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文档简介

鸡大肠杆菌病治疗研究目录TOC\o"1-2"\h\u21263摘要 282261前言 2126581.1国内外鸡大肠杆菌病治疗研究的进展 2134861.2鸡大肠杆菌病的病理特征 2290901.3本试验的研究目的意义 3251492材料与方法 3265492.1材料 3103382.1.2试验试剂 3212862.1.3试验器材 3322432.2试验方法 3123982.2.1试验动物分组及处理 3100422.2.2确定鸡的感染成功 4207352.2.3治疗考核指标 513522.2.4统计分析 5200333结果与分析 5234413.1试验各组对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗作用 5290473.2试验各组对人工感染大肠杆菌鸡只血清生化指标的影响 632754表2试验各组鸡血清生化指标的对比 617743.3试验各组对人工感染大肠杆菌鸡只血常规指标的影响 612774表3试验各组鸡血常指标的对比 7111784讨论 7243284.1鸡大肠杆菌治疗效果讨论 7288944.2黄连解毒汤的作用机理 8198995结论 8摘要摘要:目的:探究黄连解毒汤对肉鸡人工感染大肠杆菌病的治疗效果和最佳使用浓度。方法:试验选取100只健康的雏鸡,随机选取20只为健康组,其余的雏鸡人工感染鸡大肠杆菌后将其随机分成4组,分别为感染对照组和低、中、高浓度黄连解毒汤治疗组。观察各组临床症状变化和检测血清生化指标及血常规指标。结果:感染组与中、高浓度黄连解毒汤治疗组的死亡率相比差异极显著(p<0.01),中浓度黄连解毒汤治疗组的谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性极显著低于攻毒对照组(p<0.01),中浓度黄连解毒汤治疗组的白细胞数分别极显著低于攻毒对照组(p<0.01),中浓度黄连解毒汤治疗组的凝血细胞数显著高于攻毒对照组(p<0.05)。结论:中浓度黄连解毒汤对肉鸡人工感染大肠杆菌病的治疗效果良好。关键词:黄连解毒汤鸡大肠杆菌治疗效果1前言鸡大肠杆菌病是一种由鸡致病性大肠杆菌局部或全身感染引起的急性或慢性传染病[1],是鸡类养殖的常见病和高发病,发展速度较快,不仅通过接触传播还可通过空气进行呼吸道传播[2],春、冬发病多,夏、秋发病少各日龄都有,是严重危害世界养禽业的三大细菌病之一,给养鸡业造成了严重经济损失。1.1国内外鸡大肠杆菌病治疗研究的进展前人对鸡大肠杆菌病的治疗进行了许多研究,大量研究表明复方中药对鸡大肠杆菌病有治疗作用,沈永恕[3]等用复方中药“禽痢康”对鸡大肠杆菌病进行了治疗试验,连用5d对鸡大肠杆菌病平均治愈率可达97%。张丁华等[4]试验研究表明,用黄柏、黄连、秦皮等13味药物组方的复方中草药添加到饲料中去治疗鸡大肠杆菌病的平均治愈率和有效率分别达到89.1%和94.1%。以上研究均表明,中药对鸡大肠杆菌病有很好的治疗作用。1.2鸡大肠杆菌病的病理特征发病雏鸡主要以肝周炎、气囊炎、败血症和心包炎为主要特征;病理症状为发热,被毛松乱,离群呆立,精神不振,食欲降低或废绝,排绿色水样粪便或黄白色水样腹泻,严重者卧地不起,随后出现死亡。剖检可见脾脏、肝脏肿大易碎,肝脏充血,有大量渗出物,心包发炎,心包腔中有大量纤维素性渗出物;气囊浑浊,有干酪样物质覆盖[5]。1.3本试验的研究目的意义探究合适的黄连解毒汤浓度来治疗鸡大肠杆菌病,为以后治疗大肠杆菌病提供依据。2材料与方法2.1材料2.1.1试验动物采用的试验动物购自张家口养鸡专业户,试验鸡只选用体况相当而且未经过免疫鸡大肠杆菌疫苗的健康雏鸡。2.1.2试验试剂大肠杆菌购自中国兽医药品监察所;试验用中药购于利民大药房;蛋白胨、琼脂、牛肉浸膏,深圳康泰生物制品股份有限公司。2.1.2.1菌液的制备大肠杆菌菌种复壮后用接种环划线接种在琼脂平皿上,放于37℃恒温箱中培养24h至长出菌落,选取典型大肠杆菌菌株于肉汤培养基中培养24h,采用倾注法倒平板,最后用稀释法计数。2.1.2.2中药的制备根据所选处方称量中草药黄连15g、黄芩10g、黄柏10g、栀子5g三份,分别加蒸馏水1200mL浸泡一小时,武火煎沸改用文火煎煮,三份体积分别加热浓缩至80ml、40ml、20ml,其浓度分别为0.5g·mL-1(低)、1.0g·mL-1(中)、2.0g·mL-1(高),放冷,冷藏于4℃冰箱中备用。2.1.3试验器材普通光学显微镜,型号XSP3B,上海巴拓仪器有限公司;生化测定试剂盒,中生北控生物科技股份有限公司;血细胞计数板,上海市求精生化试剂仪器有限公司。2.2试验方法2.2.1试验动物分组及处理本试验选用15日龄未经免疫鸡大肠杆菌疫苗的健康雏鸡100只,随机选取20只为健康组,其余的雏鸡均用鸡大肠杆菌O1于胸部肌肉注射攻毒,每只1ml,然后根据病理症状、染色镜检和生化试验鉴定确认感染成功后,将其随机分成四组,每20只一组。1组为健康对照组,隔离饲养;2组为感染对照组,只攻毒不给药;3组为低浓度黄连解毒汤治疗组,早晚各灌胃1次,每次1ml\只;4组为中浓度黄连解毒汤治疗组,早晚各灌胃1次,每次1ml\只;5组为高浓度黄连解毒汤治疗组,早晚各灌胃1次,每次1ml\只;1,3,4,5组连续用药治疗5天后,停止用药,一周后观察记录。2.2.2确定鸡的感染成功2.2.2.1根据病理症状确定雏鸡表现为精神沉郁,食欲下降,羽毛松乱,闭眼缩颈,挤堆,腹泻,严重者出现死亡。2.2.2.2染色镜检分离菌培养物涂片,干燥固定后做革兰氏染色镜检于显微镜下观察,镜检可见两端钝圆、散在或成对存在的革兰氏阴性红色短杆菌[6],有菌毛,无可见的荚膜,无芽孢[7],可初步判断为大肠杆菌。2.2.2.3生化试验鉴定将镜检结果为阳性的细菌接种于葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、吲哚、M-R、V-P细菌生化微量鉴定管中及三糖铁琼脂培养基中进行生化试验鉴定。菌株使麦芽糖、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖、山梨醇发酵;能在三糖铁培养基上产酸产气并使培养基变黄,M-R试验、吲哚试验为阳性,V-P试验为阴性,为符合鸡大肠杆菌的生化特性[8]。呈现上述病理症状、染色镜检并做生化试验鉴定方可确定感染成功。2.2.3治疗考核指标2.2.3.1测定死亡率和治愈率、有效率试验期间每天观察并记录雏鸡的病理症状,在试验期结束后分别计算各组的有效率、治愈率、死亡率、。2.2.3.2血清生化指标测定试验结束后,把所有活着的鸡称重,每组抓三只进行采血,每只采两份,一份用于血清生化指标:谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性的测定。2.2.3.3血常规指标测定另一份用于血常规指标:红细胞、白细胞和凝血细胞的数量的测定。2.2.4统计分析所有原始数据均先用MicrosoftExcel软件进行简单的汇总,有效率和治愈率、死亡率用卡方检验进行系统分析;再将血清生化指标和血常规指标结果用SPSS统计软件分析软件对进行单因素方差分析和Duncan's多重比较,其数据用“x-±s”表示。3结果与分析3.1试验各组对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗作用由表1可知:健康对照组无死亡,感染对照组病死率为85﹪,健康对照组与感染对照组对比差异极显著(p<0.01)。低浓度黄连解毒汤治疗组和感染组的死亡率对比差异显著(p<0.05),中、高浓度黄连解毒汤治疗组和感染组的死亡率对比差异极显著(p<0.01)。表1试验各组对鸡大肠杆菌病的治疗作用的对比组别试验鸡数//羽死亡数//羽发病数//羽存活数//羽死亡率/%治愈率/%有效率/%健康对照组2000200——感染对照组201720385——低浓度黄连解毒汤治疗组2051915256575中浓度黄连解毒汤治疗组2021818108590高浓度黄连解毒汤治疗组20320171580853.2试验各组对人工感染大肠杆菌鸡只血清生化指标的影响由表2可知:健康对照组和中浓度黄连解毒汤治疗组的ALT、AST活性分别极显著低于攻毒对照组(p<0.01),低、高浓度黄连解毒汤治疗组与攻毒对照组的ALT、AST活性对比差异显著(p<0.05),低、高浓度黄连解毒汤治疗组与中浓度黄连解毒汤治疗组的ALT、AST活性对比差异显著(p<0.05),但低、高浓度黄连解毒汤治疗组ALT、AST活性对比差异不显著(p>0.05)。表2试验各组鸡血清生化指标的对比组别AST(卡门氏单位)ALT(卡门氏单位)健康对照组62.6±11.1A12.5±A攻毒对照组220.5±39.0C59.8±25.7C低浓度黄连解毒汤治疗组118.8±35.8B18.9±8.6B中浓度黄连解毒汤治疗组80.9±25.3A13.5±4.8A高浓度黄连解毒汤治疗组103.7±27.5B17.4±5.5B注:同列数据右上标相同字母一样表示差异不显著(p>0.05);相邻字母表示差异显著(p<0.05);相隔字母表示差异极显著(p<0.01)。3.3试验各组对人工感染大肠杆菌鸡只血常规指标的影响由表3可知:试验各组红细胞数均有变化,但各组的红细胞数之间对比差异不显著(p>0.05),健康对照组和中浓度黄连解毒汤治疗组的白细胞数分别极显著低于攻毒对照组(p<0.01),低浓度黄连解毒汤治疗组的白细胞数显著低于攻毒对照组(p<0.05),高浓度黄连解毒汤治疗组的白细胞数与攻毒对照组的白细胞数差异不显著(p>0.05),但低、中、高浓度黄连解毒汤治疗组之间的白细胞也有显著差异(p<0.05)。对比凝血细胞数能看出:健康对照组和中浓度黄连解毒汤治疗组的凝血细胞数显著高于攻毒对照组(p<0.05),高浓度黄连解毒汤治疗组凝血细胞数量与攻毒对照组相比无显著差异(p>0.05),低、高浓度黄连解毒汤治疗组分别与中浓度黄连解毒汤治疗组有显著差异(p<0.05),但低、高浓度黄连解毒汤治疗组之间无显著差异(p>0.05)。表3试验各组鸡血常指标的对比组别红细胞数(×1012个/L)白细胞数(×1011个/L)凝血细胞数(×1012个/L)健康对照组23.48±6.22A0.40±0.41C2.60±0.16B攻毒对照组20.16±8.86A1.52±0.16A2.05±0.45A低浓度黄连解毒汤治疗组20.45±2.17A0.78±0.22B2.24±0.27A中浓度黄连解毒汤治疗组21.75±4.44A0.42±0.16C2.56±0.34B高浓度黄连解毒汤治疗组20.25±3.27A0.91±0.38A1.98±0.25A注:同列数据右上标相同字母一样表示差异不显著(p>0.05);相邻字母表示差异显著(p<0.05);相隔字母表示差异极显著(p<0.01)。4讨论4.1鸡大肠杆菌治疗效果讨论各浓度黄连解毒汤对鸡大肠杆菌均有效果,而且在血液指标上也表现出一定的疗效,但中浓度治疗效果显著,有效率达到了90%[9]。以上结果可以得出中浓度的黄连解毒汤能有效抑制白细胞的迅速增长,提高红细胞和凝血细胞数,高浓度黄连解毒汤治疗组的红细胞数、凝血细胞数与其他浓度治疗组相比略少,而白细胞数略多,分析其原因大概是由于高浓度黄连解毒汤治疗组用药剂量稍大,使其出现了轻微的中毒现象。鸡患大肠杆菌病会造成肝损伤,从而影响谷丙转氨酶、谷草转氨酶的活性升高,当肝损伤轻微时,ALT指标会明显升高;肝损伤严重时,AST指标会明显升高。黄连解毒汤各浓度均能恢复肝损伤,但中浓度黄连解毒汤治疗组肝损伤恢复相较其他两组效果更好。因此在治疗鸡大肠杆菌病时采用中浓度黄连解毒汤治疗。大量试验研究结果表明:中药组方和各种中药制剂对鸡大肠杆菌病都有一定的治疗作用,对大肠杆菌也有很好的抑制作用[10]。

郭永刚等[11]以金银花、黄连、黄芩、鱼腥草复方制剂对人工感染肉仔鸡大肠杆菌病进行了治疗及预防保护试验,其制剂对大肠杆菌具一定的抑制作用。国内外报道的致病性鸡大肠杆菌的血清型很多,但是以O1、O2、O78为常见的致病力强的血清型[12]。本试验结果表示中浓度黄连解毒汤对O1血清型大肠杆菌具有良好的治疗效果,黄连解毒汤对其他血清型的鸡大肠杆菌作用是否显著还有待探索。4.2黄连解毒汤的作用机理中兽医理论认为鸡大肠杆菌病属于外感温热病范畴,病邪依次进入卫分、气分、营分和血分,由表及里、逐渐加重的发展趋势,基于此对该病辨证论治,治则以清热解毒为主,以凉血止痢、清肝泻火等为辅[13]。黄连解毒汤由黄芩、黄连、黄柏、栀子四味中药组成,黄芩含有的黄芩苷和黄芩素具有较强的抗菌作用,而且不产生抗药性,对急性、慢性炎症均有抑制作用[14],黄芩具有清热燥湿、泻火解毒的功效,为臣药;黄连高浓度杀菌,低浓

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