《生物产品分析与检验技术》课件-葡萄糖酸含量的测定

葡萄糖酸含量的测定葡萄糖酸简介葡萄糖酸是一种有机化合物，是由葡萄糖的醛基经氧化生成。天然葡萄糖酸存在于水果、蜂蜜和葡萄酒中。在食品生产中，葡萄糖酸主要用作蛋白凝固剂、食品防腐剂和酸度调节剂。在医药生产中，可用于生产葡萄糖酸盐。葡萄糖酸测定方法葡萄糖酸的测定方法主要有异羟肟酸比色法、高碘酸氧化法、酶法和高效液相色谱法。发酵液中葡萄糖酸含量测定---异羟肟酸比色法测定原理

葡萄糖酸在酸性条件下发生内酯化，形成的内酯与羟胺碱反应，生成异羟肟酸。异羟肟酸遇FeCl3能生成异羟肟酸-Fe3+有色络合物，可以通过分光光度比色法定量分析葡萄糖酸的含量。仪器与器具

仪器设备

可见分光光度计电子天平可调式电炉

玻璃器皿比色管10mL容量瓶100ml移液管、移液枪试剂与溶液配制0.10mol/L的葡萄糖酸钠标准储备液和4mol/L的HCl溶液，低温保存。在测定时分别取不同体积的葡萄糖酸钠标准储备液，配制成浓度分别为1、2、4、8mmol/L的葡萄糖酸钠标准工作液，用4mol/L的HCl溶液调节pH值=1.5；备用。试剂与溶液盐酸羟胺与NaOH混合试剂：

配制4mol/L盐酸羟胺溶液和4mol/L的NaOH溶液，低温保存。

使用时，将等体积的盐酸羟胺和NaOH混合，混合后pH值为8.0。

配制的溶液应在4h内使用。FeCl3混合试剂：

事先配制好0.37mol/L的FeCl3溶液和0.1mol/L的HCl溶液。

使用时等体积混合。葡萄糖酸钠标准曲线的绘制

标准曲线系列浓度溶液的制备首先准备好5支、10ml具塞比色管，用记号笔标记为0、1、2、3、4；用移液枪分别移取浓度为1、2、4、8mmol/L的葡萄糖酸钠标准工作溶液1ml，依次加入编号为“1、2、3、4”的具塞比色管中；同时移取1ml去离子水，加入“0”号空白比色管中，用4mol/L盐酸溶液调节pH=1.5；加热30min，冷却，依次加入2ml羟胺碱、1ml4mol/L的盐酸溶液和1mLFeCl3试剂，显色。葡萄糖酸钠标准曲线的绘制按下表在各管中加样，制备葡萄糖酸钠标准曲线系列浓度溶液比色管编号01234标样浓度（mmol/L）0.01.02.04.08.0标准溶液体积/mL01.01.01.01.0去离子水/mL1.00000盐酸羟胺和NaOH混合液/mL2.02.02.02.02.0FeCl3和HCl的混合溶液/mL1.01.01.01.01.0葡萄糖酸钠标准曲线的绘制吸光度测定以空白管对照，在500nm波长下，测定溶液吸光度值；以葡萄糖酸钠标准溶液浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，进行标准曲线的绘制。注意：测定工作在10min内完成。要求提前打开分光光度计，调节到正常测定工作状态，确保溶液吸光度值测定工作在10min内完成。试样中葡萄糖酸含量的测定步骤测定前将待测样品稀释一定倍数，制成样品稀释液。用移液枪分别移取1mL待测样品稀释液，用4mol/L的盐酸溶液调节pH=1.5，其余处理步骤同上；以空白做对照，完成样品溶液吸光度测定。从标准曲线图上查出样品溶液葡萄糖酸的含量，并及时填写检测结果原始记录单；结果记录与计算式中：C---样品溶液中葡萄糖酸的含量，mmol/L；C1---从标准曲线上查出的葡萄糖酸的含量，mmol/LF---样品溶液的稀释倍数。计算公式：课程小结