微生物学实验课件

微生物学实验

微生物学实验微生物学实验医学微生物学实验室规则一.进入实验室必须穿白大衣,不必需的物品不要携带入室。二.保持实验室的安静和秩序,实验要严肃认真。三.如有传染性材料的污染,及时报告老师。四.实验过程中有仪器和器材的损坏要报告老师并登记。五.实验后的材料要放到指定的位置。六.离开实验室前,要用肥皂洗手,接触过传染性强的实验材料要用0.1%的新洁尔灭泡手1-2分钟七.值日生要作好值日工作,关好水,电,门窗,作好实验记录本的登记方可离开实验室。微生物学实验目的要求:1、了解微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备

2、了解空气、皮肤细菌检查方法

3、掌握药品的微生物学检验程序和方法实验一药品的微生物限度检查（一）实验室常用消毒灭菌设备空气和皮肤细菌检查方法微生物学实验一.药品的微生物限度检查（一）1.口服药物的微生物检查:①大肠杆菌的检查：②细菌总数的检查2.外用药物的微生物检查:①绿脓杆菌的检查：②金黄色葡萄球菌的检查：

微生物学实验口服药外用药药品的微生物限度检查实验方法（一）

1.药品的预处理2克药品加20毫升生理盐水，研磨制成悬液

2.细菌培养外服药口用药药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中药品混悬液10毫升加入亚碲酸钠增菌液中37℃,24小时37℃,24小时微生物学实验

将剩余口服药以10-110-210-310-4

进行稀释(以生理盐水稀释)

3.细菌总数测定加溶化的琼脂培养基中，混匀，冷却后,置37℃恒温培养箱培养24小时

。取三个中试管各管加9ml生理盐水从剩余10ml悬液中取1ml加入第一个稀释管中1ml10-110-410-210-39ml生理盐水从上述三个稀释管中各取1ml1ml10-110-410-210-3微生物学实验二.空气、皮肤细菌检查方法(验证)三.微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备：高压蒸汽灭菌锅消毒煮沸器

G6玻璃滤菌器装置洁净工作台移动式紫外光灯鼓风式干烤箱紫外线杀菌标本。微生物学实验厌氧工作站催化剂（钯粒）厌氧培养罐电热恒温培养箱二氧化碳培养箱微生物学实验一、目的要求:1、了解细菌培养接种技术

2、掌握细菌基本形态

3、掌握药品的微生物学检验程序和方法二、实验内容1.药物的微生物限度检查（二）2.空气、皮肤细菌检查结果测定。3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。4.培养基的种类和用途普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基5.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能)

液体培养基 平板培养基 斜面培养基 双糖含铁半固体斜面培养基6.显微镜下观察

细菌的基本形态:球菌、枯草杆菌、霍乱弧菌。特殊结构：肺炎荚膜、变形鞭毛、破伤风芽胞。实验二药品的微生物限度检查（二）细菌的形态学检查及培养接种技术微生物学实验

取出前次实验培养物观察：

1.口服药物1)细菌鉴定：在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长：增菌液变混浊―――――有

-----接种在伊红美兰琼脂平板培养基上面。方法：分区划线接种。

2)细菌总数测定：选择30-300个菌落平板，细菌总数＝菌落数×稀释倍数药物的微生物限度检查方法（二）微生物学实验2.外用药1)判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培养物有无细菌生长：增菌液变混浊―――有2)细菌鉴定：（1）将胆盐乳糖增菌液培养物无菌接种在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上面。方法：斜面化线接种；（2）将亚碲酸钠增菌液培养物，无菌接种在卵黄高盐琼脂平板培养基上面。方法：分区划线接种。

37℃恒温孵育箱24小时培养后，观察结果。微生物学实验分区划线法微生物学实验菌落微生物学实验斜面移种技术微生物学实验菌苔微生物学实验液体移种技术微生物学实验穿刺技术微生物学实验细菌基本形态球菌杆菌螺形菌微生物学实验葡萄球菌微生物学实验链球菌微生物学实验大肠埃希菌微生物学实验枯草杆菌微生物学实验霍乱弧菌微生物学实验细菌特殊结构鞭毛荚膜芽孢微生物学实验破伤风梭菌spore微生物学实验一、目的要求:1、了解细菌的生长现象及代谢产物的观察

2、掌握药品的微生物学检验程序和方法二、实验内容1.药物的微生物限度检查（三）2.细菌的生长现象及代谢产物的观察

1）液体培养基---沉淀、浑浊、表面生长现象。

2）三葡、三链、大肠与副伤乙培养基的菌落特征、溶血环观察。

3）双糖含铁培养基---动力、气体、硫化氢、分解乳糖观察。

4）结核杆菌菌落的观察。 3.中草药、抗生素抑菌试验

1）中草药---大蒜汁、黄连、黄芩、黄柏。

2）抗生素---青霉素、庆大、氨苄、新诺明、生理盐水。实验三

药品的微生物限度检查（三）微生物的形态学检查及药物的敏感性试验

微生物学实验1）从伊红美兰琼脂平板培养基上-----

挑取黑色带有金属光泽的湿润菌落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。

2）观察外用药物在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上生长状况。记录被检菌色素的溶解性质、液化明胶的状况及菌苔粘稠度等。

革兰氏染色镜下观察其菌落形态。根据上述被检菌落的生物性质和状况及细菌形态，确定该被检菌的名称。

3）从卵黄高盐琼脂平板培养基上生长，挑取黄色的湿润菌落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。药物的微生物限度检查（三）微生物学实验2.细菌的生长现象及代谢产物的观察混浊生长菌膜菌沉淀均匀浑浊对照微生物学实验菌膜生长微生物学实验微生物学实验微生物学实验微生物学实验革兰染色步骤

1.制片：取标本（球杆混合物、牙垢）涂片、干燥、固定2.初染：结晶紫——1min——水洗3.媒染：碘液——1min——水洗4.脱色：95%酒精——30s——水洗5.复染：沙黄——1min—水洗、滤纸吸干6.油镜观察：微生物学实验微生物学实验1、制片

涂片、干燥、固定微生物学实验2.结晶紫初染1min——水洗微生物学实验3.碘液媒染1min——水洗微生物学实验4.95%酒精脱色30s——水洗微生物学实验5.沙黄复染1min——水洗、滤纸吸干微生物学实验微生物学实验6.油镜观察

结果革兰阳性菌：紫色革兰阴性菌：红色微生物学实验3.中草药、抗生素抑菌试验微生物学实验

纸片法微生物学实验实验四药物的微生物限度检查（四）病毒和细菌及其他病原微生物一、目的要求

1、了解抗酸染色方法及各种病毒和细菌的菌落形态

2、掌握药品的微生物学检验程序和方法二、实验内容

1、药物的药物的微生物限度检查（四）

1）将口服药物中的细菌分别接种：①蛋白胨水培养基；②葡萄糖蛋白胨水培养基；③枸橼酸盐（西蒙氏）培养基。同时接种产气杆菌于上述培养管做对照，以备进行IMViC试验。

2）取接种在普通琼脂斜面培养基上面的外用药物中细菌进行血浆凝固酶检测,依据其反应结果,确定该菌的性质及名称。2、抗酸染色 3、真菌培养物的观察------黑曲霉、木霉、青霉菌菌落，白色念珠菌假菌丝，酵母菌菌落的观察。4、记录中草药、抗生素抑菌试验结果5、流感病毒的血球凝集试验 6、观察鸡胚的结构 7、抗“O”试验 微生物学实验生化反应管待检细菌对照菌(产气杆菌)蛋白胨水培养基2支管接种1支管接种1支管葡萄糖蛋白胨水培养基4支管接种2支管接种2支管枸橼酸盐培养基2支管接种1支管接种1支管接种细菌的对应生化反应管微生物学实验制片（涂片、干燥、固定）；石炭酸复红初染（加热、盖滤纸片）5min---水洗；3％盐酸酒精脱色（15S,水洗）；美兰复染（1min，水洗）-滤纸吸干镜检。抗酸染色步骤微生物学实验结核杆菌微生物学实验抗生素体外抑菌试验（二）

记录纸片法结果测量抑菌环直径

微生物学实验病毒的分离培养—鸡胚接种动物接种鸡胚培养组织细胞培养病毒的培养方法：微生物学实验病毒的分离培养—鸡胚接种微生物学实验病毒名称接种部位鸡胚胚龄（天）痘类病毒绒毛尿囊膜10～13流感、副流感、腮腺炎病毒尿囊9～11嗜神经病毒卵黄囊5～8初次分离标本羊膜腔10～12病毒的分离培养—鸡胚培养微生物学实验菌丝微生物学实验大分生孢子小分生孢子微生物学实验白念珠菌微生物学实验

新型隐球菌微生物学实验青霉微生物学实验烟曲霉黄曲霉曲霉微生物学实验实验五药物的微生物限度检查（五）一、目的要求掌握药品的微生物学检验程序和方法二、实验内容以生化反应（IMViC）检测口服药中细菌的性质。微生物学实验---------------------------------------------------试验培养基加试剂试验结果大肠埃希菌产气杆菌吲哚(I)蛋白胨水2管苯甲醛试剂0.5ml(5滴)红阳性（+）无色变阴性（-）甲基红(M)葡萄糖蛋白胨水