1.2发酵工程的无菌技术第1课时课件高二下学期生物选择性必修3

第二节

发酵工程的无菌技术第1课时

发酵工程的灭菌方法、灭菌设备、无菌操作器具及微生物接种和传代的无菌技术学习目标学科核心素养1.掌握不同物品的灭菌方法。2.概述发酵工程中的灭菌设备和无菌操作器具并掌握其正确使用方法。3.概述微生物的接种方法和传代的无菌技术。1.生命观念——形成“有菌”意识，认识到无菌技术的重要性。2.科学思维——运用归纳的方法概括无菌技术的常用方法及原理。3.科学探究——利用无菌技术进行斜面接种和培养酵母菌。教材预习·必备知识全过关一、发酵工程的灭菌方法1.

无菌技术：发酵工程的重要技术之一，是指在操作过程中，保持物品与操作区域的______状态并不被________污染的技术，其核心是______。无菌微生物灭菌2.

灭菌方法种类概念应用或注意事项化学试剂灭菌法一些化学试剂如甲醛、____、高锰酸钾，能破坏微生物的________或细胞结构，具有杀菌作用，可以用作灭菌剂。采用灭菌剂灭菌的方法称为化学试剂灭菌法灭菌剂可能会与培养基的一些成分发生作用，因此一般不用于________的灭菌氯蛋白质培养基种类概念应用或注意事项射线灭菌法利用________等产生的___________进行灭菌的方法紫外线的穿透力弱，一般用于____________的灭菌干热灭菌法在干燥环境下，用高温杀死细菌和细菌芽孢的技术，包括__________灭菌法和__________法主要用于要求__________的实验器具（如培养皿、________和移液管）的灭菌；火焰灼烧法常用于______等操作过程紫外线

高能粒子表面和空气干热空气

火焰灼烧保持干燥接种针接种续表种类概念应用或注意事项湿热灭菌法利用__________进行灭菌的方法

.在温度为_____

、气压约_____

的条件下维持

；

.蒸汽穿透力____，蒸汽与较低温的物体表面接触凝结为水时可放出______能量，吸收了蒸汽水分和热量的菌体蛋白质易______；

.在相同温度下湿热灭菌比干热灭菌________过滤除菌法通过______阻留微生物从而达到除菌目的的方法

.在工业生产上制备__________，用于好氧微生物的发酵；

.在产品提取过程中，也可以利用过滤除菌法处理料液，以获得______产品饱和蒸汽121100大大量变性更有效过滤无菌空气无菌续表二、发酵工程的灭菌设备1.

电热鼓风干燥箱适用对象常用于空的__________（如培养皿、离心管、移液管）、金属用具（如______、手术刀）和其他耐______的物品（如菌种保藏采用的沙土管、石蜡油、碳酸钙）的灭菌，但带有胶皮或塑料的物品、液体及固体培养基一般______采用该方法干热灭菌优点使灭菌器皿保持______注意事项不得将易腐、易燃、易爆物品放入箱内干燥灭菌；干燥箱工作时，必须将风机开关打开，否则会导致电机或传感器烧坏；箱内应经常保持清洁，长期不用应套好防尘罩，放置在干燥的室内等玻璃器皿镊子高温不能干燥2.

高压蒸汽灭菌锅（1）

高压蒸汽灭菌锅的灭菌原理、分类及注意事项灭菌原理在一个密闭的锅内，水的沸点随蒸汽压力的增高而上升，加压的同时提高蒸汽的温度，使锅内的待灭菌物品在一定____________等条件下，杀死其中所有微生物的________________类型手动式高压蒸汽灭菌锅和全自动高压蒸汽灭菌锅注意事项操作人员必须在现场规范操作，严格控制热源维持灭菌时的______。锅内压力过高，不仅培养基的__________会被破坏，而且高压锅超过耐压范围后可能会发生爆炸，造成伤人事故等压力和温度营养体及其芽孢压力营养成分（2）

手动式高压蒸汽灭菌锅的使用步骤过少

排气阀降至“0”点温度下降3.

空气除菌设备适用对象空气除菌是______发酵的关键环节，发酵工程中常采用______________的方法来净化所需空气除菌原理让含菌空气通过__________的过滤介质，以阻截空气中所含________要求不同微生物的发酵过程对空气无菌程度的要求不同。例如，酵母菌繁殖得快，对空气的无菌要求相对______；而制备氨基酸、抗生素等的发酵过程，所需的微生物对空气无菌的要求______好氧空气过滤除菌无菌干燥微生物较低较高三、发酵工程的无菌操作器具1.

接种器具（1）

接种：在______条件下将微生物接入________的操作过程。（2）

常用的接种器具包括玻璃涂布器、________、接种环等。（3）

应用：玻璃涂布器常用于______________接种，接种针用于______接种，接种环用于______接种或在平板培养基上______接种。无菌培养基接种针平板稀释涂布穿刺斜面划线2.

转移器具（1）

移液管的应用：一般用于转移部分______培养物、__________微生物或______化学试剂。（2）

刻度移液管：具有______的直形玻璃管。在需要控制试剂________时使用。液体系列稀释分装刻度加入量（3）

使用要点

以上过多吸空（4）

操作步骤液面

下端外壁垂直缓缓下端顺壁（5）

微量取液器

很少可调3.

超净工作台概念一种经过______净化而形成高洁净操作环境的设备净化原理利用工作台内__________的杀菌作用，并通过____________过滤确保工作台内空气的无菌、无污染注意事项开机杀菌

后，需先关掉__________，约_

_______后方可使用优点操作方便空气紫外线灯空气过滤器紫外线灯

四、微生物接种和传代的无菌技术1.

菌种的传代和保存的原理：要考虑菌种的______、______特性，尽量让菌种在人工创造的条件下，______细胞的代谢水平，使细胞基本处于______状态，即微生物的生长繁殖受到抑制但又不至于______。生理生化降低休眠死亡2.

菌种保存的重要条件：__________________。低温、干燥、真空3.

接种方法（1）

厌氧微生物接触氧气会受到抑制、损伤甚至死亡，常采用______接种的方法。（2）

__________是常用的菌种传代和低温下保存菌种的方法。穿刺斜面接种4.

斜面接种和培养酵母菌试管口核心要点·能力素养全提升要点一

无菌技术1.常见的灭菌方法灭菌方法注意事项物品摆放取物特殊注意事项干热灭菌法不能太挤，以免影响热空气或蒸汽流通降至

以下后取出：①防止烫伤；②防止玻璃器皿炸裂灭菌物品不要与干热灭菌箱内壁铁板接触，以防包装纸烤焦起火灭菌方法注意事项物品摆放取物特殊注意事项高压蒸汽灭菌法不能太挤，以免影响热空气或蒸汽流通当压力表显示压力降为零时，并待温度下降后，打开排气阀：防止锅内压力突然下降，灭菌容器内的液体冲出容器，造成污染一定要将锅内冷空气彻底排出后，才能密闭升温升压，否则，可能引起锅内压力达到设定值而温度不能达到要求灼烧灭菌法接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰上灼烧，冷却后使用续表2.消毒与灭菌的比较比较项目消毒灭菌作用强度较为温和强烈的物理或化学方法作用对象操作空间、操作者的双手等接种环、移液管、培养基等作用结果不能杀死所有微生物（如细菌芽孢）能杀死物体内外的所有微生物，包括芽孢和孢子常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法等干热灭菌法、湿热灭菌法等典例1

[2023江苏南通如皋高二月考改编]下列对灭菌和消毒的理解，不正确的是(

)

BA.接种环用灼烧法灭菌B.消毒和灭菌实质上是相同的C.灭菌是指杀灭环境中的一切微生物，包括芽孢和孢子D.常用的灭菌方法有干热灭菌法、过滤法、紫外线法、化学试剂法对点演练1

下列关于无菌技术的描述，错误的是(

)

CA.甲醛、高锰酸钾等，能破坏微生物的蛋白质或细胞结构，具有杀菌作用B.工业生产中制备无菌空气常用过滤除菌法C.紫外线穿透力强，能杀死一定空间中的所有微生物D.对培养基灭菌，常采用湿热灭菌法对点演练2

[2023江苏南通海安高级中学高二调研]下列有关常见无菌操作的叙述，错误的是(

)

DA.用酒精擦拭双手B.用氯气对水源消毒C.实验操作应在酒精灯火焰附近进行D.玻璃器皿（吸管、培养皿）可用酒精擦拭[解析]

玻璃器皿（吸管、培养皿）等应用干热灭菌法灭菌，酒精擦拭属于消毒，不能杀灭所有微生物，D项错误。要点二

斜面接种和培养酵母菌1.斜面接种和培养酵母菌的操作步骤及其目的或分析说明顺序操作步骤目的或分析说明①将接种环的环端和接种时可能进入试管的部分放在酒精灯火焰上，来回灼烧多次将接种环灭菌，避免污染菌种②迅速将试管口通过火焰

次灼烧灭菌，以杀灭试管口上的微生物③将灭过菌的接种环伸入菌种管，先将环部接触培养基斜面顶端或其他无菌体的培养基部位使接种环冷却，避免杀死菌种④轻轻挑取少许菌体，抽出接种环时，带菌部位不要触及管壁或通过火焰防止菌种沾于管壁或防止菌种被杀死顺序操作步骤目的或分析说明⑤在培养基斜面上由底部向上轻轻划“

”型折线，但不要将培养基的表面划破逐步接种。划破培养基不利于后续的继续划线，长出的菌落不标准⑥将试管口与试管塞分别通过火焰

次，迅速塞紧试管防止杂菌污染⑦将接种过菌种的试管，放在恒温箱（温度调至

）中培养

培养酵母菌，观察接种和培养的结果续表2.接种成功的标准若培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求。实验失败，需要分析原因，再次接种。典例2

下列关于对酵母菌的接种的叙述，不正确的是(

)

B

[解析]

灭菌是指采用强烈的物理或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失生长繁殖的能力