真菌及四体（病原生物学课件）

螺旋体、支原体

衣原体、立克次体一、螺旋体

螺旋体是一类细长、柔软、螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。分类螺旋体所致疾病钩端螺旋体属钩端螺旋体钩端螺旋体病密螺旋体属梅毒螺旋体梅毒疏螺旋体属伯氏疏螺旋体回归热疏螺旋体莱姆病流行性回归热致病性螺旋体的分类A：Fontana镀银染色法；B：暗视野显微镜一、钩端螺旋体(一)生物学性状G-，不易着染。Fontana镀银染色法→染成棕褐色。菌体呈C、S型，一端或两端呈钩状，运动活泼。营养要求复杂，常用Korthof培养基。抵抗力弱，60℃1min死亡,对青霉素敏感。（二）临床意义1.致病物质：内毒素样物质与外毒素2.传播途径：经粘膜或破损皮肤进入；经胎盘垂直传播3.所致疾病钩端螺旋体病（钩体病）临床表现：“三症状”：高热、乏力、全身酸痛。“三体征”：眼结膜充血、腓肠肌压痛、浅表淋巴结肿大触痛。（三）微生物学检验1.标本采集发病10天内取血液，1周后取尿液，有脑膜刺激者取脑脊液。2.直接镜检标本离心后用暗视野显微镜检查，或经Fontana镀银染色用普通光学显微镜检查，亦可用直接免疫荧光法检查。3.分离培养

标本接种Korthof培养基。4.血清学检查取发病初期和发病第3～4周双份血清，检测抗体效价变化。（四）防治原则1.预防积极防鼠、灭鼠，加强对带菌家畜管理。接种灭活多价钩体疫苗，加强特异性预防。2.治疗治疗首选青霉素，其次为庆大霉素、强力霉素等。二、梅毒螺旋体（一）生物学特性Fontana镀银染色法→染成棕褐色，8～14个致密而规则的小螺旋，运动活泼。G-，不易着色。至今尚不能用人工培养。抵抗力弱，对温度和干燥特别敏感。A：Fontana镀银染色法；B：暗视野显微镜（二）致病性引起梅毒，人是梅毒唯一传染源。1.先天性：母体→胎盘→胎儿三联征：锯齿形牙、间质性角膜炎和神经性耳聋2.后天性：性接触传播先天梅毒儿锯齿形牙先天梅毒后天梅毒Ⅰ期梅毒：传染性极强，破坏性小感染后2～4周左右局部出现无痛性硬下疳。Ⅱ期梅毒：传染性强，破坏性小发生于硬下疳出现后6～8周，以梅毒疹为主要表现。Ⅲ期（晚期）梅毒：传染性小，破坏性大发生于感染2年以后，亦可长达10～15年的。除皮肤粘膜外，有明显内脏损害如心、脑等变，可危及生命。一期梅毒：硬下疳硬下疳特点90%发生在生殖器部位常单发，形态为红斑、溃疡

二期梅毒：梅毒疹丘疹性梅毒疹梅毒疹特点泛发对称，多为古铜色皮疹好发于掌跖（zhí）三期梅毒Ⅲ期共同特点损害数目少，分布不对称，破坏性大。自觉症状轻，客观症状严重。抗梅毒治疗有效，但无法修复破坏的组织器官梅毒树胶肿梅毒上颚穿孔（三）微生物生物学检查1.标本采集下疳渗出液、梅毒疹渗出液或局部淋巴结抽出液等标本检查梅毒螺旋体。2.血清学诊断临床以非梅毒螺旋体抗原血清试验进行过筛试验，以梅毒螺旋体抗原血清试验做确认试验。

以非梅毒螺旋体抗原血清试验进行过筛试验，以梅毒螺旋体抗原血清试验做确认试验。试验类型试验名称（英文缩写）非梅毒旋体抗原血清试验性病研究实验室试验（VDRL）快速血浆反应素环状卡试验（RPR）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）梅毒螺旋体抗原血清试验

梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TP-WB）回归热螺旋体引起人类回归热的病原体。可分为两类。一为虱传回归热，引起流行性回归热；另一为蜱传回归热，又称地方性回归热。临床特点为急起急退的高热，周期性反复发作。全身肌肉酸痛，肝脾肿大，重症可出现黄疸和出血倾向。伯氏疏螺旋体莱姆病的病原体，主要经蜱叮咬而传播。经3～32d的潜伏期，在叮咬部位可出现一个或数个慢性移行性红斑。晚期主要表现为慢性关节炎、慢性神经系统或皮肤异常。二、衣原体一类能通过滤菌器，严格细胞内寄生，具有独特发育周期的原核细胞型微生物。（一）生物学特性形态、染色Giemsa染色呈淡蓝色或紫色。2.独特的生活周期原体（EB）：为细胞外存在形式，有感染性，较小，卵圆形，中央有一致密的拟核。始体或网状体（RB）：为细胞内繁殖型，较大，圆形或不规则形，无致密拟核。汤飞凡3.培养特性目前最常用的细胞培养法，是衣原体诊断的金标准。4.抵抗力抵抗力较弱，不耐热，对冷冻干燥有耐受性。不能用甘油保存。四环素、大环内酯类抗生素或青霉素、利福平等对其有抑制作用。鹦鹉热衣原体对磺胺类药物耐药。（二）临床意义

沙眼衣原体感染范围较广，可侵害不同的系统和器官。主要有沙眼、包涵体性结膜炎、泌尿生殖道感染（如宫颈炎、输卵管炎、附睾炎、直肠炎、新生儿肺炎及中耳炎等）、性病淋巴肉芽肿。分类所致疾病对磺胺的敏感性沙眼衣原体沙眼、性传播疾病和幼儿肺炎敏感肺炎衣原体肺炎（少儿为主）和呼吸道感染不敏感鹦鹉热衣原体肺炎（青少年为主）和呼吸道感染不敏感（三）微生物学检验1.直接细胞学检查（1）Giemsa染色成熟的原体，Giemsa染色为紫红色，与蓝色的宿主细胞浆成鲜明对比。始体被染呈蓝色。（2）包涵体染色包涵体内含有糖原，Lugol碘液染色呈棕褐色斑块。2.血清学检测微量免疫荧光检测和酶免疫测定（四）防治原则衣原体感染后，免疫力不强。预防注意个人卫生，管理好家禽，取缔卖淫嫖娼等。治疗积极治疗，可选取青霉素、四环素、利福平等药物内服或局部外用。三、支原体

无细胞壁，细胞膜含固醇，能通过滤菌器，菌落呈荷包蛋样，能在无生命培养基中繁殖的最小原核细胞型微生物。对人致病主要支原体分类所致疾病肺炎支原体肺炎、支气管炎溶脲脲原体泌尿生殖道感染（一）生物学特性1.形态与染色呈高度多形态性，常用姬姆萨染色，呈淡紫色。2.培养特性营养要求较一般细菌高，对低渗透压敏感。在固体培养基上菌落呈圆形、光滑、边缘整齐，形成典型“油煎蛋”样菌落。

3.生化反应根据分解葡萄糖、利用精氨酸、水解尿素等初步鉴定支原体。4.抵抗力对热、干燥、低渗及多种消毒剂敏感，但对醋酸、结晶紫和亚碲酸盐有较强耐受性。支原体种类葡萄糖精氨酸尿素肺炎支原体＋－－人型支原体－＋－生殖道支原体＋－－解脲脲原体－－＋（二）微生物学检验1.肺炎支原体的鉴定根据形态、菌落和生化反应特征，还可做以下试验帮助鉴定。溶血试验生长抑制试验2.解脲脲原体鉴定解脲脲原体可分解尿素产氨，使酚红指示剂变色，不分解葡萄糖、精氨酸，鉴定中常用：代谢抑制试验：解脲脲原体分解尿素，当加入特异性抗血清后，可抑制相对应血清型菌株生长，培养基中指示剂酚红不显色。生长抑制试验：同肺炎支原体鉴定操作，低倍镜下观察制片周围抑菌环及宽度。（三）临床意义肺炎支原体的主要致病物质有P1蛋白、糖脂抗原和荚膜多糖，可引起人类原发性非典型肺炎。人型支原体、解脲脲原体和生殖道支原体可通过性接触传播，为性传播疾病病原体，引起人类非淋球菌性和非衣原体性泌尿生殖道感染。支原体无细胞壁，对青霉素、头孢菌素类抗生素不敏感，治疗常用红霉素、阿奇霉素、强力霉素等。四、立克次体严格细胞内寄生，寄生在吸血节肢动物体内，能通过滤菌器的原核细胞型微生物。一、普氏立克次体1.生物学特性形态与染色：常用Giemsa染色，染成紫色或蓝色。抗原构造：某些立克次体与变形杆菌OX19和OX2株有共同的抗原成分，可发生交叉反应立克次医生（美国）主要立克次体与变形杆菌菌株抗原交叉现象立克次体变形杆菌菌株OX19OX2OXK普氏立克次体++++-莫氏立克次体++++-恙虫病立克次体--+++Q热柯克斯体---五日热立克次体---2.临床意义

普氏立克次体是流行性斑疹伤寒病原体。经虱-人-虱方式传播。虱叮咬病人后，其粪便排在人皮肤上，人因搔抓破损而引起感染。也可通过呼吸道和眼结膜感染。2周左右潜伏期后，骤然发病，常见高热、头痛、皮疹，可伴神经系统、心血管系统等脏器损害。病后免疫力持久。采用四环素类抗生素和氯霉素治疗，禁用磺胺类药物。二、斑疹伤寒立克次体形态和色、培养特性、抗原构造等与普氏立克次体相似或相同。斑疹伤寒立克次体是地方性斑疹伤寒（鼠型斑疹伤寒）的病原体。鼠是主要贮存宿主。症状与流行性斑疹伤寒相似，但发病缓慢，病情轻，很少侵害神经系统、心肌等。三、恙虫病立克次体恙虫病的病原体。传染源是鼠类（野鼠或家鼠），恙螨是传播媒介又是贮存宿主。可引起发热、皮疹，全身淋巴结肿大及内脏器官病变病原体所致疾病传播媒介传染源普氏立克次体流行性斑疹伤寒人虱人斑疹伤寒立克次体地方性斑疹伤寒鼠蚤鼠恙虫病立克次体恙虫病恙螨鼠Q热柯克斯体Q热蜱牛、羊四、防治原则预防灭虱、灭蚤、灭鼠、灭螨，改善环境。做好个人防护及个人卫生。治疗可选用氯霉素、四环素类抗生素。注意：禁用磺胺类药物（可促其生长）真菌及检验

一类具有典型细胞核，有核膜和核仁，胞浆内有完整的细胞器，无根、茎、叶，不含叶绿素，无光合色素，细胞壁含几丁质和纤维素的单细胞或多细胞异养真核细胞型微生物。延时符真菌的生物学性状一、形态与结构

真菌按形态、结构可分为单细胞真菌和多细胞真菌两大类。1.单细胞真菌酵母菌：孢子，无菌丝类酵母菌：芽生孢子，假菌丝单细胞真菌形态类酵母菌—白假丝酵母菌芽生孢子假菌丝2.多细胞真菌丝状菌（霉菌）：菌丝和孢子多细胞真菌形态菌丝hypha在环境适宜情况下由孢子长出芽管，逐渐延长呈丝状，称菌丝。1.根据生长在培养基上的菌丝的功能不同分为：营养菌丝气生菌丝生殖菌丝2.根据菌丝有无隔膜分为：有隔菌丝：多数为致病性真菌无隔菌丝孢子（spore)：

真菌的繁殖器官。一条菌丝可长出多个孢子。在适宜条件下，孢子可发芽伸出芽管形成菌丝。区别要点真菌孢子细菌芽胞大小较大较小形态多种多样圆形或椭圆形抵抗力不强,60℃~70℃短时间即死强,煮沸短时间不死数目一条菌丝可产生多个孢子一个细菌体只形成一个芽胞作用为繁殖方式之一不是繁殖方式位置可在细胞内和细胞外形成只在细胞内形成真菌孢子与细菌芽胞的区别孢子的分类有性孢子：同一或者不同菌体上两性细胞融合减数分裂而成无性孢子：菌丝上细胞分化生成，不发生细胞融合。无性孢子分生孢子叶状孢子孢子囊孢子芽生孢子厚膜孢子关节孢子小分生孢子大分生孢子大分生孢子芽生孢子厚膜孢子孢子囊孢子二、真菌的繁殖与培养（一）繁殖方式1.无性繁殖

芽管繁殖分裂繁殖出芽繁殖生隔繁殖

2.有性繁殖

有性繁殖过程一般包括下列三个阶段：质配、核配和减数分裂（二）培养特性1.生长特点营养要求不高低温度（浅部真菌）低PH(4.0-6.0）高湿度和氧2.培养基沙保(Sabouraud)培养基类酵母型菌落酵母型菌落3.菌落1.单细胞真菌酵母型菌落类酵母型菌落（假菌丝）2.多细胞真菌丝状菌落丝状菌落三、真菌的抵抗力与变异性抵抗力较强，但不耐热60℃1h可被杀死。对2%石炭酸、2.5%碘酒、0.1%升汞或10%甲醛溶液较敏感。

灰黄霉素、制霉菌素B、克霉素、酮康唑、伊曲康唑等对真菌有抑制作用。

形态、结构变异、菌落变异和抗药性变异。四、真菌的感染致病性真菌感染条件致病性真菌感染超敏反应性疾病毒素中毒毒素与致癌

延时符真菌感染的检验一、标本的采集和处理

1.标本的采集——根据真菌感染部位采集不同的标本。取毛发、皮屑、指（趾）甲等标本取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本深部真菌感染浅部真菌感染标本来源要适宜用药前采集标本严格无菌操作标本量要充足立即送检2.标本采集注意事项临床标本分离培养直接检查免疫学检查观察菌落生化反应染色镜检直接镜检3.检验程序核酸检测其他鉴定试验形态学检查病理组织标本动物实验镜检PASHE二、检验方法(一)直接镜检标本处理液：（1）KOH溶液：适于检查致密的难以透明的材料。（2）生理盐水：用于观察真菌的出芽现象。（3）水合氯醛-石炭酸-乳酸封固液：透明力较强，只限于不透明标本。镜检（加温）毛发或皮屑等注意真菌与其他混杂物的鉴别标本+标本处理液革兰染色：各种真菌均为革兰阳性（图1）。乳酸酚棉蓝染色：染成蓝色（图2）。墨汁染色：背景染成黑色，菌体不着色（图3）。荧光染色：荧光显微镜下发出荧光。糖原染色：多糖成分呈红色，核为蓝色，背景为淡绿色。（图1）（图3）（图2）（一）基本条件1.常用工具平皿、试管、接种针、接种环、接种钩、培养箱等。三、分离培养与鉴定2.培养基真菌营养要求不高，最适pH4.0～6.0。常用的培养基培养基名称培养基用途沙氏培养基真菌的常规培养放线菌酮-氯霉素琼脂真菌的常规培养玉米粉吐温-80琼脂观察白假丝酵母菌的厚膜孢子马铃薯葡萄糖琼脂

观察真菌菌落色素，用于鉴别尿素琼脂生化反应鉴别培养（红色癣菌和石膏样癣菌）心脑浸液葡萄糖血琼脂显色鉴定培养基深部真菌培养真菌的培养与鉴定（二）培养方法仅用于培养生长繁殖较快真菌。观察真菌结构及生长发育过程。多用于菌种传代接种与保存。试管培养法大培养法小培养法玻璃棒载玻片培养基盖玻片无菌蒸馏水(三)生长现象

类酵母型菌落丝状菌落观察菌落生长速度、菌落大小、表面形态、性质、颜色、边缘、底部等。酵母型菌落糖（醇）类发酵试验检测真菌对单糖、多糖、醇类等发酵情况。同化碳源试验检测真菌对糖类中的碳源利用能力的试验，主要用于鉴定酵母菌。同化氮源试验检测真菌对氮源利用能力的试验，主要用于鉴定酵母菌。明胶液化试验某些真菌具有明胶酶，可分解明胶蛋白，使其失去凝胶性质而不能凝固。尿素分解试验某些真菌具有尿素酶，可分解尿素。1、常用生化试验(四)真菌的鉴定方法2、免疫学检查皮肤试验提取真菌抗原，进行皮内注射或斑贴试验，观察注射或试验部位有无红肿硬结出现。血清学检测检测真菌的抗原或抗体，例如：胶乳凝集试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光技术、放射免疫分析等。3、其它鉴定诊断方法(l)厚膜孢子形成试验接种玉米粉吐温-80琼脂

25℃孵育1~3天待测菌每天于显微镜下观察应用：白假丝酵母菌的鉴定。方法：结果：白假丝酵母菌在72小时内可观察到丰富的假

菌丝，假菌丝顶端见1～2个厚膜孢子。厚膜孢子假菌丝2.芽管形成试验

方法：待测菌+0.5～1ml血清37℃水浴2～3小时镜检应用：白假丝酵母菌的鉴定。3、其它鉴定诊断方法结果：绝大部分白假丝酵母菌可形成典型放大镜柄状芽管。芽管3、其它鉴定诊断方法

动物接种病理组织检查核酸检测真菌毒素的检测用于分离病原性真菌、确定致病性、研究抗真菌药物。用于深部真菌感染的诊断。用于真菌的分型鉴定。有ELISA、薄层层析法、高效液相色谱法等多种方法。G试验用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断。（四）真菌药物敏感性试验药敏试验目的指导临床用药。监控耐药菌株的发生和耐药性变化。预期研究新药的潜在疗效。(一)临床常用抗真菌药物据化学结构分类多烯类：如两性霉素B、制霉菌素等。吡咯类：如酮康唑、伊曲康唑等。其他：如氟胞嘧啶。据作用机制分类作用于真菌细胞膜：如两性霉素B等。作用于真菌细胞壁：如尼可霉素Z等。干扰真菌DNA合成：如5-氟胞嘧啶等。其他：如大蒜新素及冰醋酸等。（二）酵母菌药敏试验方法——微量稀释法1．试验前准备RPMI1640培养基（含L-谷氨酰胺、酚红，不含碳酸氢钠）培养基以培养基依次作10倍稀释，浓度范围：原液~10倍于试验终浓度。药液稀释配成最高试验浓度的10倍（水溶性药物）或100倍（脂溶性药物）。药物原液配制用培养基稀释成1×103～5×103CFU/ml待检菌液制备2．方法稀释药物将药液加至无菌96孔微量板各孔接种0.1ml工作浓度的菌液35℃孵育48h（假丝酵母菌）或72h（新型隐球菌），观察结果3．结果判断

4.质量控制

采用标准菌株作为每次测定质控菌株，其MIC应落在预期值范围内。MIC通常指完全抑制待测菌生长（孔内液体完全透明）的最低药物浓度。吡咯类和氟胞嘧啶：与对照孔相比50%生长被抑制的最低药物浓度。（二）酵母菌药敏试验方法——纸片扩散法1．试验前准备培养基商品化含药物纸片药物纸片用无菌生理盐水调整至0.5麦氏单位待检菌液制备含葡萄糖和亚甲蓝的M-H琼脂（二）酵母菌药敏试验方法——纸片扩散法2．方法用无菌棉签蘸取菌液

35℃孵育18~24小时若生长不良可延长至48小时贴上药物纸片均匀涂布接种M-H琼脂药物纸片接种菌液

质量控制——

标准质控菌株的抑菌环直径必须质控允许范围。（二）酵母菌药敏试验方法——纸片扩散法

结果判断读取<80%抑制生长时的抑菌环直径，环内的微小菌落（20%）可忽略不计。据抑菌环直径判断结果。延时符常见病原性真菌及检验

浅部感染真菌一、皮肤癣真菌分表皮癣菌属、毛癣菌属和小孢子癣菌属3个属，可侵犯皮肤、指（趾）甲和毛发，引起人类的体癣、股癣、手癣、足癣、甲癣、头癣等。体癣股癣手癣一、皮肤癣真菌头癣足癣甲癣表皮癣菌属对人致病的是絮状表皮癣菌。镜检可见大分生孢子、菌丝较细有分隔、厚膜孢子。絮状表皮癣菌菌落絮状表皮癣菌大分生孢子、厚膜孢子絮状表皮癣菌菌落毛癣菌属常见的致病菌有红色毛癣菌、紫色毛癣菌、须毛癣菌、断发毛癣菌和许兰毛癣菌。红色毛癣菌菌落正面红色毛癣菌菌落背面紫色毛癣菌菌落2.毛癣菌属：须毛癣菌菌落断发毛癣菌菌落许兰毛癣菌菌落毛癣菌属显微镜下可见大分生孢子、小分生孢子；菌丝形态多样。红色毛癣菌小分生孢子紫色毛癣菌菌丝红色毛癣菌大分生孢子2.毛癣菌属：断发毛癣菌小分生孢子及菌丝许兰毛癣菌菌丝须毛癣菌大、小分生孢子3．小孢子癣菌属常见的致病菌有铁锈色小孢子菌、石膏样小孢子菌、犬小孢子菌等。铁锈色小孢子菌菌落石膏样小孢子菌菌落犬小孢子菌菌落3．小孢子癣菌属镜下可见菌丝、厚壁梭形大分生孢子。犬小孢子菌大分生孢子石膏样小孢子菌大分生孢子铁锈色小孢子菌菌丝（二）微生物学检验1．标本采集采集皮屑、甲屑、病发。2．检验方法直接镜检：查找菌丝和孢子。分