CAR-T细胞疗法面临的挑战与应对策略

CAR-T细胞疗法面临的挑战与应对策略北京义翘神州科技股份有限公司目录CAR-T细胞治疗研究进展1综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案3CAR-T细胞疗法的机遇与挑战2义翘神州23CAR-T细胞治疗研究进展义翘神州doi:10.1038/nrc.2016.97.CAR-T细胞治疗的流程ChimericAntigenReceptorT-CellImmunotherapy即为CAR-T疗法，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法doi:10.1002/cam4.5551.Epub2022Dec30.全球已上市9款CAR-T产品4义翘神州CAR-T细胞治疗研究进展全球市场情况全球CAR-T细胞疗法市场的历史及预测市场规模（2017年至2030年）国内市场规模：据Frost&Sullivan预测，2030年国内CAR-T市场将达到约289亿元数据来源：Frost&Sullivan预测，光大证券研究所自2017年CAR-T产品首次获批上市以来，全球CAR-T细胞治疗市场迅速扩大全球已上市CAR-T产品历年销售总额5CAR-T细胞治疗研究进展义翘神州6义翘神州1015Studiesfoundfor:CAR-TCELL全球临床研究情况CAR-T细胞治疗研究进展7义翘神州CAR-T细胞治疗研究进展doi:10.1186/s13045-023-01492-8.研发布局情况国内实体瘤靶点临床阶段CAR-T产品8义翘神州CAR-T细胞治疗研究进展企业候选管线靶点适应症临床进展科济药业CT041Claudin18.2胃癌/食管胃结合部腺癌2/3期CT011GPC3肝细胞癌1期原启生物Ori-C101GPC3肝细胞癌1期博生吉TAA06B7-H3神经母细胞瘤1期重庆精准C-4-29CD70肾细胞癌1期斯丹赛GCC19CART鸟苷酸环化酶2C结直肠癌1期（美）重庆精准C-13-60CEA结直肠癌、胃癌和食管癌IND通过蓝盾生物LD013间皮素卵巢癌IND通过拓新天成TX103（未公开）泛癌种实体瘤IND通过传奇生物LB2102DLL3小细胞肺癌IND通过（美）科棋药业KQ-L6（未公开）TM4SF1表达阳性的复发/难治性晚期实体瘤22.9申报IND凯地医疗KD-025MLG3DL肝癌、直结肠癌、胶质癌等实体癌22.12申报IND上海细胞治疗集团--间皮素恶性间皮瘤22.12申报IND易慕峰IMC002Claudin18.2晚期消化系统肿瘤23.1申报IND目录CAR-T细胞治疗研究进展1综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案3CAR-T细胞疗法的机遇与挑战2义翘神州910义翘神州CAR-T疗法的局限性CAR-T细胞疗法的机遇与挑战doi:10.1002/cam4.5551.Epub2022Dec30.11义翘神州doi:10.1038/s41408-021-00469-5.CAR-T细胞疗法的机遇与挑战CAR结构的更新迭代12义翘神州doi:10.1186/s40364-022-00417-w.CAR-T细胞疗法的机遇与挑战CAR的可优化结构胞外结构胞内结构13CAR-T细胞疗法的机遇与挑战义翘神州自体CAR-T商业化中面临的挑战个性化定制导致制备和检测的周期长，无法立即进行治疗患者T细胞质量不同，制备失败的风险很大，批间差异和质控难度也增加难以大批量制备所需细胞费用高昂，产能利用率和病毒载体安全性以及有效性问题doi:10.1016/j.jconrel.2019.12.047.14义翘神州通用型CAR-T的研究从健康志愿者获取T细胞并进行基因编辑敲除相关基因以及转入CAR基因后制成的CAR-T细胞，最主要的优势在于不需要从患者体内获取T细胞进行定制，而是可以做到现货供应，可立即用于临床治疗并方便开展多次回输，节约时间和治疗花费。doi:10.3389/fimmu.2021.640082CAR-T细胞疗法的机遇与挑战15义翘神州

doi:10.3389/fimmu.2021.640082异体移植细胞攻击宿主细胞引发移植物抗宿主病（GvHD）：敲掉TCR的α或β一条链的恒定结构域，消除TCR来避免GVHD宿主抗移植物反应（HVG）阻碍异体细胞在体内扩增，疗效较差：敲除β2-微球蛋白，阻止HLA-I表达，可以阻止宿主T细胞将治疗用CRA-T细胞识别为外来细胞，以此来避免免疫排斥反应基因编辑安全性检测的手段：杂质残留，编辑效率提升、脱靶情况预测分析通用型CAR-T的限制CAR-T细胞疗法的机遇与挑战16义翘神州CAR-T的发展方向预期发现新靶点，或者使用双靶点：血液疾病、实体瘤等优化CAR结构，增加CAR-T细胞的存活时间，提高CAR-T细胞疗效，降低回输后的不良反应阻断免疫检查点、共表达增强细胞功能的细胞因子使用多种来源的细胞制备通用型CAR-T细胞：健康供者、iPSC诱导等溶瘤病毒、RNA疫苗其他免疫细胞等联合使用目录CAR-T细胞治疗研究进展1综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案3CAR-T细胞疗法的机遇与挑战2义翘神州17助力CAR-T开发全流程CAR开发scFv/VHH开发抗体人源化高通量抗体生产检测用细胞株构建T细胞激活CD3抗体CD28抗体慢病毒包装293培养基及补料液核酸酶核酸酶残留检测试剂盒细胞库检测CAR-T细胞制备扩增GMP级细胞因子细胞凋亡检测试剂盒流式抗体靶点蛋白细胞因子ELISA试剂盒18综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案义翘神州CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增杂交瘤技术平台噬菌体展示技术平台单B细胞技术平台19义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案20抗体人源化义翘神州鼠源VHH人-鼠嵌合抗体VHH-Fc人源化抗体高亲和力抗体人源化亲和力成熟抗体人源化服务流程：抗体序列CDR确认抗体建模摸索人源抗体模板关键氨基酸确认CDR移植抗体建模比对回复突变抗体表达亲和力检测综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增SPR是制药行业的“金标准”，被收录进《2020版中国药典》BLI是全球增长最快的非标记（label-free）检测技术scFv亲和力检测21义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增EffectofhumanCD28antibodyonstimulatingIL-2secretionofCD4Tcellsco-activatedwithCD3antibody.

AntiCD28antibody：GMP-11524-H001

EffectofHumanCD3antibodyontheproliferationandIFN-gammasecretionofCD4+Tcell.

AntiCD3antibody：GMP-10977-H00122T细胞激活抗体产品信息靶点货号纯度（SEC-HPLC）内毒素含量（EU/mg）HumanCD3(humanizedOKT3)GMP-10977-H001>95%<0.5HumanCD28GMP-11524-H001>95%<0.5义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增慢病毒包装是CAR-T制备过程中的关键环节慢病毒滴度是决定CAR转染阳性率的关键因素慢病毒悬浮包装培养系统组成：培养基：无血清悬浮培养基（Cat：M293TII，M293CD1）转染试剂：阳离子聚合物（Cat：STF02）补料液：培养基添加液（Cat：M293-SUPI）23义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案241.3.2工艺相关杂质生产若使用了肿瘤细胞系（如Hela细胞）、致瘤细胞系，或携带有致癌基因、病毒来源序列的细胞（如HEK293T细胞），在确保无完整活细胞残留的同时，需对DNA的残留量和残留片段大小进行控制，合理拟定标准限度。如有可能，建议尽量将残留DNA控制在10ng/剂以内，DNA残留片段的大小控制在200bp以下。慢病毒包装过程中核酸残留去除至关重要义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增非限制核酸酶DNA/RNA超高的活性应用场景广泛使用量低，不易残留慢病毒下游工艺微滤澄清0.45μm核酸酶处理超滤浓缩精纯层析超滤浓缩除菌0.22μmGMP级核酸酶（cat：GMP-SSNP01）25义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增中文名称全能核酸酶货号GMP-SSNP01CASNo.9025-65-4DMF

NO.35798提供剂型液体（甘油）/液体（无甘油）提供规格50kU/500kU/5000kU储存条件-20℃--80℃成分2kU/μl工程细胞Escherichiacoli(E.coli)存储液配方20mMTris,20mMNaCl,2mmMgCl2pH:8.0酶单位在标准反应体系内30分钟内使OD260改变1.0的酶量核酸酶推荐使用条件核酸酶产品信息26义翘神州ConditionOptimal*Effective**Mg2+1-2mM1-10mMpH8.0-9.55.5-9.5Temperature37℃0-50℃Dithiothreitol(DTT)0-200mM>200mMMonovalentcation0-100mM0-400mMConcentration(Na+,etc.)PO43-0mM0-50mMTween200-0.8%0.80%Brij350-0.8%>0.8%综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增不同品牌核酸酶ELISA试剂盒检测SuperNuclease含量不同品牌核酸酶ELISA试剂盒变性前后Benzonase®endonuclease核酸酶含量稳定性准确性专属性KIT-SSNP01

测定范围46.87-3000pg/mL

准确性标准品回收率：80%-120%

精密度CV(<15%)

灵敏度11.72pg/mL可以准确检测出：Supernuclease核酸酶Benzonase®

核酸酶核酸酶残留检测试剂盒27义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增生物安全细胞库检测28义翘神州1.2生产辅助细胞根据用途或功能，生产辅助细胞可能为病毒包装细胞、滋养细胞（Feeder

cells）等，生产辅助细胞，应符合来源和培养传代历史清除、安全性风险可控、进行细胞库分级管理（如适用）、检验结果合格的基因原则。综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增29义翘神州国内外对于细胞治疗药物中关键原材料的选择有明确法规要求药品级＞GMP级＞RUO级国内/外法规名称国内《细胞治疗产品研究与评价指导原则（试行）》-2017年《生物制品生产用原材料及辅料质量控制》--中国药典三部-2020年《药品生产质量管理规范-细胞治疗产品附录》-2022年《免疫细胞治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行）》-2022年国外USP<92>用于细胞治疗产品生产的生长因子和细胞因子USP<1043>用于细胞、基因与组织工程产品的辅助材料/指导性通则EP5.2.12用于细胞和基因治疗药物产品生产的生物来源的原料ISO/TS20399-1:2018生物技术-细胞治疗产品生产过程中的辅料综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增质量保证管理体系人员及培训管理体系厂房设施、设备管理体系原材料及供应商管理体系文件和记录管理体系所有文件和记录均经过QA审核或批准GMP级质量管理体系符合《药品生产质量管理规范》体系符合ISO9001:2015和ISO13485:2016体系FDADMF备案质量控制体系符合《中国药典》2020年版三部通则符合USP<1043>AncillaryMaterialsForCell,Gene,andTissue-engineeredProducts产品安全性检测体系细菌内毒素＜5-10EU/mg宿主蛋白残留检测＜0.5μg/mg（500ppm）宿主DNA残留检测＜100pg/mg支原体检测无菌检测外源病毒检测异常毒性检测30文件齐全更规范更安全更稳定义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案提供配套的产品手册制剂形式：液体有效期原材料分类说明产品原产地说明TSE/BSE声明稳定性数据营业执照质量管理体系认证证书产品质量标准产品检验报告书REACH声明MSDS…31申报无忧！义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案32更规范更安全更稳定文件齐全义翘神州提供高品质的GMP级细胞因子靶点货号内毒素支原体检测无菌检测宿主DNA残留IL-2GMP-11848-HNAE<0.005EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mgIL-7GMP-11821-HNAE<0.01EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mgIL-15GMP-10360-HNAE<0.01EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mgIL-21GMP-10584-HNAE<0.005EU/μgNegativeNOGrowth<100pg/mg义翘神州活细胞比例细胞群或亚群比例目的细胞比例CAR-T细胞阳性率检测JurkatHela33细胞凋亡检测试剂盒产品列表产品名称货号AnnexinV-FITC/7-ADD凋亡检测试剂盒APK10448-FAnnexinV-PE/7-ADD凋亡检测试剂盒APK10448-P与国外品牌对比，准确区分凋亡早、晚期细胞义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增活细胞比例细胞群或亚群比例目的细胞比例使用CD4抗体（Cat：10400-MM08F）和CD8抗体（Cat：10980-MM28-F）通过流式细胞术检测人外周血淋巴细胞表面CD4和CD8分子的表达。流式抗体检测CAR-T细胞群及亚群比例34义翘神州综合性CAR-T细胞疗法开发解决方案CAR-T细胞阳性率检测CAR开发T细胞分离、活化慢病毒包装CAR-T细胞制备、扩增活细胞比例细胞群或亚群比例目的细胞比例靶蛋白预标记荧光素基团简化检测流程，节约时间减少非特异荧光标记蛋白01分子量小，几乎不影响蛋白活性链霉亲和素-生物素高特异结合高亲和力、高灵敏度生物素标记蛋白02可用荧光标记二抗进行检测具有高灵敏度可能会引起非特异非标记蛋白03CA