食用菌种质资源收集与保存技术规程

1食用菌种质资源收集与保存技术规程本文件规定了食用菌种质资源收集与保存技术的术语和定义、保存库（室）建立，种质资源收集、鉴定、整理及保存。本文件适用于食用菌种质资源收集与保存的机构。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T12728食用菌术语GB19489GB50068GB50223GB50346实验室生物安全通用要求建筑结构可靠度设计统一标准建筑工程抗震设防分类标准生物安全实验室建筑技术规范DB15/T1024食用菌菌种资源描述规范3术语和定义GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1食用菌ediblefungi指子实体硕大、可供食用的蕈菌(大型真菌)，通称为蘑菇。3.2食用菌种质资源germplasmresourcesofediblefungi指可培养的有一定科学意义、具有实际或潜在实用价值的食用菌及其相关信息数据。3.3菌种保藏preservationofculture指将食用菌菌种用各种适宜的方法妥善保藏，避免死亡、污染，保持其原有性状基本稳定。4保存库（室）建立24.1选址远离工矿区、公路铁路干线和城镇生活区等污染地区。要求地势平坦、排灌便利、交通便捷，避免污染源。4.2规划设计资源保存库（室）设为引种观察区和保存区，观察区和保存区建设要求相同，观察区用于收集资源的观察，保存区用于资源的保存。4.3保存库（室）建设标准与规模保存库（室）建设标准严格按照GB19489、GB50068、GB50223和GB50346执行，建设规模根据需保藏种质资源的多少进行科学合理设计。5资源收集5.1收集对象现有栽培种、地方品种、野生种、有利用价值的种质资源。5.2信息记载记载资源的名称、类型、收集时间、地理位置、所属单位、遗传背景、生长地水土气候条件、特征特性（如颜色、形状、大小、抗性等）、影像资料，并对资源进行编号（如种类、来源、顺序等信息）。5.3资源收集5.3.1菌种实物的收集收集的菌种实物为纯培养物。菌种可通过自行分离、交换、购买、接受委托保藏、接受赠送等途径收集。5.3.2菌种信息的收集5.3.2.1提供者提供菌株的研究和鉴定材料，据实填写保藏机构的登记表格，由保藏机构签收入档。5.3.2.2保藏机构进一步收集和完善菌株的相关信息。5.3.2.3菌种信息建立电子数据库，录入菌落、子实体照片等原始直观信息。6资源鉴定6.1菌丝特点根据菌丝颜色、生活力、有无锁状联合等特点与相应菌种进行鉴定。6.2内在特性鉴定6.2.1出菇试验在各级菌种的培养基成分、培养温度、培养时间及栽培条件基本一致的情况下进行出菇试验。36.2.2抗热性试验将菌种放在适宜条件下培养，待菌丝长到1/2试管斜面时，每一菌株取出2~3支试管，放在温度上限环境下，经过24h作抗热性处理，然后放到适宜温度下培养，观察菌丝恢复情况，判别抗热能力。6.2.3抗霉性测定采用平板测定的方法，观察菌丝与霉菌的交界处是否有拮抗线，判别抗霉能力。6.2.4分子生物学鉴定印迹分析脉冲电场凝胶电泳（PFGE）以及小亚基rDNA（或rRNA）序列测定等方法进行鉴定。对于远缘种，采用3-4个保守基因的克隆/测序后，进行系统发育分析。对于近缘种，采用AFLP或RAPD等其中一种后，进行系统发育分析6.3直观观察仔细观察菌丝生长是否正常，是否老化，有无杂菌、虫害感染，同时检查瓶袋有无破损等。7资源的整理7.1菌种纯度检测7.1.1纯菌种的纯度要高，不能有杂菌感染，也不能有其他类似的菌种。7.1.2正菌丝色泽要纯正，多数种类的菌丝应纯白、有光泽，原种、栽培种菌丝应连结成块，无老化变色现7.1.3壮菌丝要粗壮，分枝多而密，接种到培养基吃料快，生长旺盛。7.1.4润培养体要湿润，与试管（瓶）壁紧贴而不干缩，含水适宜。7.1.5香具有每品种特有的清香味，不可有霉、腐气味。7.2菌种复核具体方法严格按照《国家自然科技资源平台微生物菌种资源复核技术规程（试行）》。7.3菌种编号将复核后的菌株进行编号。47.4数据整理7.4.1严格按照DB/T1024对菌株进行数据整理。7.4.2建立菌株的纸质信息和数字化信息档案并备份。7.4.3档案需安全存放，注意防潮、防霉、防虫、防火、防磁和防盗。8资源的保存8.1菌种保存8.1.1前期准备检查保存设施，应确保正常运行，设专人负责管理，定期检修维护。设施应有备用电源，防止断电事故发生。8.1.2保存方法可采用液氮超低温保藏法、低温定期移植保藏法、液体石蜡保藏法、自然基质保藏法、沙土管保藏法、滤纸片保藏法、生理盐水保藏法、蒸馏水保藏法等，针对保存菌株确定适宜的方法，同一菌株选用两种或两种以上方法进行保存，只能采用一种保藏方法的菌株必须备份并存放于两个以上的保存设备中，重要菌种应异地保存备份。8.1.3记录入档菌种的入库和出库应记录入档，实行双人负责制