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DB37/T2995—2017副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术山东省质量技术监督局发布IDB37/T2995—2017本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。本标准主要起草人：吴家强、于江、郭立辉、张玉玉、杜以军、李俊、陈蕾、陈智、孙文博、丛晓燕、时建立、王金宝。本标准为首次发布。1DB37/T2995—2017副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。4缩略语HPS:副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis)5仪器与试剂5.3荧光定量PCR仪。5.6-20℃冰箱。2DB37/T2995—20175.14SYBRGreenI核酸染料(含酶)。5.15蛋白酶K(见附录A.1)。5.1610%SDS液(见附录A.2)。5.1770%乙醇(见附录A.3)。6.1.3细菌培养物：37℃培养24h～48h的细菌培养6.3.5取上清于一新离心管中，加入2倍体积的无水乙醇，-20℃静止20min,10000r/min离心153DB37/T2995—20177.1.2阳性对照Ct值<30,并出现特定扩增曲线，否则，此试验视为无效。Ct值>35,表明样品为阴性。4A.1蛋白酶K溶液(20蛋白酶K灭菌双蒸水(资料性附录)十二烷基硫酸钠灭菌双蒸水灭菌双蒸水无水乙醇灭菌双蒸水5DB37/T2995—2017(规范性附录)表B.1荧光定量PCR反应体系组分反应体系引物P1引物P2灭菌水总量

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