防控工作，保障人民群众身体健康和生命安全，特制定本方案。一、适用范围此方案适用于现阶段医疗卫生机构开展人感染H7N9禽流感疫情防控工作，并将根据对该疾病认识的深入和疫情形势变化适时更新。二、病例的发现、报告1.人感染H7N9禽流感疑似病例与确诊病例定义参照《人感染H7N9禽流感2.疑似聚集性病例是指7天内在小范围(如一个家庭、一个社区等)发现1例确诊病例，并同时发现1例及以上疑似病例，提示可能存在人际传播或因共同暴露而感染。在上述条件下，发现2例确诊病例的，判定为聚集性病例。(二)发现与报告。各级各类医疗机构对就诊的流感样病例，要询问其禽类或活禽市场的暴露史，重点关注从事活禽养殖、屠宰、贩卖、运输等行业的人群。在发现人感染H7N9禽流感病例后，应当于24小时内填写传染病报告卡并进不具备网络直报条件的医疗机构，应当于诊断后24小时内填写并寄出传染病报告卡，县级疾控中心在接到报告后立即进行网络直报。三、病例的流行病学调查、采样与检测(一)流行病学调查。县级疾控中心接到辖区内医疗机构报告的人感染H7N9禽流感确诊病例后，应当按照中国疾控中心制定的《人感染H7N9禽流感流行病学调查方案》进行调查。对于单例病例，调查内容主要包括病例基本情况、发病就诊经过、临床表现、实验室检查、诊断和转归情况、病例家庭及家居环境情况、暴露史、密切接触者情况等。对病例可能暴露的禽类饲养或交易等场所，应当采集禽类粪便、笼具涂拭标本等环境标本开展病原学检测。必要时根据调查情况组织开展病例主动搜索。对于疑似聚集性病例和聚集性病例，在上述工作基础上，要立即排查疑似病例，并重点调查病例的暴露史及病例之间的流行病学关联，对从病例和环境标本中分离到的病毒进行同源性分析，明确是否存在人际传播或因共同暴露而感染。(二)标本采集、运送与实验室检测。当医务人员怀疑病人感染H7N9禽流感病毒时，应当尽早采集其上、下呼吸道标本(尤其是下呼吸道标本)和发病7天内急性期血清以及与急性期血清采集时间间隔2-4周的血清等。有条件开展核酸检测的医疗机构要对呼吸道标本开展H7N9禽流感病毒核酸检测，进行病例诊断；没有条件开展核酸检测的医疗机构应当尽快利用快速抗原检测试剂进行甲型流感病毒抗原检测，并将甲型流感病毒抗原检测阳性的标本送当地流感监测网络实验室进一步开展H7N9禽流感病毒核酸检测。标本采集、包装、运送等应当严格按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样具备BSL-3级生物安全条件的省级疾控中心应当在2周内完成病毒分离工作，具备序列测定能力的实验室应当在病毒分离后72小时内完成全基因组序列测定工作，并将序列提交国家流感中心流感病毒序列数据库。未能进行序列测定的病毒48小时内按要求送国家流感中心；未能开展病毒分离的网络实验室需将H7核酸检测阳性病例的原始标本48小时内送国家流感中心，国家流感中心在2周内完成病毒分离和序列测定工作，并将序列提交流感病毒序列数据库进行反馈。各医疗机构采集的血清标本送当地流感监测网络实验室，由当地网络实验室将血清标本分别送省级疾控中心和国家流感中心开展相关抗体检测。各级疾控中心要加强对活禽市场和家禽养殖场等重点地区环境标本的采集与检测工作。具体操作要点参见中国疾控中心制定的《人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略》。四、信息管理对于确诊病例，报告病例的医疗机构要通过人感染H7N9禽流感信息管理系统及时填报病例的病情转归信息，并在其出院或死亡后24小时内网上填报《人感染H7N9禽流感病例调查表——临床部分》(详见《人感染H7N9禽流感流行病学调查方案》)。对于死亡病例，要认真填写死亡医学证明书的相关内容，通过死因登记报告信息系统进行网络直报。所在辖区的县级疾控中心完成初步调查后，要网上填报《人感染H7N9禽流感病例调查表——流行病学部分》(详见《人感染H7N9禽流感流行病学调查方案》)，并根据调查进展，及时补充完善调查表信息，每日更新其中的密切接触者医学观察情况。如已经网络直报的病例转院治疗，转出病例的医疗机构要通过人感染H7N9禽流感信息管理系统录入病例的转出情况。接收病例的医疗机构要通过上述系统对该病例信息进行查询核实，并录入病例的收治情况。聚集性病例一经确认后，应当于2小时内通过突发公共卫生事件报告管理信息系统进行网络直报，并根据事件进展及时进行进程报告和结案报告。开展实验室检测的疾控中心要及时将标本信息和检测结果录入到中国流感监测信息系统中。对未按要求进行信息报告和标本(毒株)报送的省份，国家卫生计生委将予以通报批评。国家卫生计生委每月定期公布全国人感染H7N9禽流感发病数和死亡数，各省级卫生计生行政部门及时发布本行政区域的个案信息。外环境标本检测阳性结果由各地疾控中心报告同级卫生计生行政部门和上级疾控中心，由卫生计生行政部门通报同级农业部门。病毒发生变异、出现人传人疫情等重要信息，要经国家级联防联控机制专家组审核评估后发布。五、病例管理和感染防护医疗机构应当参照《人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制技术指南(2013年版)》(卫发明电〔2013〕6号)，落实病人隔离、医院感染预防与控制和医务人员防护等措施。疾控中心人员在开展流行病学调查和样品采集时，应当做好个人防护，并指导涉禽从业人员和染疫禽类处置人员做好个人防护。六、可疑暴露者和密切接触者的管理(一)可疑暴露者的管理。可疑暴露者是指暴露于H7N9禽流感病毒检测阳性的禽类、环境，且暴露时未采取有效防护的养殖、屠宰、贩卖、运输等人员。对可疑暴露者，由县级卫生计生行政部门会同农业、工商、交通等相关部门，组织进行健康告知，嘱其出现发热(腋下体温≥37.5℃)及咳嗽等急性呼吸道感染症状时要及时就医，并主动告知其禽类接触情况。(二)密切接触者管理。密切接触者是指诊治疑似或确诊病例过程中未采取有效防护措施的医护人员或曾照料患者的家属；在疑似或确诊病例发病前1天至隔离治疗或死亡前，与病人有过共同生活或其他近距离接触情形的人员；或经现场调查人员判断需作为密切接触者管理的其他人员。对密切接触者，由县级卫生计生行政部门组织进行追踪、医学观察，医学观察期限为自最后一次暴露或与病例发生无有效防护的接触后7天。一旦密切接触者出现发热(腋下体温≥37.5℃)及咳嗽等急性呼吸道感染症状，则立即转送至医疗机构就诊，并采集其咽拭子，送当地流感监测网络实验室进行检测。七、流感样病例强化监测加强流感样病例和不明原因肺炎监测。各地要在既往流感样病例监测工作基础上，提高监测强度，增加标本采集和检测数量，南方省份每家流感监测哨点医院每周采集流感样病例和人感染H7N9禽流感相关病例标本20份，北方省份流感监测网络实验室开展检测。在发生人感染H7N9禽流感确诊病例的县(区)内，应当在病例确诊后开展为期2周的强化监测。二级及以上医疗机构对符合流感样病例定义的门急诊患者，以及住院严重急性呼吸道感染患者，应当及时采集呼吸道标本，询问暴露史，并按照中国疾控中心制定的《人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略》开展相关检测工作。各医疗机构每周汇总并上报流感样病例总数、住院严重急性呼吸道感染患者总数、采样人数、本医院检测人数、送疾控中心检测人数、阳性数及阳性结果等。具体上报方式参照中国疾控中心印发的强化监测信息报告有关技术要求。各地可根据工作情况适当扩大监测范围和时间。八、疫情形势研判建议各级卫生计生行政部门应当根据人感染H7N9禽流感的疫情形势、病原学监测和研究进展及时组织专家进行疫情形势研判，达到突发事件标准时，应当按照相关预案及时启动相应应急响应机制，并按照相关规定及时终止响应。各级卫生计生行政部门要充分发挥联防联控机制牵头部门的作用，根据疫情形势建议当地政府采取有针对性的防控措施：在未发生疫情的地市，建议采取活禽市场“一日一清洗，一周一消毒，一月一休市”措施；在发生疫情地市，建议采取休市和彻底消毒措施；在有条件的地市，鼓励采取季节性休市措施。九、做好健康教育工作各地要积极做好信息发布和舆论引导，及时回应社会关切，引导公众科学、理性地应对疫情，并做好疫情防控知识宣传，指导并促进公众养成良好的卫生习惯，尤其要加强对从事活禽养殖、屠宰、贩卖、运输等行业人群的健康教育和风险沟通工作。十、加强医疗卫生机构专业人员培训与督导检查医疗卫生机构应当开展人感染H7N9禽流感病例的发现与报告、流行病学调查、标本采集、实验室检测、病例管理与感染防控、风险沟通等内容的培训。各级卫生计生行政部门负责组织对本辖区内的防控工作进行督导和检查，发现问题及时处理。十一、大力开展爱国卫生运动各级爱卫会要切实发挥议事协调作用，强化组织管理和督促检查，结合卫生城镇创建活动，广泛发动群众，动员基层单位，在城乡范围内深入开展环境卫生集中整治行动。要重点加强农贸市场的卫生管理，着力解决活禽销售、宰杀方面存在的突出卫生问题。疗救治工作的通知国卫发明电〔2017〕3号各省、自治区、直辖市卫生计生委，新疆生产建设兵团卫生局：病例数明显高于往年同期水平，新发病例和新发疫情地区持续出现。为有效应对H7N9疫情，做好H7N9医疗救治有关工作，切实保障人民群众健康安全，现将有关要求通知如下：一、高度重视医疗救治工作各级卫生计生行政部门要高度重视H7N9医疗救治工作，充分认识当前H7N9疫情防控形势，提高责任意识，按照我委的统一部署，坚持把人民群众身体健康和生命安全放在首位，强化工作落实。加强对定点医院的指导和管理，为定点医院配备必要的药品、消毒和个人防护用品。做好本辖区床位、医疗设备设施、抗病毒药物和防护用品等医疗资源准备和调配工作，保证抗病毒药品及时足量供应。加强H7N9病例和不明原因肺炎病例的监测报告工作。加大督导检查力度，做好H7N9医疗救治工作。二、科学开展医疗救治N附件，以下简称《诊疗方案》)。各地要认真组织学习和培训，严格按照《诊疗方案》与相关技术方案要求，提升医务人员对H7N9早期识别、诊断与治疗能力。坚持“早发现、早报告、早诊断、早治疗”原则，提高对疑似病例的警惕性，对流感样病例抗病毒治疗前采集标本进行检测，并及早进行抗病毒治疗。专家、集中资源、集中救治”原则，对H7N9重症病例实施科学合理救治。结合当地疫情特点和医疗资源情况，指定具备较强综合实力、符合呼吸道传染病收治要求的医院，集中收治H7N9重症病例。加强对患者病情评估，科学甄别重症患者，为患者提供合理的治疗。充分发挥省级专家组和定点医院的作用，提高重症病例的救治成功率，降低病死率。三、加强医务人员培训各地卫生计生行政部门要做好医务人员培训工作，重点加强定点医院、县级医院医务人员相关诊断治疗、消毒隔离和个人防护等知识的培训，使其熟练掌握诊疗知识和工作流程，提高对H7N9病例的早期识别、早期检测、早期抗病毒治疗的意识和能力。省级临床专家组要对省内H7N9病例医疗救治工作加强技术支援和业务指导。四、进一步加强医院感染管理工作医疗机构要严格执行人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制工作要求，完善管理制度，落实岗位责任，严格执行消毒隔离，科学实施个人防护措施。要严格执行传染病预检分诊管理的工作要求，设置相对独立的发热门诊和隔离观察室。发热门诊要保证充足的候诊、就诊空间，改善通风条件，及时分流患者。加强临床实验室生物安全管理，严格实验室质量控制。联系人：国家卫生计生委医政医管局李亚电话68791875国家卫生计生委办公厅人感染H7N9禽流感是由甲型H7N9禽流感病毒感染引起的急性呼吸道传染病，其中重症肺炎病例常并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脓毒性休克、多器官功能障碍综合征(MODS)，甚至导致死亡。早发现、早报告、早诊断、早治疗，加强重症病例救治，中西医并重，是有效防控、提高治愈率、降低病死率的关键。我国部分省市人感染H7N9禽流感病例呈散发分布，相互之间没有流行病学关联，流行病学的主要特征没有变化，分离到的病毒株遗传学特征和既往流行类似。一、病原学流感病毒属正粘病毒科，病毒颗粒呈多形性，其中球形直径80~120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。依据其外膜血凝素(H)和神经氨酸酶(N)禽流感病毒属甲型流感病毒属，除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H7N9、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3、H5N6、H10N8等，近些年主要为H7N9禽流感病毒。HN流感病毒为新型重配病毒，编码HA的基因来源于H7N3，编码NA的禽流感病毒不同，H7N9禽流感病毒对禽类的致病力很弱，在禽类间易于传播且难以发现，增加了人感染的机会。禽流感病毒普遍对热敏感，加热至65℃30分钟或100℃2分钟以上可灭活。对低温抵抗力较强，在4℃水中或有甘油存在的情况下可保持活力1年以上。二、流行病学有数起家庭聚集性发病，尚无持续人际间传播的证据，应警惕医院感染的发生。(二)传播途径。呼吸道传播或密切接触感染禽类的分泌物或排泄物而获得感染；或通过接触病毒污染的环境感染。(三)高危人群。在发病前10天内接触过禽类或者到过活禽市场者，特别是中老年人。三、发病机制和病理人类上呼吸道组织和气管主要分布有唾液酸α-2,6型受体(人流感病毒受体)；人类肺组织分布有唾液酸α-2,3型受体(禽流感病毒受体)和唾液酸α-2,6型受体。H7N9禽流感病毒可以同时结合唾液酸α-2,3型受体和唾液酸α-2,6型受体，但H7血凝素与唾液酸α-2,3型受体亲合力更高，较季节性流感病毒更容易感染人的下呼吸道上皮细胞，病毒可持续复制，重症病例病毒核酸阳性可持续H7N9禽流感病毒感染人体后，可以诱发细胞因子风暴，如干扰素诱导蛋白L全身炎症反应，可出现ARDS、休克及MODS。病理检查显示肺急性渗出性炎症改变，肺出血、弥漫性肺泡损伤和透明膜形成等。四、临床表现肺炎为主要临床表现，患者常出现发热、咳嗽、咳痰，可伴有头痛、肌肉酸痛、腹泻或呕吐等症状。重症患者病情发展迅速，多在发病3~7天出现重症肺炎，体温大多持续在39℃以上，出现呼吸困难，可伴有咯血痰。常快速进展为ARDS、脓毒性休克和MODS。少数患者可为轻症，仅表现为发热伴上呼吸道感染症状。1.血常规。早期白细胞总数一般不高或降低。重症患者淋巴细胞、血小板减少。2.血生化检查。多有C反应蛋白、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶升高，肌红蛋白可升高。3.病原学及相关检测。采集呼吸道标本(如鼻咽分泌物、痰、气道吸出物、支气管肺泡灌洗液)送检，下呼吸道标本检测阳性率高于上呼吸道标本。标本留取后应及时送检。(1)核酸检测：对可疑人感染H7N9禽流感病例宜首选核酸检测。对重症病例应定期检测呼吸道分泌物核酸，直至阴转。(2)甲型流感病毒通用型抗原检测：呼吸道标本甲型流感病毒通用型抗原快速检测H7N9禽流感病毒阳性率低。对高度怀疑人感染H7N9禽流感病例，应尽快送检呼吸道标本检测核酸。(3)病毒分离：从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒。(4)血清学检测:动态检测急性期和恢复期双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4倍或以上升高。(三)胸部影像学检查。发生肺炎的患者肺内出现片状阴影。重症患者病变20进展迅速，常呈双肺多发磨玻璃影及肺实变影像，可合并少量胸腔积液。发生ARDS时，病变分布广泛。(四)预后。人感染H7N9禽流感重症患者预后差。影响预后的因素可能包括患者年龄、基础疾病、并发症等。五、诊断与鉴别诊断1.流行病学史。发病前10天内，有接触禽类及其分泌物、排泄物，或者到过活禽市场，或者与人感染H7N9禽流感病例有密切接触史。2.诊断标准。(1)疑似病例:符合上述流行病学史和临床表现，尚无病原学检测结果。(2)确诊病例:有上述临床表现和病原学检测阳性。(3)重症病例：符合下列1项主要标准或≥3项次要标准者可诊断为重症病例。主要标准：①需要气管插管行机械通气治疗；②脓毒性休克经积极液体复苏后仍需要血管活性药物治疗。Pa3.易发展为重症的危险因素。(2)合并严重基础病或特殊临床情况，如心脏或肺部基础疾病、高血压、糖尿病、肥胖、肿瘤、免疫抑制状态、孕产妇等。(4)淋巴细胞计数持续降低。(6)胸部影像学提示肺炎快速进展。主要依靠病原学鉴别诊断。六、治疗(一)隔离治疗。对疑似病例和确诊病例应尽早隔离治疗。21(二)对症治疗。根据患者缺氧程度可采用鼻导管、经鼻高流量氧疗、开放面罩及储氧面罩进行氧疗。高热者可进行物理降温，或应用解热药物。咳嗽咳痰严重者可给予止咳祛痰药物。(三)抗病毒治疗。对怀疑人感染H7N9禽流感的患者应尽早应用抗流感病毒药物。1.抗病毒药物使用原则。(1)在使用抗病毒药物之前宜留取呼吸道标本。(2)抗病毒药物应尽早使用，无需等待病原学检测结果。2.抗病毒药物。重症病例剂量可加倍，疗程可适当延长。1岁及以上年龄的儿童患者应根据体重给药(宜选择儿童剂型)。Peramivir重症病例或无法口服者可用帕拉米韦氯化钠注射临床需要调整。每次10mg(分两次吸入)。不建议用于重症或有并发症的患者。1.热毒犯肺，肺失宣降证(疑似病例或确诊病例病情轻者)。症状：发热，咳嗽，甚者喘促，少痰，或头痛，或肌肉关节疼痛。舌红苔薄，脉数滑。治法：清热解毒，宣肺止咳。参考处方和剂量：银翘散、白虎汤、宣白承气汤。22加减：咳嗽甚者加枇杷叶、浙贝母。中成药：可选择疏风解毒胶囊、连花清瘟胶囊、金莲清热泡腾片等具有清热解毒，宣肺止咳功效的药物。中药注射液：痰热清注射液、喜炎平注射液、热毒宁注射液、血必净注射液、参麦注射液。2.热毒壅肺，内闭外脱证(临床表现高热、ARDS、脓毒性休克等患者)。症状：高热，咳嗽，痰少难咯，憋气，喘促，咯血，或见痰中带血，伴四末不温，四肢厥逆，躁扰不安，甚则神昏谵语。舌暗红，脉沉细数或脉微欲绝。治法：解毒泻肺，益气固脱。参考处方和剂量：宣白承气汤、参萸汤、参附汤。g加减：高热、神志恍惚、甚至神昏谵语者，上方送服安宫牛黄丸；肢冷、汗出淋漓者加煅龙骨、煅牡蛎；中成药：可选择参麦注射液、参附注射液、痰热清注射液、血必静注射液、喜炎平注射液、热毒宁注射液。3.以上中药汤剂、中成药和中药注射液不作为预防使用，宜尽早中医治疗。(五)加强支持治疗，维持内环境稳定，防治继发感染。一旦出现继发感染征象或存在感染的高危因素，应合理选择抗菌药物治疗。(六)重症病例的治疗。采取抗病毒、抗休克、纠正低氧血症、防治MODS和继发感染、维持水电解质平衡等综合措施。对出现呼吸功能障碍者给予吸氧及其他相应呼吸支持,发生其他并发症的患者应积极采取相应治疗。1.氧疗。患者病情出现下列情况之一,应进行氧疗:①吸空气时SpO2<92%。②呼吸频率增快(呼吸频率>24bpm),呼吸困难或窘迫。2.呼吸功能支持。机械通气:患者经氧疗2小时,SpO2仍<92%,或呼吸困难、呼吸窘迫改善不明23显时,宜进行机械通气治疗。可参照ARDS机械通气的原则进行治疗。ARDS治疗中可发生纵隔气肿、呼吸机相关肺炎等并发症,应当引起注意。无创正压通气:出现呼吸窘迫和(或)低氧血症、氧疗效果不佳的患者,可早期尝试使用无创通气,推荐使用口鼻面罩。无创通气治疗1~2小时无改善,需及早考虑实施有创通气。有创正压通气：运用ARDS保护性通气策略,采用小潮气量，合适的PEEP，积极的肺复张，严重时采取俯卧位通气。有条件的可根据病情选择体外膜氧合制根据呼吸道及密切接触传播途径采取预防和控制措施，加强个人防护。在疾病的不同阶段，针对不同的有创操作，采取相应措施，预防继发感染。具体措施参考国家卫生计生委制定的人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制技术指南等相关技术方案执行。八、解除隔离标准HN附件：人感染H7N9禽流感早检早治流程图人感染H7N9禽流感早检早治流程图24测标准操作程序》等技术规范的通知各省、自治区、直辖市卫生厅局(卫生计生委)，新疆生产建设兵团卫生局：根据人感染H7N9禽流感疫情联防联控工作机制会议议定事项及《关于医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》(卫办医政函〔2013〕酸检测工作，我委组织制定了《医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作从国家卫生和计划生育委员会网站医政管理栏目中下载)，供医院在开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测时参考使用。各省级卫生(卫生计生)行政部门要按照《通知》有关要求，组建省级疾控机构实验室和省级临床检验专家共同组成的专家组，对医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作提供技术指导和支持，负责医院实验室核酸检测质量控制工作。要组织本辖区人感染H7N9禽流感病毒核酸检测定点医院检验人员进行培训，认真学习掌握相关要求，提高检验人员技术能力和水平。医院开展病毒核酸检测时，应当按照技术规范有关要求，规范开展检测工作，重视实验室质量控制，保障实验室生物安全，做好检验人员职业防护，保证检测结果科学、可靠。附件：1.医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序.docx2.H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)说明书.docx国家卫生和计划生育委员会办公厅25医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序确保人感染H7N9禽流感病毒核酸检测过程标准化、规范化，降低人为不规范操作对检测结果造成的影响，保证结果的准确性和可重复性。二、适用范围医疗机构临床基因扩增检验实验室按照《关于医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》(卫办医政函〔2013〕383号)和《关于做好医疗机构人感染H7N9禽流感检测试剂供给保障工作的通知》(卫发明电〔2013〕29号)有关要求，使用国家疾病预防控制中心制备或商品化试剂盒开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作。三、样本采集、运送和保存尽量采集病例发病早期的呼吸道样本(上呼吸道样本包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液,下呼吸道样本包括痰液、气管吸取物、肺洗液、肺组织等)。可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高检出率。患者有下呼吸道样本时，应优先采集。根据试剂说明书对样本采集方法有关要求，制订样本采集标准操作程序(SOP)，并组织样本采集人员进行培训及考核。样本的采集应当严格按照SOP进行。样本采集后，按照《人间传染病的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒的相关规定进行包装，用密封容器立即送往实验室。若气温高时，需放入冰块降26暂时保存，24小时内无法检测的样本则应置于≤-70℃状态保存。如无-70℃保存条件时，可于-20℃冰箱暂存。样本避免反复冻融。样本采集、处理、运输及保存不当时，可因病毒RNA降解出现假阴性结果，也可因为样本“污染”出现假阳性结果。样本的核酸提取应当在样本处理区进行。按所采用的商品化试剂盒说明书要求，取适量待检样本、阳性及阴性对照进行核酸提取。样本应尽可能新鲜，提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA降解。提取过程如涉及离心步骤，应采用低温冷冻离心机；在生物安全柜内进行加样、提取过程中，为防止RNA降解，可将试管架置于托盘内平铺的碎冰上。提取好的RNA应及时用于检测，否则应当-70℃保存。如无-70℃保存条件，可于-20℃冰箱暂存。试剂准备应当在试剂准备区进行。根据所用的试剂盒，样本可进行甲型流感病毒核酸、禽流感H7亚型或H7N9病毒核酸的检测。试剂的配制按所用商品化试剂盒说明书进行。除酶混合物外，其它试剂在使用前应当在室温充分复融，混匀并瞬时低速离心。反应液分装时尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免管内溶液泄露污染仪器。分装有扩增反应液的反应管应当扣盖或装入密实袋内再转移至样本处理区。加样应当在样本处理区进行。加样时应当使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。按试剂、仪器说明书完成加样和PCR反应管准备。27PCR扩增检测在扩增区进行。待检PCR管转移至扩增区，按顺序置于PCR仪上，编辑样本信息，按试剂和仪器说明书设定循环参数。设定以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线(无规则的噪音线)的最高点为原则，且Ct值应大于所设置的扩增循环数(或显示为undet)。使用仪器配套软件自动分析结果。检测过程对可能出现的假阳性和假阴性进行质量控制，除了检测商品试剂盒所提供阳性和阴性对照外，每次临床样本检测时，至少应当有1份弱阳性和3份阴性质控样本(多份阴性质控样本设置对实验室“污染”所致假阳性的监控更为有效)，随机放在所检测标本的中间。弱阳性质控样本可为检测阳性的灭活稀释后保存的临床样本、灭活病毒或假病毒颗粒等，如所采用的商品化试剂盒有“内标”控制假阴性，或弱阳性质控样本来源困难，可暂不设弱阳性质控。阴性质控样本采用标本采集管内溶液即可。质控样本应与临床标本同等对待，参与样本核酸提取和扩增检测全过程。试剂盒中的阳性和阴性对照用于判断实验室的有效性，按试剂盒说明书进行。(七)实验结果的判定与解释。按照试剂盒说明书进行。对于出现弱阳性结果的样本应进行重复检测，并注意与可能的实验室轻度或样本交叉“污染”所致假阳性结果区别。五、检测结果报告按照试剂盒说明书进行。六、其它注意事项(一)人感染H7N9禽流感病毒实验室活动、样本采集和运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。从事人感染禽流感检测的技术人员必须经过生物安全培训并具备相应的实验技能，在检测过程中必须采28取生物安全防护措施(使用眼罩、N95型口罩等)。样本核酸提取必须在Ⅱ级生物安全实验室，经过年检合格的二级生物安全柜内进行。实验室应具有良好的通。(二)注意仪器设备的日常和定期维护，加样器、扩增仪和温育设备应进行定期校准。试剂盒及一次性使用的无DNA酶和RNA酶PCR反应管、离心管、带滤芯吸头等应进行每批质检。(三)实验应严格分区操作；各区物品、工作服等均应当专区专用，不得交叉使用。实验后应及时清洁工作台，以防污染。(四)每批实验室后，可采取实验室通风、10%次氯酸钠溶液擦洗地台面、紫外照射等措施，消除可能存在的扩增产物气溶胶污染。(五)使用中国疾控中心制备试剂开展检测工作时，可参考相应试剂盒说明2.H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)说明书【产品名称】英文名称：DiagnosticKitforH7N9subtypeavianfluvirusRNA(FluorescencePCR)【包装规格】48人份/盒。【预期用途】本试剂用于对咽拭子样本中H7N9亚型禽流感病毒RNA进行定性检测，用于H7N9禽流感病毒感染的辅助诊断及流行病学监控。和NA基因设计特异性引物和Taqman探针，通过荧光PCR检测仪进行检测，从而实现对H7N9亚型禽流感病毒RNA的定性检测。试剂盒以正常人上皮细胞中广泛存在的核糖核酸酶P(RNaseP)的mRNA为正常人体细胞对照，对提取和检测过程进行监控。【主要组成成分】29名称成分规格数量(管)H7反应液含内标RNP、H7亚型特异基因的引物探针混合液1.0ml/管1N9反应液含内标RNP、N9亚型特异基因的引物探针混合液1.0ml/管1逆转录酶逆转录酶，不可用其他同类逆转录酶替代60μl/管1阳性对照RNP、H7、N9RNA假病毒混合物1.0ml/管1阴性对照DEPC水1.0ml/管1本品各组成成分均不得与其他产品或不同批号产品中的相应组成成分进行互换。本品不包含，但对试验必须的设备和试剂：生物安全柜、台式离心机、旋涡震荡器、拭子、采样管、无菌病毒采样液、1.5ml无核酸酶的离心管、全自动荧光PCR检测仪专用PCR扩增管和核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法，北京金豪制药股份有限公司，Cat：BJH101)。【储存条件及有效期】-20℃冷冻保存，有效期2个月，阳性对照反复冻融【适用仪器】RG3000、LightCycler、ABIPrism7500、ABIPrism7000型全自动荧光PCR检测仪。【样本要求】1.样本类型：咽拭子。推荐使用金豪公司生产的微生物采样及运送管(12人份/盒)。2.拭子、采样管和保存液：2.1拭子选择：应使用头部为合成纤维(例如，聚酯纤维)，杆部为铝或塑料的拭子。ml病毒采样液。2.3无菌病毒采样液：应含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生产的抗生素，缓冲液，经无菌处理。3.样本采集、运输和保存：N传染的病原微生物名录》”中高致病性禽流感病毒进行管理。303.1采集：采集病人发病3日内的咽拭子标本，用于病原检测。用微生物采样及运送管内的采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放入装有3ml保存液的15ml外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥，外表贴上带有唯一识别号码的标签。4℃暂存并在48小时内送达实验室。3.2保存和运输：新鲜采集样本应在4℃条件下48小时运送到检测实验室。保存样本可在-20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于-70℃冰箱。冷冻样本应在冷冻条件下送至实验室。运输时在包装箱内填充吸水材料，运输过程中保持标本采集管直立状态，不能倾斜。样本送至实验室后，立即进行处理和分装，避免反复冻融。临床样本保存在4.咽拭子标本的处理(至少40下)，以洗脱拭子上粘附的病毒及含有病毒的细胞等，用于病毒分离时，需要冻融一次(防止多次冻融)，使细胞破裂，释放病毒颗粒。然后在4℃条件下，10000rpm离心20分钟，用上清接种细胞或直接提取RNA。如果发现有细菌污染，须用滤器过滤除菌。【检验方法】1.核酸提取：l咽拭子样本进行核酸提取。采用北京金豪制药股份有限公司的核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法)，该试剂盒可用于对呼吸道悬浮液样本中的病毒RNA提取，并按试剂盒说明书要求操作。本品的阳性对照和阴性对照均参与核酸提取。1.1.准备及注意事项：混匀，并在瓶身上加以标识。1.1.2吸取所需的洗脱液，加至一无核酸酶的eppendorf管中，于70℃预1.1.3冷冻样本应室温融化，轻微震荡混匀后使用。1.1.4区分操作中的离心设置(rpm和g)，本产品操作过程均为室温离心。311.1.5助沉剂在低温保存时可能呈胶状，吹打混匀即可使用。1.2.样本裂解及核酸吸附注：如样本体积小于或大于200μl，需按比例改变助沉剂、裂解液以及无酸吸附柱中。1.2.33500g离心2分钟，取下套管，倒掉套管中的液体。将剩余裂解混合物转移至核酸吸附柱，重新离心一次，弃套管中的液体。1.3.核酸纯化lA6000g离心1分钟，将核酸吸附柱装入一个干净套管中。1.3.3倒掉套管中的液体，将核酸吸附柱重新装入套管。静置1分钟)。1.3.5将核酸吸附柱换一新套管，13000rpm离心3分钟。1.4.核酸洗脱1.4.1将核酸吸附柱装入一无核酸酶1.5ml离心管，小心在吸附膜中央加入1.4.210000rpm离心2分钟，离心管中液体即待测样本RNA。2.1实验设计：N行检测，综合2种反应液的检测结果对样本进行判定。2.1.2对照品检测：每次试验都应设置阴性对照和阳性对照。2.2反应体系的配制：32n+2=n份样本+1份阳性对照+1份阴性对照；2.3反应体系分管：管中。将加样后的PCR扩增管分别转移到全自动荧光定量PCR检测仪上进行扩增检测，不同仪器的设置如下：对于ABIPrism7500、ABIPrism7000型全自动荧光定量PCR检测仪，荧光信号设置为：ReporterDye1：FAM、JOE/VIC，QuencherDye1：NONE，PassiveR步骤反应温度时间是否采集光循环数逆转录及变性50℃30分钟否1℃3分钟否预扩增95℃15秒否5否℃1分钟否扩增及荧光收集95℃10秒否4033步骤反应温度时间是否采集荧光循环数逆转录及变性50℃30分钟否1℃3分钟否预扩增93℃15秒否5否℃1分钟否扩增及荧光收集93℃10秒否403.结果分析：荧光探针的报告荧光为HEX。所以应选择FAM通道和HEX通道分析试验结果。3.2基线(Baseline)范围根据仪器要求设定，目的为校正背景荧光干扰，终止循环(End)一般设置为最强样本出现扩增信号的前3-4个循环。3.3阈值线用于判断样本是否扩增，应调整使阈值线高于荧光背景和阴性对照的荧光信号，或点击分析(Analysis)自动获得。4.质量控制：每次试验应设置阳性对照和阴性对照，且应符合以下要求，否则试验结果不成立。【参考值(参考范围)】无Ct值或Ct值为0报告该反应阴性；34【检验结果的解释】1.在内标RNP结果成立的条件下各种判读模式如下：H7--++N9-+-+RNP++++结果判断H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性注：在内标RNP结果不成立的条件下视为检测异常，应重新采样检测。试剂盒中裂解液、无水乙醇的用量加倍，其他组分的用量不变)并检测。复检结3.内标RNP检测靶物质为正常人上皮细胞中广泛存在的核糖核酸酶P(RNaseP)的mRNA，用于对样本中RNA的提取和扩增检测过程进行有效监控。3.1未采集到足够的正常人上皮细胞，应重新采样。3.2核酸提取过程异常，导致RNA损失，应重新提取。【检验方法的局限性】ml2.目前研究显示，发病后两日内取样检测，病毒RNA检出率最高，随发病时间的延长，病毒被清除，病毒核酸的检出水平迅速下降。因此应在发病后尽早采样，必要时可采用多部位取样检测。临床评价应结合其他临床症状和实验室检测指标进行判断。【产品性能指标】1.本品可最低检出100copies/ml稀释物。H1N1以及H3N2)灭活病毒、B型流感灭活病毒、高35【注意事项】1.开始检测前请仔细阅读本说明书全文，并严格按照要求进行操作。2.实验室配置和试验操作请按照《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和《临床基因扩增检验实验室工作规范》进行；整个检测过程应严格分区进行：PCR反应体系的配置区；标本处理、加样区；各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立专用。3.H7N9亚型禽流感为经呼吸道传播疾病，应按照相关要求进行。样本的采集、处理、运输和保存均存在一定生物危害。样本的采集、运输和保存应按照乙类传染病进行管理；标本的提取必须在生物安全二级实验室的负压生物安全柜中完成；试验中接触过标准品和对照品的废弃物品(如吸头)、扩增完毕的离心管、标本等应进行无害化处理后方可丢弃。4.不同批号的试剂请勿混用，请在有效期内使用试剂盒。5.本产品仅用于体外诊断检测。【参考文献】1.微生物和生物医学实验室生物安全通用准则(WS233-2002)N3.《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10号)【生产企业】企业名称：北京金豪制药股份有限公司生产地址：北京市北京经济技术开发区运成街7号注册地址：北京市北京经济技术开发区运成街7号1号楼邮政编码：100176电话号码真号码址：【医疗器械生产企业许可证编号】京药监械生产许20050017号H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)说明书【产品名称】通用名称：H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针36英文名称：DetectionKitforAvianInfluenzaVirusSubtypeH7N9RNA(PCR-FluorescenceProbing)【包装规格】大包装，48反应/盒【预期用途】感病毒血凝素蛋白(HA)的不同可分为1-16种亚型，根据病毒神经氨酸酶蛋白(NA)的不同可分为1-9种亚型，HA不同亚型可以与NA的不同亚型相互组合形成不同的流感病毒。而禽类特别是水禽是所有这些流感病毒的自然宿主，H7N9禽流感病毒是其中的一种。H7N9流感病毒既可以感染禽类，也可以感染人。人感染H7N9禽流感会出现严重肺炎，症状包括发烧、咳嗽、呼吸困难等。本试剂盒适用于检测呼吸道样本、血清、肺组织等样本中H7N9禽流感病毒RNA，可用于该病毒感染的实验室诊断和宿主动物的监控。检测结果仅供研究，不用于临床诊断。【检验原理】本试剂盒基于实时荧光PCR技术，分别选取H7N9禽流感病毒的HA基因和NA基因保守区作为扩增靶区域，设计特异性引物探针，通过一步法实时荧光PCR体系扩增对H7N9禽流感病毒进行定性检测。反应体系中除特异性引物和特异性荧光探针外，还配以对应的PCR反应Buffer、逆转录酶、Hot-StartTaq酶、核苷酸单体(dNTPs)、Mg2+等成分，可实现对H7N9禽流感病毒核酸灵敏特异地检测。【主要组成成分】组分名称规格数量ll37【适用仪器】ABI7500、ABI7300、LightCycler480等荧光定量PCR仪。【样本要求】1适用样本类型：呼吸道样本、血清、肺组织。2样品采集、保存与运送。标本采集、保存、运送请遵循《人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室【检验方法】1.核酸提取可采用中山大学达安基因股份有限公司生产的核酸提取试剂盒，请按照试剂盒说明书进行操作；也可选择其他合适的商业化产品。本试剂盒中的内标溶液参与提内标溶液后进行核酸提取。本试剂盒中的阴性质控品参与提取，用于对环境进行监控；AIVH7N9阳性质控品不参与提取，用于PCR检测试剂的质控。PCRABI仪器操作为例，ABI7300、LC480等仪器参照此操作及仪器操作手册)AIVHRTPCRAIVN9RT-PCR反应体系2.1.1AIVH7RT-PCR反应体系配制2.1.2AIVN9RT-PCR反应体系配制2.2于上述PCR反应管中分别加入处理后的阴性质控品、AIVH7N9阳性质382.3探针检测模式设置为：ReporterDye1：FAM，QuencherDye：NONE，ReporterDye2：Vic，QuencherDye2：NONE，PassiveReference：NONE。反3.结果分析3.1反应结束后保存检测数据文件。Baseline的start值、stop值以lueStart15、End值可设在5~20，调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线)，点击Analysis自动获得分析结果，在Report界面察看结果。【质量控制】阴性质控品：FAM检测通路扩增曲线无对数增长期，VIC检测通路扩增曲线为明显对数增长期；阳性质控品：FAM检测通路扩增曲线有明显对数增长期，且FAM检测通道扩以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行。【结果判定】AIVHNRTPCR体系FAM检测通道均无扩增曲线或Ct值＞40，且在VIC检测通道均有对数增长期，可判样品为H7N9禽流感病毒阴性；AIVHN9RT-PCR反应体系扩增曲线在FAM,VIC检测通道均有对数增长期且FAM检测通道Ct值≤40；可判样品为H7N9禽流感病毒阳3.如果检测样品的AIVH7或N9RT-PCR反应体系仅其中之一的扩增曲线满足判为阳性的要求，则需重复检测；若重复检测结果为H7及N9均阳性，则判H7N9禽流感病毒阳性；若重复检测结果仍为H7(或N9)阳性，则只能判禽流感病毒H7(或N9)亚型阳性，并建议以其他方法做进一步确认。【检测方法的局限性】391.样本检测结果与样本收集、处理、运送及保存质量有关。2.样本处理时没有控制好交叉污染，可能出现假阳性结果。3.病毒在流行过程中的基因突变则也可能导致假阴性结果。4.由于不同提取方法的原理不同，采用不同核酸提取试剂进行样本处理时核酸提取效率存在一定差异，本试剂盒推荐使用本公司生产的核酸提取试剂盒(离心柱法)，用户可根据具体要求进行选择确认。5.本检测结果仅供临床参考，如需确诊病例请结合临床症状及其他检测手段.【产品性能指标】103copies/ml。与感染部位相同或感染症状相似的其他病原体(甲型流感病毒病毒、禽流感H9亚型病毒等)无交叉反应。【注意事项】1.实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格分区进行(试剂准备区、标本制备区、扩增和产物分析区)，所用消耗品应灭菌后一次性使用，实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用；2.为试剂和标本准备阶段提供生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，使用自卸管移液器；3.试剂使用前要完全解冻，8,000rpm离心数秒后使用；4.标本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃；5.实验完毕用10%次氯酸或75%酒精或紫外线灯处理工作台和移液器；6.本试剂盒内阳性质控品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管【生产企业】企业名称：中山大学达安基因股份有限公司生产地址：广州市高新技术产业开发区香山路19号；广州市高新技术产业40邮编：510665电话8008304008传真址：【医疗器械生产企业许可证编号】粤食药监械生产许20040999号人感染H7N9禽流感病毒核酸检测实验室生物安全保障基本要求为加强人感染H7N9禽流感病毒核酸检测规范化管理，做好实验室生物安全以下简称《管理条例》)、《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样定本标准。供医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测时参考使用。一、样本采集操作人员必须经过生物安全培训合格，并具备相应的操作技能。(二)样本采集过程中，操作人员要加强防护，应当穿戴防护服、眼罩、N95及以上水平的医用防护口罩、双层医用乳胶手套、帽子等个体防护装备。(三)用于样本采集的主容器必须采用优质塑料材质，且大小适合、带螺旋盖、内有垫圈、无菌、耐冷冻的密闭容器。样本采集后，主容器盖必须盖严、拧紧，表面应当擦拭消毒。(四)对诊疗过程中采集的各种临床样本，医疗机构应当加强生物安全管理，在进行动态风险沟通与评估基础上，采取样本登记造册、专库存放、专人负责以及必要的消毒处理等较严格的安全及安保管理措施。41(五)样本采集过程中产生的医疗废物要分类收集，应当在产生地点进行压力蒸汽灭菌或可靠的化学消毒，然后按感染性、损伤性等医疗废物收集处置。二、样本包装和运输(一)负责样本包装和运输的人员应当经过感染性物质包装、运输相关的生物安全培训，并取得相应资格。(二)运输样本必须采取三层包装系统，由内到外分别为主容器、辅助容器和外包装。病毒培养物按照A类感染性物质进行包装运输，其他感染性物质按照B类感染性物质进行包装运输。容器或包装材料应当达到国际民航组织《危险物品航空安全运输技术细则》相应包装标准，符合防水、防破损、防外泄、耐高温、耐高压的要求。(三)样本包装过程中，操作人员要根据所处环境条件参照本标准第一条第二款的相关要求采取加强防护。(四)操作人员应当规范包装检测样本：1.应当在实验室核心操作区内对装有样本的主容器外表面进行仔细检查并擦拭消毒，确保无泄漏、表面无残留物，并在外表面标明样本编号、种类、姓名及采样日期等信息。用足够的吸收材料包裹主容器，然后放入辅助容器，拧紧(A类)或封严(B类)辅助容器，必要时消毒辅助容器外表面。若多个主容器装入同一个辅助容器时，必须分别包裹，防止彼此接触，并在多个主容器外面衬以足够的吸收材料。2.应在实验室清洁区采用适当的衬垫材料将辅助容器固定在贴有统一标识的外包装箱内，冰排或制冷器件应放在辅助容器和外包装之间。样本送检单、样本接收证明、准运证书、运送人员资质证明、发送和接收人员信息等相关文件材料应当放入防水的塑料袋中，置于外包装箱内上方。42(五)样本运输前应当联系接收机构实验室，告知样本送检目的、样本种类、数量和预计送达的时间等。(六)负责运输样本的医疗卫生机构，应当按照《管理规定》有关要求，向省级卫生行政主管部门或中国疾病预防控制中心申请办理《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本准运证书》。在每次运输结束后，运输单位须将运输情况向省级卫生行政主管部门或中国疾病预防控制中心书面报告。(七)包装合格的样本(三层包装系统)可通过航空或陆路运输。陆路运输应专车运输，并由2名或以上经培训合格的人员护送。运输途中样本主容器应始终保持直立，运输车辆内应携带具备清单及有效物品的应急处置箱(包)，其中包括个体防护装备、感染性材料溢洒处置器具、皮肤及创口处置器具、医疗废物收集器具以及“生物危险”、“禁止通过”等警示标识。有关单位或者个人不得三、样本接收和包装开启(一)负责样本接收与包装开启的操作人员应具备相应的操作技能，通过生物安全培训并取得相应资质。(二)样本包装的开启应在生物安全二级及以上级别的实验室进行。样本送检单、准运证书、人员上岗证等相关文件材料的核查、登记，以及相关风险沟通/评估和开具样本接收证明等工作应在实验室清洁区内进行。(三)包装开启过程中，操作者要根据所处环境条件参照本标准第一条第二款相关要求适时加强防护。(四)实验室操作人员应规范接收检测样本、开启包装：1.操作人员应当在生物安全柜内开启三层包装系统的第二层辅助容器，并仔细检查主容器表面有否破损、泄漏或残留物，发现异常情况应当立即执行实验室应急处置程序，同时登记并报告实验室负责人。432.操作者应当在生物安全柜内消毒主容器表面，核对样本信息，进行下一步的实验室检测活动，或转移至指定的保存/保藏地点及位置。(五)包装开启和样本核查结束后，应当在实验室清洁区完成交接手续，开具样本接收证明，交还外包装和辅助容器等。实验室操作人员应对所有异常情况进行详细记录，运输和接受样本的双方人员签字确认。四、样本分装和检测(一)负责样本分装、检测的操作人员应当具备人感染H7N9禽流感病毒相应的实验操作能力，经过生物安全培训，并取得培训合格资质。(二)实验室用于人感染H7N9禽流感病毒检测的设备、设施必须运行良好，生物安全柜和压力蒸汽灭菌器应当年检合格。(三)在生物安全二级实验室从事相关实验活动时，操作人员应当配戴眼罩、N95及以上水平的医学防护口罩，穿戴防护服、双层乳胶手套等个体防护装备。(四)实验室生物安全等级要求：1.疑似病例未经培养的临床样本应当在生物安全二级实验室的生物安全柜内分装、灭活和核酸提取。2.人感染H7N9禽流感病毒的分离培养应当在生物安全三级实验室进行。3.动物感染实验应当在动物生物安全三级实验室进行。HN时，应当有2名以上的操作人员共同进行。(六)实验过程中产生的医疗废物要分类收集，应在产生地点进行消毒灭菌，然后按医疗废物收集处置。五、样本保存和销毁44(一)各医疗机构应当将阳性样本按照要求集中专库保存。(二)阳性样本、分离物的保存及销毁应当按照《管理条例》等法规和规范性文件有关要求执行。人感染H7N9禽流感病毒核酸检测实验室生物安全保障基本要求为加强人感染H7N9禽流感病毒核酸检测规范化管理，做好实验室生物安全以下简称《管理条例》)、《可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样定本标准。供医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测时参考使用。一、样本采集操作