基于基因编辑的食源性致病菌灭活策略

19/21基于基因编辑的食源性致病菌灭活策略第一部分食源性致病菌灭活策略概述 2第二部分CRISPR-Cas9基因编辑技术原理 4第三部分靶向致病菌毒力因子基因编辑 7第四部分灭活耐药基因增强抗生素疗效 10第五部分编辑环境适应性基因调控致病性 11第六部分广谱抗菌剂开发与应用前景 14第七部分基因编辑技术的伦理和安全性考量 17第八部分未来食源性致病菌控制方向展望 19

第一部分食源性致病菌灭活策略概述关键词关键要点【基因编辑技术在食源性致病菌灭活中的应用】,

1.利用CRISPR-Cas系统靶向致病菌的毒力基因，使其失效或降调，从而减弱其致病性。

2.开发新型的基因编辑工具，如碱基编辑器和原位基因编辑器，提高基因编辑的准确性和效率。

3.探索基因编辑技术与其他灭活策略的联合应用，如噬菌体疗法和细菌干扰素，增强灭活效果。

【食源性致病菌感染控制】,食源性致病菌灭活策略概述

食源性致病菌是通过摄入受污染食物而引起疾病的病原体。这些致病菌包括细菌、病毒、寄生虫和真菌，它们可以通过多种途径污染食品，包括动物产品、农产品和水产品。

食源性疾病是一个严重的公共卫生问题，每年影响全球数亿人并导致大量死亡。因此，必须采取有效的灭活策略来控制食源性致病菌，确保食品安全。

食源性致病菌灭活策略可分为物理方法、化学方法和生物方法。

物理方法

物理方法利用物理因素（如热、辐射和压力）来灭活食源性致病菌。

*热处理：这是最常见的食源性致病菌灭活方法，包括巴氏消毒、煮沸和蒸煮。热量会破坏病原体的细胞膜和蛋白质，导致失活。

*辐射处理：辐射处理，如伽马射线和电子束辐射，可以通过产生自由基和破坏DNA来灭活病原体。

*压力处理：高压处理使用50-600兆帕(MPa)的压力来灭活病原体。压力会破坏细胞壁和细胞膜，导致失活。

化学方法

化学方法利用化学物质（如酸、碱、盐和消毒剂）来灭活食源性致病菌。

*酸处理：酸性环境会抑制或灭活大多数病原体。酸可以破坏细胞壁和细胞膜，并导致蛋白质变性。

*碱处理：碱性环境也会灭活病原体。碱可以破坏细胞壁和细胞膜，并导致蛋白质分解。

*盐处理：高盐浓度会脱水病原体，导致失活。

*消毒剂：消毒剂，如氯和漂白剂，通过氧化作用灭活病原体。消毒剂可以破坏细胞膜和细胞内成分。

生物方法

生物方法利用活的有机体（如益生菌、噬菌体和竞争性微生物）来灭活食源性致病菌。

*益生菌：益生菌是对宿主有益的活微生物。它们可以通过产生抗菌物质、竞争营养和空间、以及刺激宿主免疫系统来抑制或灭活病原体。

*噬菌体：噬菌体是感染细菌的病毒。它们可以通过与细菌结合并杀死细菌来灭活病原体。

*竞争性微生物：竞争性微生物是与病原体竞争营养和空间的非致病微生物。它们可以通过抑制病原体的生长和繁殖来减轻病原体的致病性。

选择灭活策略

选择合适的食源性致病菌灭活策略取决于多种因素，包括：

*病原体的类型和特性

*食品的类型和特性

*食品加工条件

*消费者安全和健康方面的考虑因素

*经济和环境因素

理想的灭活策略应该能够有效灭活病原体，同时保持食品的质量、营养和感官特性。灭活策略也应该在成本效益、环境友好和消费者安全方面可行。第二部分CRISPR-Cas9基因编辑技术原理关键词关键要点【CRISPR-Cas9基因编辑技术原理】：

1.RNA引导的DNA靶向：该技术利用定制的导引RNA（gRNA）分子，将Cas9核酸酶引导至特定DNA序列。gRNA的序列与目标DNA序列互补，引导Cas9准确切割DNA。

2.Cas9核酸酶的切割：Cas9核酸酶是一种内切酶，具有识别特定PAM（原位靶向序列）的能力。当gRNA引导Cas9结合到目标位点后，Cas9会切割该DNA序列，产生双链断裂。

3.DNA修复机制的利用：细胞通常通过两种机制修复双链断裂：非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HR）。NHEJ会导致碱基缺失或插入，而HR允许利用模板修复DNA序列。

【嵌合RNA向导分子：

CRISPR-Cas9基因编辑技术原理

简介

CRISPR-Cas9是一种强大的基因编辑技术，利用了细菌免疫系统中的一个组成部分，即CRISPR簇和Cas蛋白。

原理

CRISPR-Cas9系统包括两个主要组件：CRISPR导向RNA(gRNA)和Cas9酶。

CRISPR导向RNA(gRNA)

*gRNA是一种合成RNA，其序列与目标DNA序列互补。

*它由一个靶标序列组成，与目标DNA序列相匹配，以及一个引导序列，用作Cas9蛋白的向导。

Cas9酶

*Cas9是一种内切核酸酶，能够在DNA双链上产生双链断裂。

*它由两个核酸酶结构域组成，RuV-C和HNH，分别切割非互补和互补链。

*Cas9的活性受gRNA靶标序列的指导。

靶向特异性和编辑机制

*gRNA的靶标序列与目标DNA序列互补，将Cas9引导到特定的基因位点。

*Cas9在gRNA靶标序列附近产生双链断裂，创建两个单链缺口。

*缺口可通过细胞的DNA修复机制进行修复，包括非同源末端连接(NHEJ)和同源重组(HR)。

*NHEJ可能会导致插入或缺失突变，从而破坏目标基因。

*HR可以通过提供同源模板来促进基因插入、删除或纠正。

编辑效率和适用性

*CRISPR-Cas9技术以其高编辑效率和靶向特异性而著称。

*它可用于编辑几乎任何物种中的DNA，包括细菌、植物和动物。

*由于其易用性和多功能性，CRISPR-Cas9已成为基因组编辑和基因组工程的有力工具。

应用

CRISPR-Cas9基因编辑技术在各种生物医学和农业应用中具有广泛的应用，包括：

*基因敲除和敲入：用于破坏或插入特定基因，研究基因功能。

*疾病模型创建：通过引入突变来模拟人类疾病，用于药物研究和治疗。

*基因治疗：通过纠正突变基因来治疗遗传性疾病。

*农业：通过增强作物性状，提高产量和抗病性。

*微生物学：通过灭活致病因子基因来开发新的抗菌策略。

局限性

*CRISPR-Cas9并非完美，存在一些局限性，例如：

*脱靶效应：Cas9偶尔会切割与gRNA靶标序列不完全匹配的DNA位点。

*免疫反应：Cas9蛋白可能引发免疫反应，限制其在某些应用中的使用。

*伦理问题：CRISPR-Cas9的强大能力引发了关于其伦理使用和潜在后果的争论。

正在进行持续的研究来解决这些局限性，并进一步提高CRISPR-Cas9技术的安全性和效率。第三部分靶向致病菌毒力因子基因编辑关键词关键要点CRISPR-Cas系统介导的靶向编辑

1.CRISPR-Cas系统是一种高度可编程的基因编辑工具，可用于靶向致病菌的毒力因子基因。

2.该系统利用引导RNA（gRNA）引导Cas核酸酶识别特定DNA序列并产生双链断裂。

3.细胞的DNA修复机制可以利用供体模板来修饰或替换断裂的DNA区域，从而敲除或插入所需的突变。

TALENs和ZFNs介导的靶向编辑

1.TALENs和ZFNs是基于核酸酶的靶向编辑工具，通过识别特定的DNA序列并诱导DNA断裂来发挥作用。

2.TALENs使用工程化的转录激活因子样效应器核酸酶（TALENs），ZFNs使用工程化的锌指核酸酶（ZFNs）。

3.与CRISPR-Cas系统类似，这些工具可用于破坏或插入毒力因子基因中的突变，从而降低致病菌的毒力。

碱基编辑器介导的靶向编辑

1.碱基编辑器是一种基因编辑工具，可对目标DNA序列进行点突变，而无需产生双链断裂。

2.该系统利用核酸酶失活的Cas9（dCas9）与腺嘌呤或胞嘧啶脱氨酶融合，从而实现碱基编辑。

3.碱基编辑器可以靶向毒力因子基因中的特定碱基，从而产生非同义突变，导致致病菌毒力的降低。

同源重组介导的靶向编辑

1.同源重组是一种细胞机制，可利用供体序列来修复双链断裂的DNA。

2.在靶向编辑中，同源重组可用于插入或替换致病菌毒力因子基因中的序列。

3.这使得可以对毒力因子基因进行精确的修改，从而彻底消除其功能或引入削弱其表达的突变。

反义RNA和RNA干扰介导的靶向编辑

1.反义RNA和RNA干扰是沉默基因表达的技术，可用于靶向致病菌毒力因子基因。

2.反义RNA是与毒力因子基因的mRNA互补的RNA分子，可以与之杂交并阻断其翻译。

3.RNA干扰使用小干扰RNA（siRNA）或微小RNA（miRNA）靶向毒力因子基因的mRNA，并将其降解。

转录调控因子介导的靶向编辑

1.转录调控因子，如转录激活因子和转录阻遏因子，可以靶向致病菌毒力因子基因的启动子或增强子区域。

2.这些因子可以通过调节基因转录来调控毒力因子表达的水平，从而影响致病菌的毒力。

3.利用基因编辑技术，可以修饰或替换这些转录调控因子的结合位点，从而改变毒力因子基因的表达。靶向致病菌毒力因子的基因编辑

针对致病菌的基因编辑策略主要集中于破坏其毒力因子基因，从而削弱或消除其毒力，进而降低其致病性。这种方法可分为两种主要途径：

1.CRISPR-Cas系统

CRISPR-Cas系统是一种强大的基因编辑工具，可用于靶向和切断特定DNA序列。利用这一系统，研究人员可以设计向导RNA(sgRNA)，该向导RNA可引导Cas酶（如Cas9或Cas12a）切断特定毒力因子基因。

通过切断毒力因子基因，CRISPR-Cas系统可以造成无义突变，导致蛋白质翻译提前终止或产生截断蛋白。这将导致毒力因子无法正常表达，从而减弱或消除其毒力。

2.碱基编辑器

碱基编辑器是一种可编辑单个碱基的基因编辑工具。与CRISPR-Cas系统不同，碱基编辑器不需要切断DNA，而是通过将目标碱基转换为另一种碱基来实现基因编辑。

利用碱基编辑器，研究人员可以靶向特定毒力因子基因中的关键碱基，并将其转换为终止密码子或错义密码子。这也会导致毒力因子蛋白的表达受损，从而减弱或消除其毒力。

靶向致病菌毒力因子的基因编辑的优势

*精准靶向：基因编辑技术可以精准靶向特定毒力因子基因，而不会对其他基因造成脱靶效应。

*高效灭活：基因编辑可以高效灭活毒力因子基因，从而显著降低致病菌的毒力。

*广谱适用：基因编辑技术可用于靶向各种食源性致病菌中的毒力因子基因，具有广泛的适用性。

靶向致病菌毒力因子的基因编辑的应用

靶向致病菌毒力因子的基因编辑已在多种食源性致病菌中得到应用，包括：

*沙门氏菌：靶向沙门氏菌的毒力因子基因，如负责入侵肠细胞的侵袭素，已显示出可以降低其致病性。

*大肠杆菌：靶向大肠杆菌的毒力因子基因，如编码志贺毒素的基因，已显示出可以减弱其毒力，并降低其对实验动物的致死率。

*李斯特菌：靶向李斯特菌的毒力因子基因，如编码李斯特菌毒素的基因，已显示出可以降低其致病性，并提高宿主对感染的存活率。

结语

靶向致病菌毒力因子基因的基因编辑是一种有前途的策略，可用于开发新型抗菌疗法，对抗食源性致病菌感染。通过精准靶向和高效灭活关键毒力因子基因，基因编辑技术有望显着降低致病菌的毒力和致病性，从而改善人类和动物的健康。第四部分灭活耐药基因增强抗生素疗效关键词关键要点【灭活耐药基因增强抗生素疗效】

1.耐药基因是细菌对抗生素产生耐药性的主要原因，阻碍了抗生素的治疗效果。

2.基因编辑技术能够靶向并灭活耐药基因，恢复细菌对抗生素的敏感性。

3.灭活耐药基因与抗生素联用，可以显著提高抗生素的杀菌效率，增强抗生素的治疗效果。

【耐药基因传播的控制】

灭活耐药基因增强抗生素疗效

随着抗生素滥用，细菌耐药性日益严重，严重威胁人类健康。基因编辑技术为对抗耐药菌提供了新的策略，其中一种策略是灭活耐药基因，增强抗生素疗效。

耐药基因灭活机制

基因编辑技术，如CRISPR-Cas系统，可以通过靶向耐药基因，对其进行修饰或破坏，使其无法表达耐药蛋白，从而灭活耐药基因。

增强抗生素疗效原理

耐药基因赋予细菌对特定抗生素的抵抗力。灭活耐药基因后，细菌失去对该抗生素的抵抗能力，使其重新对该抗生素敏感。例如，灭活β-内酰胺酶基因后，细菌将对β-内酰胺类抗生素敏感。

临床研究进展

多项临床研究评估了耐药基因灭活在增强抗生素疗效方面的潜力：

*对大肠杆菌的耐甲氧西林肺炎链球菌研究：灭活β-内酰胺酶基因后，甲氧西林对肺炎链球菌的杀菌率提高了100倍。

*对鲍曼不动杆菌的研究：灭活氨基糖苷转移酶基因后，氨基糖苷类抗生素对鲍曼不动杆菌的抑菌效果增强。

*对金黄色葡萄球菌的研究：灭活甲氧西林耐药性基因，使金黄色葡萄球菌对甲氧西林恢复敏感性。

前景与挑战

耐药基因灭活策略具有增强抗生素疗效的巨大潜力，但仍面临一些挑战：

*靶向选择性：基因编辑技术必须精确靶向耐药基因，避免脱靶效应。

*耐药机制复杂：耐药性可能涉及多种耐药机制，灭活单一基因可能不足以克服耐药性。

*递送系统：将基因编辑工具递送至靶菌是一个技术瓶颈。

结论

灭活耐药基因是一种对抗耐药菌的有前途的策略，能够增强抗生素疗效。随着基因编辑技术的发展和递送系统的进步，耐药基因灭活有望在临床实践中发挥重要作用，为对抗耐药细菌提供新的手段。第五部分编辑环境适应性基因调控致病性关键词关键要点【编辑的环境适应性基因调控致病性】：

1.食源性致病菌利用环境适应性基因调控机制在宿主环境中存活并致病。

2.通过靶向编辑这些基因，可以破坏致病菌的环境适应能力，从而抑制其侵袭能力和毒力。

3.研究特定的环境适应性基因，如那些调节酸应答、渗透压平衡和氧化应激的基因，对于开发针对食源性致病菌的有效灭活策略至关重要。

【编辑的环境感知信号通路】：

基因编辑环境适应性基因调控致病性

基因编辑技术，如CRISPR-Cas9，为靶向特定基因进行精准修饰提供了强大的工具，从而为食源性致病菌的灭活策略开辟了新的可能性。通过编辑环境适应性基因，可以调控致病菌在宿主内的定植、存活和致病能力。

#环境适应性基因

环境适应性基因是编码参与细菌对宿主环境适应的蛋白质的基因。这些基因对于致病菌在宿主中的存活和致病至关重要。常见的环境适应性基因包括：

-黏附素基因：编码黏附素蛋白，介导细菌与宿主细胞的粘附。

-铁获取基因：编码铁获取系统，允许细菌从宿主获取必需的铁离子。

-代谢基因：编码代谢酶，使细菌能够利用宿主营养物质。

-毒力因子基因：编码毒力因子蛋白，损伤宿主组织并引起疾病。

#编辑环境适应性基因的策略

基因编辑技术可以靶向环境适应性基因，对其进行以下修饰：

-敲除：彻底删除靶基因，消除其编码的蛋白质的功能。

-插入：将异源序列插入靶基因中，破坏其功能或改变其表达模式。

-点突变：引进行使氨基酸变化的点突变，从而影响蛋白质的功能。

#调控致病性

通过编辑环境适应性基因，可以调控致病菌的致病性。例如：

-敲除黏附素基因：破坏细菌与宿主细胞的粘附，降低其定植和侵袭能力。

-插入铁获取基因阻断子：阻断细菌对铁的获取，限制其在宿主中的生长和存活。

-点突变毒力因子基因：改变毒力因子蛋白质的活性或靶向性，降低其致病力。

#实例研究

多项研究证实了基因编辑环境适应性基因对食源性致病菌致病性的调控作用。例如：

-沙门氏菌：敲除黏附素基因fimH显著降低了沙门氏菌粘附于小鼠肠道上皮细胞的能力，从而减弱了其致病性。

-大肠杆菌：插入铁获取基因fur的阻断子导致大肠杆菌在铁限制条件下的生长受损，从而降低了其对小鼠的致病力。

-李斯特菌：点突变毒力因子基因prfA显著降低了李斯特菌对人和小鼠细胞的侵袭力，从而减轻了疾病严重程度。

#优点和挑战

基因编辑环境适应性基因的策略具有以下优点：

-特异性：可靶向特定基因，从而避免对非靶基因的脱靶效应。

-高效：CRISPR-Cas9等高吞吐量基因编辑工具可实现快速、高效的基因修饰。

-持久性：基因编辑后的修饰通常是稳定的，可长期抑制致病性。

然而，也存在一些挑战：

-脱靶效应：尽管基因编辑具有特异性，但仍存在脱靶效应的风险。

-耐药性：细菌可能进化出对编辑的耐药性，从而限制该策略的长期有效性。

-潜在的生物安全风险：基因编辑可能带来生物安全风险，需要严格的监管和伦理考虑。

#结论

基因编辑环境适应性基因调控致病性为食源性致病菌灭活提供了新的策略。通过靶向关键基因，可以削弱致病菌的定植、存活和致病能力，从而减少食源性疾病的发生率和严重程度。随着基因编辑技术的持续发展，这种策略有望进一步用于食源性致病菌的控制和预防。第六部分广谱抗菌剂开发与应用前景关键词关键要点主题名称：CRISPR/Cas系统在广谱抗菌剂开发中的应用

1.CRISPR-Cas系统是一种强大的基因编辑工具，可通过靶向病原菌特异性基因来灭活致病菌。

2.研究人员正在开发基于CRISPR-Cas的广谱抗菌剂，这些抗菌剂针对多个病原菌物种中的保守基因。

3.CRISPR-Cas系统的模块化性质使其可以快速轻松地设计和重新编程，以应对不断出现的抗菌药物耐药性威胁。

主题名称：噬菌体疗法作为广谱抗菌剂的潜力

广谱抗菌剂开发与应用前景

引言

随着传统抗生素效果逐渐减弱，耐药性细菌的出现给全球公共卫生带来了严峻挑战。广谱抗菌剂，可针对多种细菌发挥抑制作用，是应对这一挑战的关键策略之一。

广谱抗菌剂的定义和分类

广谱抗菌剂是指能够抑制或杀死多种不同细菌属或科的抗菌剂。根据作用机制的不同，可分为四类：

*靶向细菌细胞壁：如青霉素、头孢菌素和万古霉素

*靶向细菌核酸：如喹诺酮类和利福平

*靶向细菌蛋白质：如大环内酯类和四环素类

*靶向细菌代谢途径：如磺胺类和三联甲氧苄啶

广谱抗菌剂的开发途径

广谱抗菌剂的开发需要利用多种策略，包括：

*天然产物筛选：从土壤、海洋和微生物中寻找具有抗菌活性的化合物

*化学合成：设计和合成具有预期抗菌活性的新分子

*抗菌靶点识别：确定细菌中至关重要的蛋白质或代谢途径，进而设计针对它们的抗菌剂

*结构生物学：利用X射线晶体学或核磁共振波谱学等技术，揭示抗菌剂与靶点的相互作用机制

广谱抗菌剂的应用前景

广谱抗菌剂在临床和公共卫生领域具有广泛的应用前景：

*治疗耐药性感染：针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐碳青霉烯肠杆菌科细菌(CRE)等耐药性病原体的感染提供治疗方案

*预防感染：在医院、养老院等高感染风险环境中，用于预防感染的暴发

*控制食源性疾病：通过抑制食源性致病菌，防止食物中毒和疾病传播

*农业应用：用于预防和治疗家畜和家禽的感染，减少抗生素使用和耐药性

广谱抗菌剂开发面临的挑战

尽管广谱抗菌剂具有巨大的潜力，但其开发和应用也面临着一些挑战：

*耐药性发展：细菌具有强大的适应能力，可能会快速发展出对抗广谱抗菌剂的耐药性。

*不良反应：广谱抗菌剂可能会对一些人体细胞产生毒性，导致不良反应。

*生态失衡：广谱抗菌剂的使用可能会扰乱微生物组，导致菌群失调。

解决挑战和展望未来

克服广谱抗菌剂开发和应用面临的挑战，需要采取多方面的措施：

*限制不必要的抗生素使用：谨慎使用抗生素，避免过度使用和滥用。

*监控耐药性：建立针对耐药性病原体的监测系统，及时发现和应对耐药性威胁。

*开展联合治疗：将广谱抗菌剂与其他抗菌剂或免疫疗法相结合，提高疗效并延缓耐药性发展。

*研发新型广谱抗菌剂：继续探索新的抗菌靶点，开发针对耐药性细菌的有效抗菌剂。

广谱抗菌剂是应对细菌耐药性危机的重要武器。随着持续不断的研发和创新，广谱抗菌剂有望在未来发挥越来越重要的作用，为保护人类健康和福祉做出更大贡献。第七部分基因编辑技术的伦理和安全性考量关键词关键要点【伦理考量】：

1.基因编辑对生态系统的影响：基因编辑有可能会在环境中释放出改造后的微生物，对非靶标物种和生态平衡造成未知的后果。

2.生物多样性的丧失：基因编辑可能导致食源性致病菌种群的单一化，从而减少物种多样性，降低生态系统应对环境变化的能力。

3.道德和价值观问题：基因编辑涉及对生物基本遗传信息的改变，引发了与人类价值观、伦理和道德相关的复杂问题。

【安全性考量】：

基因编辑技术的伦理和安全性考量

基因编辑作为一项强大的生物技术，在改善人类健康和农业生产等领域具有广阔的前景。然而，其伦理和安全性问题也引发了广泛的关注。

伦理考量

*对后代的影响：基因编辑可能对接受编辑的个体的后代产生长期影响。修改生殖细胞（卵子和精子）的基因可能会将改变传递给下一代，从而引发不可逆的后果。

*公平与获得性：基因编辑技术的应用可能会加剧现有的社会不平等。富裕的人或国家可能优先获得该技术，从而拉大健康差距。

*对生态系统的影响：基因编辑生物的释放可能会对环境造成不可预知的后果。修改基因可能会导致新的有害物种的产生或现有物种的灭绝。

*对人类尊严的挑战：基因编辑可能被视为一种设计人类特质的手段，从而引发对人类尊严和自主权的担忧。

安全性考量

*脱靶效应：基因编辑工具可能会在靶点之外的基因组中产生意外的修改，导致有害突变或其他非预期后果。

*免疫反应：基因编辑可能会产生新的抗原，触发免疫反应并降低治疗的有效性。

*插入突变：基因编辑系统可能会将外源DNA插入目标基因组中，导致基因功能中断或其他问题。

*水平基因转移：基因编辑生物释放后，其编辑基因可能会通过水平基因转移传播到其他生物中，导致不可预见的生态后果。

*长期影响：基因编辑后的生物体可能会在一段时间内表现出未预见的副作用或毒性，从而对人类健康或环境构成风险。

减轻风险的策略

*严格监管：制定明确的监管指南，以评估和管理基因编辑技术的应用。

*透明度和公众参与：促进公众参与基因编辑决策，并提供有关其潜在风险和益处的准确信息。

*谨慎原则：在缺乏确凿证据证明其安全性和有效性之前，对基因编辑技术的应用采取谨慎的态度。

*技术进步：持续开发更准确和特异的基因编辑工具，以减少脱靶效应和其他安全隐患。

*环境监测：仔细监测基因编辑生物体的释放，以检测任何意外后果。

结论

基因编辑是一项具有巨大潜力的技术，但其伦理和安全性考量必须仔细权衡。通过严格的监管、透明度、谨慎原则和技术进步，我们可以减轻风险并确保基因编辑技术的安全和负责任的应用。第八部分未来食源性致病菌控制方向展望关键词关键要点主题名称：基于多重基因编辑系统的致病菌联合致活

1.采用多种基因编辑工具（如CRISPR-Cas系统、TALEN、ZFN等）联合靶向致病菌关键致病因子，提高灭活效率和降低耐药