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文档简介

血清碱性磷酸酶活性测定授课教师：生物化学与分子生物学实验CQMU2008实验目的1.学习血清碱性磷酸酶活性测定的原理及方法2.了解血清碱性磷酸酶活性测定的临床意义基本概念酶活性：即酶催化化学反应的能力。酶的活性通常以活性单位表示。它反映在规定的条件下，酶促反应在单位时间内（秒、分或小时）生成一定量的产物（mg、μg、μmol）或消耗一定量的底物所需的酶量。基本概念酶活性单位是衡量酶数量的尺度，同一种酶由于实验方法、测定条件不同，酶活性单位的规定也不同。在相同测定条件下，酶活性单位越大，表示酶的含量越高，酶促反应速度越快。惯用单位：酶活性测定方法的建立者所规定的单位。国际单位(IU)：1IU指在规定条件（最适pH，最适底物浓度）下，每分钟转化1

mol底物的酶量。Katal单位：1Katal指在规定条件下，每秒钟转化1mol底物的酶量。1Katal=60×106IU本实验以血清在37℃，pH为10的条件下，与AKP底物液作用30min，每生成1mg酚所需的酶量为1个酶活性单位。实验原理碱性磷酸酶（AKP）在碱性条件下催化磷酸苯二钠水解，释放出酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色的醌类化合物。碱性磷酸酶磷酸苯二钠磷酸+酚+4-氨基氨替比林铁氰化钾醌类化合物实验原理碱性磷酸酶：一组在碱性条件下水解磷酸酯键的酶类。广泛分布在人体的骨、肾、肠、血清、胆汁等部位，以骨骼，牙齿、肾和肝中含量较多。正常人血清中的AKP主要来源于骨骼、肝胆和肠道。方法评价优点：灵敏度较高，显色稳定，不需去蛋白，操作简单、快速；缺点：准确度和精密度都较低,受胆红素和溶血的干扰。实验材料与仪器器材：新鲜血清、移液器、试管及试管架、吸量管、恒温水浴箱、分光光度计

移液器

1.调刻度

2.取样

注意：加不同物质换

枪头实验材料与仪器试剂盒：1.混合液：磷酸苯二钠、4-氨基安替比林2.标准液：已知浓度的酚溶液3.样品：血清4.蒸馏水5.显色剂:高铁氰化钾试剂空白标准测定蒸馏水（ul）50——标准液（ul）—50—样品（ul）——50混合液（ml）111充分混匀，37℃水浴30min显色剂（ml）222充分混匀，显色3min，空白调“0”，510nm比色A0？？实验步骤注意事项1.酶加量准确2.水浴时间准确结果计算C测=A测/A标×C标参考范围成人：24-92u/L儿童：35-140u/L临床意义

血清AKP测定可用于骨骼系统及肝胆系统疾病的辅助诊断。是临床常做的酶类检验项目之一。活性升高

——骨病、恶性肿瘤骨转移、佝偻病、骨软化、骨折愈合期、成骨细胞瘤

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