济宁感染性腹泻病例监测哨点医院区级及以上

——附件5济宁市感染性腹泻暴发疫情基本情况调查表编号姓名性别年龄职业发病日期发病时间首发症状腹泻次数（/天）大便形状呕吐次数（/天）腹痛恶心发热（最高体温）其它症状是否就诊症状消失时间是否采集标本调查单位：调查时间：调查者签名：附件6标本采集、保存、运输及检测技术指南一、标本采集（一）病例标本的采集采集粪便标本，由受过专门培训的人员来施行，并填写采样登记表。优先采集就诊时未使用过抗生素的病例标本。注意生物安全防护，防止污染、传播和自身感染。标本应做好相应标记。采集粪便使用无菌容器。用6支无菌棉拭多点采集粪便标本（如有脓血或黏液应挑取脓血、黏液部分，液体粪便应取絮状物，使棉拭表面布满粪便），分别插入1支C-B运输培养基，棉拭子应尽量全部插入培养基内，以保证弯曲菌所需的微需氧环境，迅速拧紧管口。另外再分5ml粪便放到无菌粪便采样杯（盒）（不加任何培养基和试剂），置于-20℃或-20℃以下冷冻保存。（二）水标本的采集无菌采集表层水1000mL(水平面下30cm内)，并应注意防止水样间相互污染。采集表层水体样品时用提前准备好的无菌广口容器，标记好。（三）水产品的采集个体较大的动物性水产品以一个个体为单位单独取样；个体较小的鱼类、虾、蟹和贝等，混合采取样品，每份样品的最少采样量为500g，注意尽量体现样品代表性。样品采集后放置在一个提前标记好的无菌塑料袋中，应标记清晰，避免不同样本之间的交叉污染。（四）标本的保存和运输用于细菌检测的粪便标本如不能立即送检，需保存于4℃冰箱或冷藏包，但不应超过12小时。用于病毒检测的粪便样本采集后30min内放入-20℃冰箱中，保存期内避免样本发生反复冻融。所有标本置于冷藏包（配备冰排），由专职人员运输至监测点实验室，在动输过程中需防止容器破碎、洒漏、颠倒，注意生物安全防护。水标本及水产品送检样品应尽可能保持采集时的温度，尽快送达实验室进行检验。运送过程中应避免交叉污染。如果在炎热夏季，运输温度应在10℃左右（但不得低于7℃），以避免弧菌损伤或死亡。二、细菌检测（一）标本处理1.直接分离培养：采集的标本直接划线接种选择性平板进行培养，包括麦康凯平板、XLD平板、STEC平板、科玛嘉沙门菌显色平板、科玛嘉弧菌显色平板、TCBS平板，放置37℃培养；接种mCCD平板，放置42℃微需氧环境下培养。2.增菌培养：将标本同时接种于碱性蛋白胨水，于37℃培养6小时后，接种科玛嘉弧菌显色平板或TCBS平板；接种SGB增菌37℃培养18小时后，接种科玛嘉沙门菌显色平板；接种3%氯化钠蛋白胨水增菌液，37℃培养12～16小时后，接种于科玛嘉弧菌显色平板或TCBS平板；接种Preston肉汤增菌42℃微需氧培养24～48小时，接种改良CCD平板，42℃微需氧培养1天～5天。3.水体样品：无菌操作取450mL，加入10倍浓缩培养液50mL，混匀。4.水产品鱼类样品：应先用自来水简单冲洗并甩干表面水分，以无菌操作先开鱼背，取可食用部分25g（表皮组织和肉）作为1份样品。剪碎，无菌操作称取25g，加入3%氯化钠碱性蛋白胨水225mL，用旋转刀片式均质器以8000r/min均质1min，或拍击式均质器拍击2min，制备成1:10的样品匀液。甲壳类样品：参照鱼类样品操作。虾类的取样部位应包括虾壳、肉、头胸节内的内脏和腹节外延处的肠管。蟹类的取样部位应包括肉、胃和鳃条等。软体动物样品：参照鱼类样品操作。取样部位为内容物（应包括肠、消化腺）。（二）菌株分离和鉴定1.菌落形态鉴定：在STEC显色平板上挑取5个形态特征典型的可疑产毒性大肠杆菌菌落分别保存在半固体培养基中送省CDC进行后续检测；在其它各种选择性培养基上分别挑取5个形态特征典型的可疑菌落(参考附录5相关内容：病原体在不同选择性培养基上的菌落特征)进行纯化或血清凝集试验，同时进行革兰染色。2.生化鉴定：初步生化鉴定包括氧化酶试验、动力、双糖等。对经初步生化鉴定结果符合的菌株用API生化鉴定条或全自动生化鉴定仪进行系统生化鉴定。如使用VITEK2鉴定者，要求将每株疑似菌株鉴定报告附于菌株送检单后面。3.血清学鉴定：使用病原菌特异血清进行玻片凝集，初步血清鉴定后再进行血清分型。（三）疑似菌株的保存和运送除志贺菌、空肠弯曲菌和副溶血性弧菌不上送外，其它菌株分别接种半固体琼脂，37℃过夜，在室温下保存送检，不要冷藏。病毒核酸检测阳性的粪便标本冷藏送省CDC。粪便样本的保存、运送和检测培养条件项目培养基目标病原体温度细菌标本保存和运送1.Cary-Blair氏运送培养基所有感染性腹泻综合监测致病菌4℃增菌液1.3%氯化钠碱性蛋白胨水副溶血性弧菌37℃2.碱性蛋白胨水霍乱弧菌37℃3.Preston肉汤弯曲菌微需氧42℃4.SBG增菌液沙门菌37℃选择性分离平板1.Mac平板EPEC、STEC、ETEC、37℃EIEC、EAEC、志贺菌2.XLD平板志贺菌37℃3.mCCD平板弯曲菌微需氧42℃