鸡新城疫诊断技术与综合防控措施

近年来，我国使用新城疫疫苗的覆盖率较高，本病的发生逐渐减少，特别是以高发病率、高死亡率的典型性新城疫疫情的影响逐渐减弱，但低发病率、低死亡率、高淘汰率的非典型性新城疫却不断发生。由于非典型性新城疫的临床特点和病理变化与典型性新城疫有很大不同，容易被误诊为其他疾病，且病鸡体内的抗体常高于log28，使鸡新城疫的防控面临新的挑战。1病原学新城疫病毒是副黏病毒科、副黏病毒属的成员，是单股RNA病毒，病毒粒子为蝌蚪样或大小不规则的圆形，直径在100～500nm，由核衣壳、囊膜组成，囊膜外有放射性的突起。新城疫病毒可编码6种结构蛋白（分别为NP、P、M、F、HN和L6），其中NP蛋白可参与病毒基因组的复制，结构蛋白M、F以及HN可参与囊膜的合成，FN和N蛋白主要附着于病毒的囊膜外，M蛋白主要在囊膜内，HN和F蛋白与病毒的致病性有密切关系。新城疫病毒在鸡胚绒毛尿囊膜、尿囊腔中可生长繁殖，在36～72h内导致鸡胚死亡，死亡的胚体有严重出血；新城疫病毒能够在多种动物的培养基内生长繁殖，且均能导致动物细胞产生病变反应。新城疫病毒能够在动物尸体、土壤中存活30d，在0℃的组织、尿液中可存活1年以上，室温条件或温度更高时，病毒的存活时间较短。日光直射、干燥以及常见的消毒药品如乙醚、氯仿等均可较快的将新城疫病毒杀灭。新城疫病毒可按照致病力的不同分为三种类型，分别为缓发型（仅有轻微致病力）、中发型（具有中等致病力）以及强毒型（具有高致病力）。目前大部分地区发生的新城疫均属于缓发型或中发型病毒引起的。使用缓发型毒株制作的疫苗产生的免疫保护力较弱，保护期短，需要重复免疫才能达到良好的效果。而中发型毒株在制作疫苗时可以刺激机体产生更强、更持久的抵抗力，但有可能会引起部分鸡死亡，故部分国家不采用这种疫苗免疫。2流行病学2.1易感动物新城疫病毒能够感染多种禽类，包括鸡、鸽子、火鸡、鹌鹑、野鸭、乌鸦、孔雀等，其中鸡的易感性最强，任何日龄、品种及性别均能感染，且日龄越小的雏鸡越易感。2.2传染源及传播途径患病动物和带毒动物是主要的传染源，新城疫病毒可通过消化道、呼吸道、眼结膜、创伤的皮肤以及交配等多种方式传播，患病动物和带毒动物被感染后24h会通过口腔、鼻腔分泌物向体外排毒，污染周围的空气、水源、饲料、用具等。2.3季节性本病全年均可发生，无明显的季节性，但由于新城疫病毒在低温环境下存活的时间更长，因此在气温较低或气候多变的季节更易发病。3诊断技术3.1初步诊断可根据病鸡的临床症状和剖检特征，结合流行病学特点可初步诊断，但由于鸡新城疫的部分临床症状与禽霍乱、鸡传染性喉气管炎等呼吸系统疾病较为类似，因此应当注重鉴别诊断。按照病鸡的临床症状不同可将鸡新城疫分为最急性型、急性型、慢性型以及非典型新城疫。自然感染条件下本病的潜伏期为4～5d。3.1.1最急性型多发生在疫情暴发初期，病鸡突然发病，无任何症状而突然死亡，主要以雏鸡发病为主，死亡率可达90%，成年鸡感染后不易突然死亡。3.1.2急性型病鸡的呼吸系统症状明显，流鼻涕，流泪，张口呼吸，咳嗽，呼吸紊乱，因呼吸困难会有“咯咯”的喘鸣声，听诊有明显的湿锣音，鸡冠、肉髯发绀；体温升高至44℃左右，昏睡，不愿活动，两翅下垂，垂头缩颈；喙旁有大量的黏液，嗉囊内有液体，如果将病鸡倒提，口腔和鼻腔内会流出大量液体，有酸臭气味，也有的病鸡可通过甩头的方式甩出口腔、鼻腔内的分泌物。病鸡出现下痢，排出的粪便为黄绿色或黄白色，有时伴有血液，后期粪便可为蛋清样。部分病例会出现神经症状，翅部、腿部麻痹，严重影响其行动，出现跛行、站立不稳，有的会出现头颈后仰、头颈向侧方扭转，呈共济失调。3.1.3慢性型在患病初期该型病例与急性型类似，但随着时间的延长，症状逐渐减轻，呼吸系统症状逐渐消失，仅保留神经症状，翅部、腿部麻痹，运动失调，头颈后仰或头颈向一侧扭转。有的也会出现全身瘫痪、一侧瘫痪等，病死率约为15%～45%。3.1.4非典型性相较于前三个类型，非典型新城疫的症状较为缓和，大多数病例没有明显的临床表现，仅表现出精神不振，翅膀下垂，羽毛凌乱，采食量和饮水量均降低，小日龄的雏鸡可能会表现出部分临床症状，如张口伸颈呼吸，口腔、鼻腔中有大量黏液，排绿色稀粪等。随着病程的发展，少数患病鸡有站立不稳，歪头，“观星状”等神经系统症状。产蛋鸡患病时产蛋率下降40%～70%，一段时间后会慢慢回升，但软壳率、小蛋率明显提高，种蛋的受精率和孵化率也会受到影响，此型多发于免疫鸡群。3.1.5剖检特征全身的浆膜、黏膜出现出血，特别是肌胃、腺胃和贲门处存在多处溃疡性坏死灶，并伴有出血；心冠脂肪、心外膜有菜花样病变，可见针尖大小的出血点；呼吸道、消化道充血、肿胀，肠道外侧有大小不一的紫红色肠淋巴滤泡，小肠粘膜有纤维素性、出血性坏死灶，直肠、泄殖腔粘膜出血。3.2实验室诊断3.2.1病原学诊断（1）病料处理对病死鸡可直接无菌采集肝脏、脾脏、肺脏等器官作为病料，经3次冻融后加入PBS溶液研磨，研磨物置于4℃低温离心15min后取上清（转速为10000r/min），将上清移至无菌离心管内，添加10000IU/mL的青霉素和10g/L的链霉素，37℃下感作1h后将液体用0.22μm滤膜过滤。（2）病毒分离鉴定将过滤好的样本接种于10日龄SPF鸡胚尿囊腔内，每个鸡胚接种0.2mL，接种后将蛋置于孵化箱内，间隔6h照蛋1次，将24h后发生死亡的鸡胚置于4℃下保存过夜，收集鸡胚尿囊液，并观察鸡胚的情况。（3）结果判定当胚体出现头、翅、颈、胸等多处出血，尿囊液为清亮状态，同时用病料涂片染色镜检，未发现病原体，几种常见的培养基上无细菌生长，则可判定为新城疫病毒，同时可使用血清学诊断验证。3.2.2血清学诊断（1）病料处理可用血清或鸡蛋作为检测的病料，血清样品是无菌采集患病鸡血液或病死鸡心房内凝血块后进行血清的分离，合格的血清应当新鲜、无杂质、无腐败、不容血，呈微黄色的清亮液体。由于采血可能会造成鸡只应激，因此可使用卵黄抗体检测的方法代替血清效价检测。（2）血凝与血凝抑制试验血凝试验：在96孔板的第一排和第二排分别加入50μL的生理盐水和50μL红细胞，将50μL待检样品加入生理盐水第2孔内，混匀后吸出50μL加入第2孔，直至稀释到第12孔。再在各孔内加入1%的鸡红细胞，震荡2min，室温下静置10～30min。血凝抑制试验：在96孔板的第一、二、三排的各孔中加入50μL生理盐水，在第一排的第1孔内加入50μL待检血清，混匀后吸出50μL加入第2孔，直至稀释到第12孔，稀释完成后像第一、二排各孔内加入4个单位血凝素50μL，震荡2min混匀，室温下静置20min，再在各孔内加入1%的鸡红细胞，震荡2min，室温下静置10～30min。（3）结果判定血凝试验中，第二排为红细胞对照组，全部完全沉降，再观察第一排的凝集情况，以能够使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数作为病毒的血凝价。在血凝抑制试验中，第二排为抗原对照，红细胞全部发生凝集，第三排为红细胞对照组，红细胞全部沉降，再观察第一排的凝集情况，以待检血清能够完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数作为血清的HAI效价。3.2.3分子生物学诊断主要用于检验鸡新城疫病毒的分子生物学方法为PCR法，此外，也可使用RNA指纹图谱法、核酸探针法等其他方法进行检测，但该方法对检测设备和操作人员的要求较高，基层实践中尚未得到推广。4综合防治目前尚没有治疗鸡新城疫的特效方法，因此应当坚持“预防为主，防大于治”的原则综合防控本病。4.1做好免疫接种免疫接种是预防鸡新城疫的主要方法之一，当鸡群的免疫效价在log24以上时，即使用较强毒力的毒株攻击鸡群也能够不发病，但不能保证其生产性能不受影响，但当免疫效价大于log28时，则能够保证产蛋鸡感染强毒后既不死亡也不影响产蛋性能。应当根据各养殖场的实际情况制定免疫程序，可参照如下程序：7日龄雏鸡用弱毒疫苗进行滴鼻首免，疫苗在使用前用蒸馏水稀释10～20倍，每只雏鸡接种0.3mL；24～26日龄时使用弱毒疫苗进行点眼二免，每只鸡接种0.5mL；2月龄以上的鸡可使用Ⅰ系苗（中等毒力苗，适合已经接种2次弱毒力疫苗的雏鸡使用）进行3免，疫苗使用前用蒸馏水稀释100倍，在鸡只翅膀内侧进行刺种，接种后3d即可形成可靠的抵抗力，免疫保护期约为2年。4.2加强饲养管理新城疫病毒虽然只有1个血清型，但有9个基因型，各个国家和地区都通过免疫接种的方式对本病进行预防，致使新城疫病毒的毒株不断出现变异，试验证明，新城疫野毒株间的HN蛋白氨基酸序列的同源度可达98.15%±1.65%，但与传统疫苗毒株（如LaSotaClone30）的同源性仅有88.65%±1.25%，差距比较巨大，因此疫苗有可能已经不能起到很好的预防疾病的作用。这就需要各个养殖场通过不断加强饲养管理来控制新城疫疫情的发生。4.2.1饲料的配制在饲料的配制方面应当保证营养的充足和全面，特别是维生素和矿物质元素的添加，营养全面的日粮能够很好的避免鸡群产生应激反应，有效提升鸡群的抗病力。4.2.2注重环境控制鸡场内应当做好环境控制，及时的清理粪便，至少每日清理1次，保持鸡舍的干净、整洁，在保证舍内温湿度的同时加强通风，避免有毒有害气体在舍内的蓄积。清理出的粪便不得随意堆放，应运送至统一处理地点进行无害化处理。4.2.3严格执行消毒程序养殖场应当制定消毒程序并严格执行，生活区和生产区应当有有效的隔离，养殖场采取封闭式管理，无特殊情况外来车辆和人员不得随意入场，工作人员入场前应当更换工作服，并进行严格消毒，车辆进入时必须经过消毒池，保证消毒效果。鸡舍内每日使用高锰酸钾溶液进行消毒，养殖过程中应遵循“全进全出”的原则，转入鸡苗前要对环境进行彻底的清扫和消毒，并空置一段时间后方可使用。4.3疫情处理（1）当发现鸡新城疫疑似病例时，应立刻对养殖场进行封锁，并上报有主管部门，禁止对场内的鸡群转场、出售。要对养殖场进行全面、彻底的消毒，控制疾病的蔓延和传播。对治疗无效死亡的患病鸡及其接触过的用具、饲料、垫草等均应进行无害化处理，常用的方法包括深埋和焚烧。（2）对未发病鸡应立刻使用弱毒活疫苗进行紧急接种，对日龄较大的鸡可刺种或肌肉注射Ⅰ系苗，但注射时应当仔细核对接种