药品卫生检验方法总则

药品卫生检验方法总则

药品卫生检验方法总则

1.抽样

1.1供试品一样按批号抽样

1.2抽样时，凡发觉有专门或可疑的样品，应抽选有疑咨询

的样品，但因机械损害明显破裂的包装不得作为样品。

1.3凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出

长蜻、发霉、虫蛀以及变质的药品，可直截了当判为不合格品，无需再抽

样检验。

1.4抽样量一样应为检验用量（2个以上最小包装单位）的

3倍量。

1.5一样采纳随机抽样方法抽样。

2.供试品储存

2.1供试品在检验之前，应储存在阴凉干燥处（勿冷藏或冷

冻），以防供试品中的污染菌因保藏条件所引起致死、损害或繁育。

2.2供试品在检验之前，应保持原包装状态，严禁开启。包

装已开启的样品不得为供试品。

3.检验

3.1供试品检验项目按中华人民共和国卫生部颁布的《药品

卫生标准》确定。

3.2检验的全过程必须符合无菌技术要求。

3.3除另有规定外，供试品制备成供试液后，应在平均状态

取样。

3.4供试品制成供试液后，应在1小时内注皿操作完毕。

4.检验量

4.1所有剂型的检验均需取自2个以上包装单位。

4.2口服固体制剂

中成药丸剂、片剂、冲剂、散剂、胶剂、茶剂、曲剂、胶囊剂等

检验量均为10g。蜜丸除应取自2个以上包装外，还应取自4丸以上。

化学药品、生化药品的粉剂、胶囊剂、片剂、冲剂、滴丸剂等检验量为1

0gO

4.3口服液体制剂：糖浆剂、乳剂、合剂、溶液剂、混悬剂、

酒剂等检验量为10ml。

4.4半固体制剂：膏剂等检验量为10g0

4.5外用液体制剂：滴眼剂、滴鼻剂及其他液体制剂检验量

为10ml。

4.6外用栓剂、软膏剂、眼膏剂等检验量为5g。

4.7膜剂，除另有规定外，中药膜剂检验量取30〜50平

方厘米，化学药及生化药膜剂取10平方厘米，以上均需取自2个以上包

装并4片以上。

4.8专门贵重的或极微量包装的药品，其检验量可酌减。除

另有规定外，口服固体制剂不得低于3g；液体制剂采纳原液者不得少于

6ml、采纳供试液者不得少于3ml；外用药品不得少于5g。

4.9检查活蜻的取样量，见活蜻检验法。

5.供试液的制备

5.1一样供试品的供试液制备方法。

5.1.1固体供试品称取10g,置研钵中，以100m

1稀释剂（生理盐水或磷酸盐缓冲液（0.1mo1/L）分次加入研磨

细匀，并转移至250ml锥形瓶中，使成1：10供试液。或将供试品

和稀释剂同置匀浆仪中，以转速3000〜5000转/分，开机1一2

分钟。对吸水膨胀或粘度大的供试品，可制成1：20供试液。

5.1.2液体供试品量取10ml,加入含90ml稀释

剂的250ml锥形瓶中，混匀成1：10供试液。合剂（含王浆、蜂蜜

者）、滴眼剂等能够原液为供试液。

5.1.3半固体供试品称取10g,加入含100m1稀

释剂的250ml锥形瓶中，混匀成1：10供试液。

5.2专门供试品的供试液制备方法

5.2.1非水溶性基质供试品供试液的制备方法

（1）软膏剂、乳膏剂

吐温西黄蓍胶（或峻甲基纤维素钠）法称取供试品5g,置研

钵或烧杯中，

加吐温一80①8ml,充分研匀。加入西黄蓍胶或竣甲基纤维素钠

②2.5g,充分研匀以92m145（的稀释剂，边加边研磨，使成平

均乳剂，并移至250ml锥形瓶中，即为1：20供试液。注①吐温

—80预先以121。（2高压灭菌20分钟。②西黄蓍胶、竣甲基纤维

素钠预先以140（干热灭菌30分钟。一一原注液体石蜡吐温法称取

供试品5g,分不量取液体石蜡（液体石蜡，预先以16（TC干热灭菌2

小时）20ml,吐温一8020ml,稀释剂60m1o先将供试品

置研钵中，边研磨边加液体石蜡，然后再边研磨边滴加吐温一80,研磨

平均后，再边加稀释剂边研磨，初始每次约1ml,待起团块时，加入量

可增至约3ml,稍停1分钟，再轻轻研磨至乳化，将稀释剂加完为止。

即得1：20供试液。

（2）栓剂称取供试品5g,置250ml锥形瓶（内含玻璃

珠若干粒）中，加适量稀释剂，置45P水浴浸泡10分钟使融，加吐温

—802〜4ml,振摇使之乳化，再加稀释剂（稀释剂和吐温总量为5

0ml）制成1：10供试液。

（3）油剂量取供试品10ml,加入1%吐温一80稀释剂

90m1,混匀，制成1：10供试液。

5.2.2胶囊剂、胶丸及胶剂供试液制备方法

（1）胶囊剂、胶丸剂称取供试品10g置锥形瓶中，加入稀

释剂100m1,于452水浴中振摇至溶，即为1：10供试液。

（2）胶剂取胶剂若干，捣碎，称取10g,再用研钵研细，

转入250ml锥形瓶中，加入稀释剂100ml,置于45。（2水浴中，

振摇使溶，即为1：10供试液。

5.2.3肠溶胶囊（片）剂供试液制备方法

称取供试品10g,置锥形瓶中并放入45C水浴，加入PH

6.8磷酸盐缓冲液（附录二2）100ml,保温、振摇，使肠衣溶解,

混匀，即得1：10供试液。

5.2.4气雾剂供试液制备方法。

将供试品置冰室内2小时后，取出，用灭菌钢锥小心钻孔，便抛

射剂缓慢开释，然后再用灭菌注射器加入适量稀释剂，混匀后吸取相当于

10g或10m1的供试品，再稀释成1：10供试液。

5.2.5膜剂供试液制备方法

中药膜剂除另有规定外，取30—50平方厘米，将药膜剪成

碎片，置锥形瓶中，加稀释剂适量，使每10ml含1平方厘米浓度，浸

泡10〜15分钟，摇匀，即得。化学药膜剂除另有规定外，取10平

方厘米，置锥形瓶中，加稀释剂100ml,浸泡、振荡使溶，即得。必

要时，可置452水浴中助溶。

5.3含抑菌成分供试品的供试液制备方法。

凡含有防腐剂或抑菌成分且阻碍检验（阳性对比操纵菌不生长）

的供试品，可按照供试品的性质，操纵菌的特性及检验条件等按下列方法

之一（或两种以上方法联合应用）及其他适宜方法处理后，作操纵菌检验。

5.3.1离心沉淀法

可溶性供试液取供试液10ml,置入刻度离心管中，以30

00转/分以上离心沉淀30分钟，用毛细吸管吸取上清液弃掉，留下管

底约2ml残余液，将其全部洗入增菌培养基中，作操纵菌检验。混悬供

试液取供试液10ml,置刻度离心管中，先以500转/分离心沉淀

5分钟，取其上层液移入另一离心管中，再经3000转/分以上离心沉

淀30分钟，弃去上清液，保留约2ml残余液，全部洗入增菌培养基中，

作操纵菌检验。

本法适用于一些抑菌作用不强的中、西药品，如蜜丸、水丸、片

剂、散剂、冲剂、胶囊剂及液体制剂。应用本法须严防操作污染，并注意

上层液或上清液和管底残渣的分离，幸免沉渣混入其中。

5.3.2薄膜过滤法

取规定量的供试液，按1m1加生理盐水约10ml的比例，混

匀，置入薄膜过滤器内，减压过滤至干，再以生理盐水或其他适宜溶剂冲

洗滤膜3次，每次50m10取出滤膜，剪成2—4片，使每片相当于供

试品1g或1m1。放入增菌培养基中，作操纵菌检验。

本法适用于水溶性抑菌成分的中、西药品和滴眼剂等的制剂“灭

活”处理。

安放滤膜时，注意滤膜与滤器应密合，防止滤膜破旧、漏液。本

法所用微孔滤膜孔径应为0.45±0.02um。

5.3.3钝化剂中和法

磺胺类药物中和法取规定量供试液，加入含1%对氨基苯甲酸

0.5ml的100m1增菌液中，作增菌培养即得。

本法适用于含磺胺较少的制剂、如三磺软膏、消炎眼药水、斑马

眼药水等。

应用本法可因供试品不同，对氨基苯甲酸的用量，可适当调整。

含重金属药物中和法取规定量供试液，加入硫乙醇酸钠一胱氨

酸增菌液(附录三36)100m1中，作增菌培养即得。

本法适用于含重金属盐类药物的检验，如磺胺啥唳银软膏等。

含洗必泰等制剂中和法取规定量供试液，加入含适量吐温一8

0等表面活性剂的增菌液中，作增菌培养即得。

本法适用于洗必泰含片、洗必泰栓、霉滴栓及其他含抑菌成分的

供试品。

应用本法须注意，由于供试品不同，用量应预试，表面活性剂的

用量应预试，

用量不可过大，否则本身亦产生抑菌作用。

5.3.4沉降法

(1)取规定量供试液，自然沉降5分钟，吸取上层液于增菌液

中，作增菌培养即得。

(2)取规定量供试液，自然沉降5分钟，吸取上层液于含1%

对氨基苯甲酸1ml的增菌液中，作增菌培养即得。

本法适用于水溶性小的抗菌制剂检验，如磺胺类药。（1）法适用

于单一成分固体制剂，如磺胺喀咤片检验；（2）法适用于复方磺胺制剂，

如复方磺胺喀嗅片、复方新诺明片等检验。

应用本法时，供试品应充分研细，并与稀释剂充分摇匀，使污染

菌分散于液相中；沉降时刻不宜超过5分钟，以防菌细胞下沉；取上层液

时，幸免吸入药渣。

5.3.5稀释法

取供试液10ml,加入较大量增菌液中（使该供试品稀释至阳

性对比菌能生长的浓度），作增菌培养即得。

本法适用于抑菌作用不强的中药、化学药品检验。

6.对比试验

6.1阴性对比试验测试检验全过程无菌技术的可靠性。

6.1.1菌数测定阴性对比试验：用吸管从供用的稀释剂中

各吸取1m1于4个无菌平皿中，分不按细菌数、霉菌数测定方法注皿培

养、检查，不得长菌。

6.1.2操纵菌检验阴性对比试验：用吸管从供用的稀释剂

中吸取1ml于增菌液中，按操纵菌检验方法检查，不得长菌。

6.2阳性对比试验检查供试品是否对操纵菌生长产生干扰

作用及检查培养条件是否适宜。

6.2.1阳性对比试验方法同供试品检验，于供试液中加

入一定量的相应对比菌，作平行试验。

6.2.2规定阳性对比菌株：大肠杆菌（CMCC（B）4

4102）、

沙门氏菌（CMCC（B）50094、绿脓杆菌（CMCC（B）

10104）

、金黄色葡萄球菌（CMCC（B）26003）及破伤风杆菌（C

MCC(B)

64067)o

6.2.3对比菌的加入量为50〜100个，可事前预试确

定。需气菌常用计数方法，取37（培养18〜20小时的新奇肉汤培养

物，10倍递增稀释至0.000006,取其0.1ml于一般肉汤琼

脂平板表面涂抹或取0.0000007稀释液1m1以注皿法进行菌数

测定。

6.2.4当供试品未检出供试菌时，而阳性对比试验也未能

检出，不能做出供试品未检出操纵菌的结论。

6.2.5阳性对比试验操作必须与供试品检验操作严格分开,

幸免交叉污染。

7.检验报告单位

7.1细菌数、霉菌数和酵母菌数的测定一样以1g或lm1

为单位的菌落数表示。中药膜剂以10平方厘米、化学药及生化药膜剂以

1平方厘米为单位的菌落数表示。眼科用药的霉菌和酵母菌数以1g或1

m1为单位的菌落数或“未检出”表示。

7.2操纵菌检验报告一样以1g或1ml、中药膜剂以1

0平方厘米、

化学及生化药膜剂以1平方厘米为单位报告“检出”或“未检出”。

8.复试

8.1菌数测定不合格者应复试。操纵菌检验以1次检出为准,

不再复试，

但应保留检出菌株1个月备查。

8.2复试项目以不合格项目为准，作单项复试。

8.3复试需另取同批号样品，测定2次。

8.4复试报告以3次测定结果的算术平均值报告。

8.5眼科用药的霉菌和酵母菌数复试报告，须以二次复试结

果均不得长菌，方可判定合格。

9.专门抽样

不符合部颁药品卫生标准规定的药品，经卫生行政部门审批准予

在不阻碍外观与质量的前提下，充许采取适宜措施进行处理，处理后的药

品抽样按本款进行。

9.1抽样方法

大包装抽样，按出厂的大包装，10件以下抽1件，10件以上

每增加20件加抽1件，最后不足10件者不加抽，超过10件加抽1件。

小包装抽样，按规定手续，从大包装中随机抽取小包装2个以上单位为供

成品。

9.2检验项目：按部颁《药品卫生标准》规定检验，不得单项

检验。

9.3检验报告

9.3.1测定菌数报告：以各次测定结果全部平均值报告。

9.3.2操纵菌按全部复试检验结果报告①，如全部复试均未

检出操纵菌时，报告为：“按规定抽样检验结果未检出XX菌"；①如全部

抽样中任一样品检出操纵菌时，报告为：“按规定抽样检验，检出XX菌,

不符合药品卫生标准规定注①报告中写出具体的操纵菌名称。

细菌数测定

细菌数是指规定单位的非规定灭菌药品制剂中污染活细菌的数

量。是判定药品受到细菌污染程度的标志。其内含是多义的。细菌数愈多,

表明药品受到致病微生物污染的可能性以及药品制剂的变质可能性也愈

大，安全性也就越差。同时细菌数测定也是对生产单位的药品原辅料、器

具设备、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生学评判的综合

依据之一。

细菌数测定采纳平板菌落计数法，是一种活菌计数法。测定结果

只反映出在规定条件下生长的细菌数，不可能包括在本法条件下不生长的

细菌，因而测定数只可能低于实际的污染数。此外，测定中1个细菌可能

繁育成1个菌落，而一群也可能只形成1个菌落，以及污染的不平均性等

等缘故，极易造成测定差异。故在测定细菌数时，必须严格按本法所规定

条件操作。

1.培养基、试剂

1.1肉汤琼脂（或0.001%TTC肉汤琼脂）（附录三2,

4）

1.2PH7.2磷酸盐缓冲液（0.Imol/L）或生理

盐水（附录二）

2.检验程序

制备稀释

-稀释---------------

I供试品I----------I1:10I------------I1:10

0I---------->I1：1000I

---------I供试液II供试液

II供试液I

?---------------------

llmlI1m

1I1m1

I平皿II平皿

I|平皿|

I2〜3个II2〜3

个II2〜3个I

I注皿

I干

I培养

30〜35℃148

±2小时

I菌落计

数I

I报告

3.操作步骤

3.1供试液制备，经阴性对比取样后，按各类制剂制备供试

液的方法（总

则5）制备。

3.2稀释及吸样

稀释级一样应采纳3级。

稀释取1ml吸管1支，吸取混匀的1：10供试液（或原液、

1：20供试液）1ml,在离稀释剂液面上约1cm处，沿管壁注入装

有9ml的稀释剂的试管中，混匀成1：100（或1：10、1：20

0）的稀释液。

吸样用上述吸管分不取1：10供试液（或原液、1：20供

试液）1ml,注入2〜3个平皿中。

以另一支1ml吸管，按上述操作，作下一级的稀释与吸样。

操作时，应专门注意每次吸液前必须使稀释液充分混匀（吸管反

复吹吸数次或充分震荡），以使菌体充分平均分散，降低测定误差。

3.3倾注琼脂（注皿）与干燥

3.3.1事先将肉汤琼脂融解、置45C水浴中，备用

3.3.2当供试液及各级稀释液均注入平皿后，以上述琼脂

倾注入平皿，

每皿约15ml,赶忙转动平皿，使样液与琼脂混匀后置水平台上待

凝。

3.3.3干燥琼脂凝固后，在净化条件下开盖倒置或换灭

菌的陶瓦盖，

使平板干燥，减少平板表面的水分，防止菌落蔓延生长。干燥时刻一

样在3小时左右，干燥时刻计入培养时限。

3.4将上述平板倒置于30〜35匕培养箱中，培养48±

2小时。

4.菌落计数

4.1细菌菌落是1个菌细胞或菌细胞团在局限位置上，经一

定条件繁育成肉眼可见的细菌群体。由于细菌种类繁多，形成菌落大小、

形状、色泽、透亮度等皆因种而异，差不甚大。计数时一样用透射光于平

板背面或正面认真观看。不要漏计琼脂层内和平板边缘生长的菌落。并须

注意细菌菌落与药渣或培养基的沉淀物，酵母菌及霉菌菌落的区不。必要

时，用显微镜鉴不。

4.2用肉眼直截了当计数、标记或在菌落计数器上点计，然

后用5〜10倍放大镜检查，有否遗漏。

4.3若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可辨论时仍以

2个或2个以上菌落计数。

4.4平板上有片状菌落或花斑样菌落蔓延生长以及平板受到

污染的情形，该平板计数无效。

4.5运算各稀释级平均平板菌落数。

4.5.1当用一稀释级使用2个平板时，应采纳2个平板菌

落数的均值为平均平板菌落数。若2个平板菌落数相差在1倍以上时，该

稀释级不宜采纳，但不包括2个平板菌落数均在15个以下的情形①。

注①15以下两平板菌落数承诺幅度0〜4、1〜7、2〜9、

3〜10、

4〜12、5〜14、6〜15、7〜17、8〜18、9〜19、

10〜20o

4.5.2当同一稀释级使用3个平板时，应采纳3个平板菌

落数的均值为平均菌落数。若其中1个平板菌落数与其他2个相近的平板

菌落数的均值相差1倍以上时，该平板菌落数不能参与平均，但不包括平

板菌落数均在10个以下的情形②。注②10以下3平板最大与最小菌

落数的承诺幅度，0〜3、1〜5、2〜7、3〜9、4〜10、5〜1

2、6〜13、7〜14。

5.菌数报告规则

一样宜选取平均平板菌落数在30~300间的稀释级，作为菌

数运算的依据。

5.1若有1个稀释级的平均平板菌落数处在30〜300时,

将该稀释级的平均平板菌落数乘以稀释倍数，为报告菌数。

5.2若有2个稀释级的平均平板菌落数处在30〜300时,

先运算两稀释级菌落数的比值。

高稀释级的平均平板菌落数X稀释倍数

比值=-------------------------------------

低稀释级的平均平板菌落数X稀释倍数

5.2.1当比值W2时，以两级的菌落数均值为报告菌数。

5.2.2当比值＞2时，以低稀释级平均平板菌落数乘以稀

释倍数为报告菌数。

5.3若有3个稀释级的平均平板菌落数均处在30〜300

时，采纳后2个稀释级运算级间比值。

5.3.1当比值W2时，以两级的菌落数的均值为报告菌数。

5.3.2当比值＞2时，以低稀释级平均平板菌落数乘以稀

释倍数为报告菌数。

5.4若各稀释级平均平板菌落数均在300以上，按最高的

稀释级的平均平板菌落数乘以稀释倍数为报告菌数，或适当增加稀释级，

重作测定后报告结果。

5.5若各稀释级的平均平板菌落数均不在30〜300间，

其中一稀释级的平均平板菌落数大于300,相邻稀释级的平均平板菌落

数又小于30时，以最接近30或300的稀释级平均平板菌落数乘以稀

释倍数为报告菌数。

5.6若各稀释级平均平板菌落数均小于30时，按最低稀释

级的平均平板菌落数乘以稀释倍数为报告菌数。但若应用原液为供试液，

当1：10稀释级与原液的平均平板菌落数相等或大于时，应以培养基稀

释法测定，按测定结果报告菌数。

培养基稀释法：

吸取供试液（原液或1：10供试液）1ml,注入5个平皿内

（每皿0.2

m1,总量为1ml）。共作3份，共15个平皿。每皿倾注融解并冷

至451左右的一般肉汤琼脂约15m1,旋转混合，冷凝后按规定培养

温度与时限培养、计数。

将每m1注入5个平板的菌落计数结果合并为每m1菌落数，共

得3组数据。取3组数据平均值乘稀释倍数，为报告菌数。

5.7若各稀释级的平均平板菌落数均无菌落生长或测定数在

10个以下时，报告菌数为V10个。

表1细菌数报告规则举例

III供试品稀释倍数I级

间II报告数I

I规则I原液I--------------------------------------------1

I菌落数II

III-11—2I一3|比

值II书写I

III10I10I10I

I5.1I-

I16400I16X10或160001

IIIIII

1131

15.2.11-127601295146I1.6I

37750I38X10或380001

3

15.2.21-128901271160I2.2

27100127X10或270001

111111

111111

131

15.3.11-1239120213511.7

27600128X10或280001

111111

111111

131

15.3.21-1236|19614212.1

19600120X10或200001

111111

111111

141

15.41—1不可计|4650|5131-—

5131000151X10或5100001

111111

111111

131

15.51-1不可计13051121-—

30:500130X10或300001

15.61-124I19I121-—

2，40124X10或240I

15.6|22.3|27I7I—1—

270127X10或270I

15.71-10.6I0I01—

61<101

6.报告数书写

6.1菌落数在100个以内时，按实测数书写报告。

6.2菌落数大于100时，取二位有效数字，第三位数按有

效数字处理规则处理，为简便计，也可用10的指数报告。

霉菌和酵母菌数测定

霉菌和酵母菌数是指规定单位非规定灭菌药品制剂中污染的霉菌

和酵母菌的活菌数量。

霉菌和酵母菌广泛分布于自然界，土壤、空气及水中都有它们的

菌体及抱子存在。因而在药品生产、贮藏等各个环节均可污染药品，以致

引起药品变质，危害人体健康。有些霉菌毒素也是重要的致癌物质。

霉菌和酵母菌数是判定药品受到污染程度的标志之一，也是对药

品原料、生产工艺、生产环境以及操作人员卫生状况进行卫生学评判的综

合依据之一。

霉菌和酵母菌种属繁多，采纳一种培养基和培养条件，不可能适

合所有霉菌和酵母菌的生长繁育。故本法测定结果只能是在一定条件下平

板生长的霉菌和酵母菌菌落数。本法规定，一样制剂用虎红琼脂作霉菌数

测定（液体制剂包括酵母菌数）。但含蜂蜜或王浆的合剂另以酵母膏，蛋白

陈、葡萄糖（YPD）琼脂作酵母菌数测定，而霉菌数测定仍用虎红琼脂。

1.培养基、试剂

1.1PH7.2磷酸盐缓冲液（0.lmol/L）（附录二

2）

1.2生理盐水（附录二2）

1.3YPD琼脂培养基（附录三6）

1.4虎红琼脂培养基（附录三5）

2.检验程序

I供试品I---->11:10供试液I---->I1：100供试

液I-->I1：1000供试液I

----------------?------------------------------------

I合剂（含蜂蜜或

I王浆者）

I

I滴眼剂

I平皿2〜3个II平皿2〜3个II平皿2〜3个

I平皿2〜3个I

I虎红琼脂，YPD琼脂I

I（含蜂蜜或王浆的合剂用）注皿I

I培养I

25〜28(172±2小时

I菌落计数

I报告I

3.操作步骤

3.1供试液的制备（总则5）与稀释，按细菌数测定项下的

方法进行。稀释级一样采纳3级。合剂（含蜂蜜或王浆者）和滴眼剂可用

原液作第1级供试液，分不在作10倍递增稀释的同时，即可取该稀释级

的吸管吸取1m1稀释液于灭菌平皿内，每个稀释级2〜3个平皿。

3.2各稀释液注入平皿后，应及时将融解并冷至45P左右

的虎红琼脂培养基（如供试品为含蜂蜜或王浆的合剂，加用YPD琼脂培

养基测定酵母菌数）约15ml倾注平皿内，摇匀待凝。

3.3凝固后，置25〜28C培养箱内，一样培养72±2

小时，如有可疑，可标记后适当延长培养时刻。

4.菌落计数方法

4.1菌落形状

4.1.1霉菌菌落形状：具有放射状或树状分枝的菌丝是霉

菌菌落的特点。初形成时，多无色透亮，有明显的折光性，在较暗的背景

下，以透射光观看，易于识不。少数生长在琼脂表面的菌落，初起时，似

为1小块水迹，需借助暗反射光才能看清。成熟的霉菌菌落多数有各种颜

色的袍子形成，随种而异，极易判定。

4.1.2酵母菌菌落形状：在虎红琼脂平板上，多数为圆形

凸起，边缘整齐，表面光滑潮湿，呈不透亮乳脂状，乳白色或粉红色。少

数表面粗糙或皱褶，有的菌落周边呈细分枝状。位于琼脂内的菌落，可呈

铁饼形、三角形及多角形。菌落外观与细菌菌落不易区不时，应挑取菌落,

用水制片，置高倍显微镜下观看，其细胞个体比细菌大数倍，多为圆形或

卵圆形，绝大多数为出芽繁育。当平板内酵母菌菌落甚多时，常有酒香气。

在YPD琼脂平板上的菌落与虎红平板上的形状相似，但稍大，

多数为乳白色。

4.2菌落计数：一样在平板背面用肉眼直截了当点数，必要

时用放大镜检查，

以防遗漏。若有根霉或毛霉蔓延生长时，为幸免阻碍其它霉菌和酵母

菌计数，应及时将平板取出计数或从平板背面观看霉菌生长中心点或霉菌

蔓延生长区域来计数。固体制剂仅计数霉菌菌落；液体制剂应计数霉菌菌

落和酵母菌菌落的总数；含王浆或蜂蜜的合剂则应将虎红平板上的霉菌数

加上YPD平板上的酵母菌数为霉菌和酵母菌总数，运算各稀释级的平均

平板菌落数。

5.菌数报告规则

5.1选择菌落数在30〜100之间的稀释级平板计数，以

该稀释级的平均平板菌落数乘稀释倍数作为报告菌数。

5.2若邻近的2个稀释级平均平板菌落数均在30〜100

之间，运算级间比值。当比值W2时，以两级菌落数的平均值为报告菌数;

比值＞2时，按低稀释级平均菌落数乘稀释倍数为报告菌数。

5.3各稀释级平均菌落数均不足30时，以最低稀释级平均

菌落数乘稀释倍数为报告菌数。

6.菌数报告的书写

6.1固体制剂报告霉菌数；液体制剂及半固体制剂报告霉菌

和酵母菌的总数。

6.2菌数报告的书写参照细菌数测定。

6.3眼科用药各稀释级（含原液）均未生长菌落时，报告“未

检出二

大肠杆菌检验法

大肠杆菌为肠杆菌科埃希氏菌属细菌，是人和温血动物肠道内的

常住菌，随粪便排出体外，可直截了当或间接污染药品及药品生产的各个

环节。药品中检出大肠杆菌表明该样品已受到粪便污染，服用后有可能被

粪便中存在的肠道致病菌或寄生虫卵等病原体感染。因此，大肠杆菌被列

为粪便污染指示菌，是非规定灭菌口服药品的常规必检项目。

1.培养基、试剂

1.1一般肉汤培养基（附录三1）

1.2胆盐乳糖（BL）增菌液（附录三7）

1.3乳糖发酵管（附录三13）或5%乳糖发酵管（附录三

14）

1.4蛋白陈水培养基（附录三10）

1.5磷酸盐葡萄糖蛋白陈水培养基（附录三11）

1.6西蒙氏柠檬酸盐培养基（附录三12）

1.7伊红美蓝（EMB）琼脂（附录三8）

1.8麦康凯琼脂（附录三9）

1.9柯凡克试剂（附录二4）

1.10甲基红指示剂（附录二4）

1.11V-P试剂（附录二4）

1.12革兰氏染色液（附录二1）

2.检验程序

I供试品I

I供试液I

BL增菌液

36±1(I18〜24小时

IEMB或麦康凯琼脂I

36±1℃；18〜24小时

疑似菌落生长无菌落

生长

I一般肉汤琼脂斜面II报

告I

36±1℃I18〜24小时

I革镜II乳II靛I甲I

V|柠|

I兰IIIII

III檬I

I氏IIII基I基I

PI酸I

I染IIIIII

试I盐I

I色检II糖II质I红I

验II

36±1℃24〜48小

时I

I报告I

3.操作步骤

3.1增菌培养取供试液（总则5）10m1,加入备妥的

100m1BL增菌液内，置36±1（培养18〜24小时。增菌液出

现混浊。液面可见或未见气泡都表明有菌生长，如未见明显混浊，可延长

增菌培养时刻至48小时。

3.2分离培养将上述增菌培养液轻微摇动，以接种环沾取

1〜2环划线接种于EMB或麦康凯琼脂平板上。置36±1P培养1

8〜24小时（必要时延长培养时刻），观看菌落生长情形，大肠杆菌在E

MB琼脂平板上的典型菌落呈深紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边

缘整齐，表面光滑，常有金属光泽；在麦康凯琼脂平板上的典型菌落呈桃

红色或中心桃红、圆形，扁平，光滑潮湿。由于药物阻碍或非典型菌的存

在，大肠杆菌可显现非典型形状；在EMB琼脂平板上出现浅紫、粉紫、

粉色，无明显暗色中心；在麦康凯琼脂平板上出现微红色或粉色，菌落形

状、质地也有改变。以上形状均应作为疑似菌落进行鉴定，切勿遗漏。

分离平板上无菌落或无疑似菌落生长，可作出未检出报告。

以接种针轻轻接触单个疑似菌落的中心，沾取培养物，每次应挑

取2个或更多个疑似菌落，接种于一般肉汤琼脂斜面或三糖铁琼脂斜面上。

置36±1匕培养18〜24小时，供革兰氏染色镜检及生化试验用。

在上述检验过程中若发觉疑似的其它规定操纵菌时，亦应连续鉴

定。

3.3革兰氏染色镜检将上述一般肉汤琼脂斜面培养物涂片,

作革兰氏染色镜检。大肠杆菌为革兰氏阴性无芽泡短杆菌。由于菌龄等缘

故，菌体长短可有变化。

3.4生化反应

3.4.1将上述斜面培养物接种于乳糖发酵管，置36±1匕

培养24〜

48小时，观看结果。大肠杆菌应发酵乳糖并产酸产气，或产酸不产

气。产酸者，

以酸性复红为指示剂的培养基显红色；以澳麝香草酚蓝为指示剂的培

养基显黄色。产气者，倒管内有气泡。

为幸免迟缓发酵乳糖造成假阴性，可选用5%乳糖发酵管。绝大

多数迟缓发酵乳糖的细菌可于24小时内显现阳性反应。

3.4.2IMViC试验

靛基质试验将斜面培养物接种于蛋白陈水培养基中，置36土

1。（2培养48±2小时。沿管壁加入柯凡克试剂0.3~0.5ml,轻

微摇动，观看液面颜色。阳性反应为玫瑰红色；阴性反应为试剂本色。

甲基红试验将斜面培养物接种于磷酸盐葡萄糖蛋白陈水培养基

中，置36±1P培养48±2小时。于每m1培养液中加入甲基红指示

剂1滴，赶忙观看结果，阳性反应培养液为鲜红色或桔红色；阴性反应呈

黄色。

V—P试验将斜面培养物接种于磷酸盐葡萄糖蛋白陈水培养基

中，置36±1匕培养48±2小时。于每2m1培养液中加入V-P试

剂甲液（6%a一蔡酚酒精溶液）1ml,混匀，再加V-P试剂乙液（4

0%KOH）0.4ml,充分振摇，观看结果。阳性反应赶忙或数分钟

后显现红色。加试剂后4小时无红色反应时为阴性，如显现红色亦应判为

阳性。

柠檬酸盐利用试验将斜面培养物接种于西蒙氏柠檬酸盐斜面，

置36±1（培养48±2小时，观看结果。斜面有菌苔生长，培养基由

绿色变为蓝色时为阳性反应；斜面无菌苔生长，培养基颜色无改变为阴性

反应。若斜面有微量菌苔生长或颜色改变等可疑现象时，应将待检菌株重

新分离、纯化后，再行试验。

大肠杆菌JMViC反应模式应为+H或—Io对显现

可疑反应的培养物，应将所分离的待检菌株于EMB或麦康凯琼脂平板上

重新划线分离后，再作生化试验证实。

表2大肠杆菌同有关细菌的IMViC鉴不及应用

1靛基质甲基红VP1柠檬酸盐1

111

1典型大肠杆菌++

1非典型大肠杆菌—+

111

1典型中间型+++1

1非典型中间型—++1

111

1典型产气肠杆菌—一+1+1

1非典型产气肠杆菌+—+1+1

4.结果报告完全符合以下结果时，判定为检出大肠杆菌

(1)染色镜检是革兰氏阴性无芽抱杆菌；

(2)乳糖发酵产酸产气，或产酸不产气；

(3)IMViC试验反应为+H-------或—I--------o

沙门氏菌检验法

沙门氏菌为肠杆菌科沙门氏菌属细菌，广泛分布于自然界，是人

畜共患的肠道病原菌，常引起伤寒、肠炎、肠热症和食物中毒，危害人类

健康。沙门氏菌可通过人类、畜、禽的粪便或带菌者直截了当或间接污染

药品，生产环境及生产的各个环节，专门是以动物、脏器为原料的药品污

染机率较高。受到污染的药品，不仅直截了当阻碍服用者的安全，并可造

成沙门氏菌的传播和流行。故对某些药品必须检查沙门氏菌。

药品中污染的沙门氏菌常在生产过程中受到损害而处于濒死状

态，故检验时须先在无选择性的增菌液中使其复苏，然后再进行选择性增

菌。

1.培养基、试剂

1.1一般肉汤培养基（附录三1）

1.2四硫磺酸盐增菌液（附录三15）

1.3胆盐硫乳（DHL）琼脂（附录三17）

1.4沙门氏菌属志贺氏菌属（S.S）琼脂（附录三18）

1.5EMB琼脂（附录三8）

1.6麦康凯琼脂（附录三9）

1.7三糖铁（TSI）琼脂（附录三16）

1.8蛋白陈水培养基（附录三10）

1.9尿素琼脂培养基（附录三19）

1.10氟化钾培养基（附录三20）

1.11赖氨酸脱竣酶培养基（附录三21）

1.12糖发酵培养基（附录三13）

1.13半固体肉汤琼脂（附录三3）

1.14沙门氏菌属A—F“0”多价血清

1.15革兰氏染色液（附录二1）

1.16柯凡克试剂（附录二4）

2.检验程序（见下页）

3.操作步骤

3.1增菌培养取供试液（总则5）10ml,加入备妥的

100ml一般肉汤内，混匀。置36±1。（2培养18〜24小时。轻微

摇动培养液，取1m1加入含10m1四硫磺酸盐增菌液的试管内，再置

36±1℃培养24±2小时。

如有菌生长，增菌培养液变混。

I供试品I

I供试液I

营养肉汤

36±1℃I18〜24小时

I四硫磺酸盐增菌液

36±1℃I24±2小时

IDHL琼脂平板EMB琼脂平板I

I（或SS琼脂平板）（或麦康凯琼脂平板）I

36±1℃I24±2小时

ITSI琼脂斜面I

36±1℃I24±2小时

革半

4固

氏I体IMII尿II赖I

I氟II血I

染I肉IIIIIMI

I清I

色I汤I基II素II酸I

I化II学I

镜I琼IIIII脱I

I试I

检I脂I质II酶II羚I

I钾II验I

IIIIIBI

I报告I

3.2分离培养轻微摇动增菌培养液，以接种环沾取1〜2

环接种于DHL（或S.S）琼脂平极及EMB（或麦康凯）琼脂平板各

1个。于36±1七培养24±2小时，检查平板上有无疑似沙门氏菌落。

沙门氏菌在上述平板上典型菌落形状见表3。

表3沙门氏菌在选择性平板上的菌落特点

I培养基I菌落特征

IDHL琼脂I无色至浅橙色，半透亮，多数菌株菌落中心带黑

色或几乎I

II全黑色

ISS琼脂I无色至浅橙色，半透亮或不透亮，有的菌株菌落

中心带黑I

II色

IEMB琼脂I无色至浅橙色，透亮或半透亮，光滑潮湿

I麦康凯琼脂I无色至浅橙色，透亮或半透亮，有时中心暗色

由于药物的阻碍或非典型菌株的存在，沙门氏菌菌落可出现非典

型形状，如色

泽变深，菌落粗糙等，应注意选择。

3.3初步选择试验以接种针轻轻接触菌落的中心部位，沾

取选择性平板

的疑似菌落2个或更多个，划线接种于TSI琼脂斜面并穿剌底层。

置36±1P

培养24±2小时观看结果。沙门氏菌在TSI琼脂斜面的反应为：

斜面呈碱性（

红色），底层呈酸性（黄色），硫化氢阳性（底层黑色）或阴性（无黑

色）。

沙门氏菌及有关细菌在TSI琼脂上的反应见表4。

表4沙门氏菌及其它细菌在TSI琼脂的反应结果

I序号I斜面I底层I产气I硫化氢I可能

的菌属