义翘讲堂《纳米抗体开发策略及案例分享》

纳米抗体开发策略及案例分享北京义翘神州科技股份有限公司义翘神州CONTENT纳米抗体简介1纳米抗体开发流程2义翘神州纳米抗体开发案例分享3纳米抗体人源化改造案例分享4纳米抗体简介01义翘神州义翘神州首次发现重链抗体1993200120072016201820212022Ablynx成立纳米抗体首次进入临床KN-035进入临床第一个纳米抗体药物在欧盟获批KN-035中国获批上市首款纳米抗体CAR-T细胞获得FDA批准上市；首款双抗纳米抗体药物在日本获批CaplacizumabKN-035Ozoralizumabcilta-cel纳米抗体药物开发代表性历程义翘神州150kD80kD15kD常规抗体骆驼纳米抗体鲨鱼纳米抗体1.Mini-antibodiesdiscoveredinsharksandcamelscouldleadtodrugsforcancerandotherdiseases2.Int.J.Mol.Sci.2022,23,50093.

(1994)JMolBiol

243:767-7814.(1996)NatStructBiol

3:803-8115.

(2004)Science

305:1770-1773纳米抗体特征和优势义翘神州临床诊断、分子成像、药物递送靶向载体单抗、双抗、多抗治疗性抗体CAR-T、CAR-NK细胞治疗VHHVHHVHHVHHVHHVHHVHH纳米抗体应用前景义翘神州DOI：10.3867/j.issn.1000-3002.2021.09.001DOI：10.3389/fimmu.2021.838082纳米抗体发展趋势多功能纳米抗体在治疗领域的发展趋势纳米抗体文献每年发文量全球纳米药物市场规模预测纳米抗体开发流程02义翘神州义翘神州VHHhingeCH2VHHVHHHisgIIIVHHVHH

②③④⑤PhageLibraryWashingTargetBindingPhageElutionPhageAmplification①羊驼免疫取外周血分离PBMC提取RNA一次PCR巢式PCR噬质粒纳米抗体制备实验流程VHHVHH义翘神州羊驼免疫流程免疫剂量0.5-1mg/只次免疫间隔2~3周免疫次数3~6次自三免起，血清效价检测效价合格PBMC建库效价不合格追加免疫羊驼的选择：免疫背景空白、健康；免疫方式：可选择同时免疫1-3种抗原；免疫部位：皮下、皮内、淋巴结附近；免疫效价：>1:10万；义翘神州28S18S5S1000bp700bp400bpRNA提取第一轮PCR第二轮PCR插入率验证原库CDR3多样性纳米抗体噬菌体文库构建义翘神州淘洗轮数Input(pfu)Output(pfu)Recovery(Output/Input)富集度

1st2.10E+124.23E+052.01E-07-

2nd1.85E+129.70E+065.24E-0626.09

3rd1.20E+123.55E+072.96E-055.654th1.07E+121.78E+071.66E-050.56

4轮筛选后的噬菌体富集程度噬菌体库ELISA检测Absorbance(OD450nm)纳米抗体噬菌体文库淘洗义翘神州

Absorbance(OD450nm)噬菌体单克隆ELISA特异结合检测噬菌体单克隆ELISA竞争检测纳米抗体噬菌体单克隆鉴定竞争抑制率%受体/抗原摩尔比=2/1受体/抗原摩尔比=5/1受体/抗原摩尔比=20/1义翘神州

义翘神州噬菌体展示平台筛选方法多样：固相、液相、细胞筛选；筛选策略灵活：差减、竞争、交叉、夹心；克隆上清介入评价：流式、ELISA、竞争。3000+株单抗产品；支持多种应用：FACS、WB、IHC、IF抗体；保证高亲和力、特异性抗体。天然库和免疫库，多种免疫方案；多种属，小鼠、兔子、羊驼、鸡、人；免疫库的库容高达109以上，序列插入正确率高达100%。建库淘筛产品服务丰富的CRO服务经验：500+服务；5~6周完成建库、筛选和分子构建；提供多种抗体服务：抗独特型抗体、中和抗体、纳米抗体、抗体亲和力成熟。纳米抗体开发案例分享03义翘神州义翘神州

Ag-1Ag-2Ag-3Ag-4Ag-5Ag-6DilutionAg-1Ag-2Ag-3Ag-4Ag-5Ag-6库容交付1:1.0E+050.20.61.71.81.01.92.7*10910unique/Ag与Ag-1特异结合与Ag-2特异结合与Ag-3特异结合与Ag-4特异结合与Ag-5特异结合与Ag-6特异结合案例1-多种抗原共免疫的特异性纳米抗体筛选义翘神州

案例2-TROP2纳米抗体筛选与HUVEC结合与细胞系Colo205结合流式內吞检测內吞效率（%）义翘神州

案例2-TROP2纳米抗体筛选0h1h对照抗体11h对照抗体20h0h1h对照抗体3Nh0410h1hNh0630h1hNh0640h1hSampleIDKD(M)Kon(1/MS)Koff(1/S)对照抗体11.95E-082.59E+055.06E-03对照抗体15.01E-102.60E+051.30E-04对照抗体31.29E-072.16E+042.78E-03TROP2-N,h0411.83E-081.49E+052.72E-03TROP2-N,h0637.61E-095.49E+054.17E-03TROP-N,h0647.24E-096.30E+054.56E-03对照抗体1对照抗体2对照抗体3Nh041Nh063Nh064CancerRes.2011March15;71(6):2250–2259免疫荧光內吞检测亲和力检测SampleIDIC50（ug/mL）EC50（ug/mL）对照抗体10.144260.38对照抗体20.14190.33PD-L1-Nh3940.083440.23PD-L1-Nh4840.107230.51SampleIDKD(M)Kon(1/MS)Koff(1/S)对照抗体16.60E-096.96E+044.59E-04对照抗体26.37E-101.82E+051.16E-04PD-L1-Nh3941.44E-091.01E+051.45E-04PD-L1-Nh4843.42E-091.75E+055.98E-04案例3-PD-L1纳米抗体开发对照抗体1对照抗体2Nh394Nh484义翘神州亲和力检测阻断活性

细胞活性纳米抗体人源化改造案例分享04义翘神州义翘神州纳米抗体结构特点DOI：10.1146/annurev-biochem-063011-092449义翘神州IDEC50（nM)NetOD450Nb-WT998.21.8799hNb-1798.11.9205hNb-2930.62.4716hNb-3433.42.0546hNb-4522.12.2649hNb-5210.62.3138hNb-6683.62.5368纳米抗体人源化案例-结合检测义翘神州IDKon(1/MS)Koff(1/S)KD(M)人源化程度Nb-WT1.327E+051.379E-031.04E-08—hNb-11.292E+051.072E-038.3E-0993.2%hNb-20.781E+057.381E-049.45E-0995%hNb-31.373E+058.311E-046.051E-0995.8%hNb-41.347E+057.336E-045.448E-0995%hNb-52.139E+051.126E-035.266E-0995%hNb-62.078E+059.535E-044.589E-0995.8%Nb-WThNb-1hNb-2hNb-3hNb-4hNb-5hNb-6纳米抗体人源化案例–亲和力检测关于“北京义翘神州”坚持自主研发生产打造中国生命科学研究“一站式”试剂与服务支撑平台人才与设施荣誉资质设施：---25,000+平米研发中心

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