DB42∕T 2242-2024 水产品中羧甲基赖氨酸的测定液相色谱法

DB42/T2242—2024水产品中羧甲基赖氨酸的测定液相色谱法湖北省市场监督管理局发布I前言 III 1 13术语和定义 14原理 1 1 2 3 39精密度 4 5附录A(规范性)水产品的试样制备 6附录B(资料性)羧甲基赖氨酸衍生物高效液相色谱图 7本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1水产品中羧甲基赖氨酸的测定液相色谱法5.1.1三氯甲烷(CHC13,CAS号：67-66-3):分析纯。5.1.3盐酸(HCl,CAS号：7647-01-0):分析纯。5.1.4氢氧化钠(NaOH,CAS号：1310-73-2):分析纯。5.1.5磷酸二氢钠(NaH2PO4,CAS号：7558-80-7):分析纯。5.1.6硼氢化钠(NaBH4,CAS号：16940-66-2):分析纯。5.1.7邻苯二甲醛(C8H602,CAS号：643-79-8):分析纯。5.1.83-巯基丙酸(C3H602S,CAS号：107-5.1.9甲醇(CH30H,CAS号：67-56-1):色谱纯。5.1.10乙腈(CH3CN,CAS号：75-05-8):色谱纯。25.1.11甲酸(HCOOH,CAS号：64-18-6)5.1.12硼酸(H3B03,CAS号：11113-50-1):分析纯。5.1.14水(H20,CAS号：7732-18-5):为符合GB/T6682规定的一级水。5.2.16mol/L盐酸溶液：取50mL盐酸(见5.1.3),用水溶解并定容至100mL。5.2.20.1mol/L盐酸溶液：取1.67mL盐酸(见5.2.1),用水溶解并定容至100mL。5.2.30.1mol/L氢氧化钠溶液：称取2.00g氢氧化钠(见5.1.4),用水溶解并定容至500mL。5.2.40.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8):称取0.12g磷酸二氢钠(见5.1.5),加水溶解并稀释至100mL,用0.1moL/L的氢氧化钠(见5.2.3)调pH至7.8。5.2.50.1mol/L硼酸钠缓冲液(pH10.2):称取0.49g硼酸(见5.1.12)和0.19g十水合四硼酸钠(见5.1.13),用水溶解并定容至100mL,用0.1moL/L氢氧化钠溶液(见5.2.3)调pH至10.2。5.2.62mol/L硼氢化钠溶液：称取7.57g硼氢化钠(见5.1.6),用0.1mol/L氢氧化钠溶液(见5.2.3)溶解并定容至100mL。5.2.7衍生化试剂：取80mg邻苯二甲醛(见5.1.7),加入7.0mL0.1mol/L硼酸钠缓冲溶液(见5.2.8丙酮-三氯甲烷溶液(3+1,体积比):取300mL丙酮(见5.1.2)和100mL三5.2.9水-乙腈-甲醇溶液(10+45+45,体积比):取450mL乙腈(见5.1.10)、450mL甲醇(见5.1.9)5.2.10甲醇-0.1%甲酸水溶液：取500mL甲醇(见5.1.9),加入0.5mL甲酸(见5.1.11),混匀。5.3标准品5.4.2羧甲基赖氨酸标准中间溶液(1.0mg/L):准确量取羧甲基赖氨酸5.5材料3DB42/T2242—20246.7烘箱(可控温)。在蛋白沉淀中加入1.6mL硼酸钠缓冲液(见5.2.5)、400μL硼氢化钠溶液(见5.2.6),静置8h。8.1.4净化中，氮吹至干后用1mL0.1mol/L盐酸溶液(见5.2.2)复溶，待衍生。4DB42/T2242—20248.3.2流动相：A,0.01mol/L的磷酸盐缓冲溶液(见5.2.4);B,水-乙腈-甲醇溶液(见5.2.9),梯度洗脱条件见表1。8.3.3流速：1.0mL/min。8.3.4柱温：30℃。8.3.5荧光检测器：激发波长340nm,发射波长450nm。表1梯度洗脱参考条件时间/min02200228.4定量测定在上述色谱工作条件下，标准工作溶液与试样的衍生物交替进样，采用标准工作溶液单点或多点校正，外标法定量。试样溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，当试样的上机液浓度超过线性范围时，需根据测定浓度，稀释后进行重新测定。典型的羧甲基赖氨酸衍生物的高效液相色谱图参见附录B。8.5数据处理试样中羧甲基赖氨酸的含量w,以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg),按公式(1)计算。C标准溶液中羧甲基赖氨酸衍生物的浓度，单位为毫克每升(mg/L); 试样溶液中羧甲基赖氨酸衍生物的峰面积：A标准溶液中羧甲基赖氨酸衍生物的峰面积；V水解后试样溶液的体积，单位为毫升(mL);V分取水解后试样用于固相萃取的溶液体积，单位为毫升(mL);V₃——试样溶液的复溶体积，单位为毫升(mL);m——样品称样量，单位为克(g);以两个平行样品测定结果的算术平均值报告结果，结果保留2位有效数字。含量超过1mg/kg时，保留3位有效数字。9精密度在重复条