金葡素注射液制造及检定规程

金葡素注射液制造及检定规程

RequirementsforStaphylococcalEnterotoxinCInjection

本品系用金黄色葡萄球菌经培养除菌过滤制成的淡黄色或无色澄明液体。1基本要求

1.1设施与生产质量管理

按中国《药品生产质量管理规范》要求实施。

1.2原料及辅料

应符合现行《中国药典》或《中国生物制品主要原辅材料质控标准》的要求，未纳入上述标准的化学试剂，应不低于化学纯。

1.3生产用水

生产用水源水应符合国家饮用水标准；纯化水及注射用水应符合现行《中国药典》标准。

1.4生产用器具

直接用于生产的金属或玻璃等器具，应经过严格清洗、去热原质处理及灭菌处理。2制造

2.1菌种

2.1.1菌种名称及来源

金黄色葡萄球菌生产用菌株需经国家药品监督管理部门批准，并由国家药品检定机构或国家指定的单位保管和分发。

2.1.2种子批的建立

生产用菌种应采用种子批系统，原始种子批应验明其记录、历史来源和生物学特性。从原始种子批传代、扩增后经冻干保存为主种子批；从主种子批传代、扩增后冻干保存为工作种子批。主种子批和工作种子批的各种特性应与原始种子批一致。工作种子批用于生产。

2.1.3种子批的检定

主种子批和工作种子批应进行下列检定。

2.1.3.1形态特征

革兰氏阳性球菌，直径0.5～1.0μm，成葡萄串状排列。

2.1.3.2培养特性

在血琼脂或其它适宜培养基的平板培养基上，35℃培养18～36小时，长成直径1.0～2.0mm圆形隆起，表面光滑湿润，边缘整齐的金黄色菌落，菌落周围有大而透明的溶血环；肉汤培养物呈混浊生长，底部有沉淀。

2.1.3.3生化反应

在糖类发酵培养基中生长18～24小时后，发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖，产酸不产气，不发酵阿拉伯糖和木糖，能产生血浆凝固酶。

2.1.3.4血清学凝集试验

用抗血清作定量凝集试验，其凝集效价应不低于血清原效价之半。

2.1.3.5毒力试验

肉汤培养物用生理氯化钠溶液稀释成5个不同浓度稀释液，每个浓度用体重18～20g小鼠5只，每只腹腔注射1.0ml，观察3天，记录小鼠死亡情况，计算LD50，1个LD50的菌数应小于1.5×109。

2.1.3.6抗原性试验

选体重2.0～2.5Kg健康家兔3只，先腹腔注射3次，然后静脉注射3次，每次注射剂量分别为含菌1.0×1010/ml不含防腐剂的死菌悬液（可用0.6%福尔马林37℃作用7天杀菌兼脱毒；或加热杀菌）1、2、4、6、8、10ml，每次间隔3天，末次注射后12天采血做定量凝集试验，2/3家兔血清之凝集效价应达1∶800（+）。2.2原液制备

2.2.1生产用种子

工作种子批菌种启开后，转种肉汤，35℃培养18～36小时，经菌形、纯度检查合格后，作为生产用种子液。

2.2.2培养基

采用经国家药品监督管理部门批准的培养基。

2.2.3培养

用18～36小时生长良好的种子液，接种于生产用培养基中，35℃培养20～24小时。

2.2.4纯菌检查

取生长对数期后期每瓶或罐培养物，涂片革兰氏染色镜检；接种血琼脂平板，35℃18～24小时培养。有杂菌生长者废弃。

2.2.5培养液合并

经纯菌检查合格的培养液进行合并。

2.2.6除菌过滤

合并的培养液最后用0.22μm滤膜除菌过滤。此滤液即为原液。

2.2.7原液检定

按3.1项进行。

2.2.8原液的保存及有效期

原液置2～8℃保存，保存期为3个月，超过3个月应重新进行无菌检查。2.3半成品配制

2.3.1配制

用氯化钠调至等渗浓度，调pH值至6.0～7.5，肠毒素C含量为5～20ng/ml。

2.3.2半成品检定

按3.2项进行。2.4成品制备

2.4.1分批

按本版规程通则《生物制品分批规程》进行。

2.4.2分装

按本版规程通则《生物制品分装规程》进行。

2.4.3规格

每支装量为2ml，肠毒素C含量应为5～20ng/ml。

2.4.4包装

按本版规程通则《生物制品包装规程》进行。3检定

3.1原液检定

3.1.1肠毒素C含量测定

按附录1法测定。含量应不低于5ng/ml。

3.1.2总蛋白含量

按本版规程附录蛋白含量Lowry法测定，含量应不低于800μg/ml。

3.1.3无菌试验

按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，应符合规定。3.2半成品检定

3.2.1渗透压比值

与0.9%生理氯化钠溶液的渗透压比值应为1.00±0.05。

3.2.2无菌试验

按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，应符合规定。

3.2.3pH值

应为6.0～7.5。3.3成品检定

3.3.1鉴别试验

按附录1法进行，结果应呈阳性，即供试品孔与对照孔的吸光度值比应不低于2。

3.3.2外观

本品为淡黄色或无色液体，无沉淀、无异物。

3.3.3pH值

应为6.0～7.5。

3.3.4渗透压比值

同3.2.1项。

3.3.5肠毒素C含量测定

按附录1法测定。含量应为5～20ng/ml。

3.3.6T淋巴细胞增殖试验

按附录2法进行。增殖指数应不低于1.5。

3.3.7无菌试验

按本版规程通则《生物制品无菌试验规程》A项进行，应符合规定。

3.3.8异常毒性试验

按本版规程通则《生物制品异常毒性试验规程》进行，应符合规定。

3.3.9热原质试验

按本版规程通则《生物制品热原质试验规程进行》，注射剂量按家兔体重每1kg注射1.0ml，应符合规定。

3.3.10过敏试验

取体重250～350g豚鼠6只，连续3次隔日腹腔注射本品0.5ml，分别于第一次注射后第14天及第21天静脉注射本品1.0ml，每次3只，