药物的杂质检查

第三章

药物的杂质检查

Contents药物的杂质与限量1杂质的检查方法2一般杂质的检查方法3特殊杂质的检查方法

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一、药物的杂质与纯度第一节药物的杂质与限量杂质任何影响药品纯度的物质均称为杂质。杂质无治疗作用、或影响药物的稳定性和疗效、甚至对人体健康有害。

药品纯度指药物的纯洁程度，是反映药品质量的一项重要指标。主要由药品质量标准中的“检查”项下的杂质检查来控制。

注意药物纯度与化学纯度的区别药物纯度的评价应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。

生产过程中引入药物在合成过程中未反应的原料、中间体和副产物、所用的试剂、溶剂、还原剂、金属器皿、装置等。

贮藏过程中引入外界条件的变化或微生物的作用可能发生的水解、氧化、异构化、晶型转化、聚合等变化而产生的有关杂质。二、杂质的来源

示例：双氯非那胺的生产原料残留：邻二氯苯中间体分解：氯化铵分解NH4Cl原料药生产中引入的杂质

示例肾上腺素注射液抗氧剂——焦亚硫酸钠稳定剂——EDTA-2Na肾上腺素磺酸制剂生产中引入的杂质肾上腺素

光学异构体例.肾上腺素左旋体的升压作用是右旋体的12倍盐酸普萘洛尔左旋异构体的

-受体阻断作用比右旋体大60倍。无效、低效异构体或晶型几何异构体（顺式体，反式体）例.维生素A全反式的生物活性最高

多晶型晶型不同，理化常数、溶解度、稳定性、体内吸收和疗效也不同。例.无味氯霉素有多晶现象，B晶型易被酯酶水解而吸收，为有效晶型，而A晶型则不易被酯酶水解，活性很低。

药物贮藏中引入的杂质水解反应：吲哚美辛——酰胺键易发生水解反应的结构：酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等氧化反应：利血平——氧化产物无降压作用

例卡比马唑中甲巯咪唑的引入卡比马唑的合成过程：甲巯咪唑即是卡比马唑合成中的中间体，也是贮存过程中的分解产物。

严格控制药品的贮藏条件，是保证临床用药安全、有效的一个重要方面。

三、杂质的种类与分类按来源分一般杂质在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐等特殊杂质在个别药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。如阿司匹林中的游离水杨酸、甲硝唑中的2-甲基-5-硝基咪唑等。

按毒性分信号杂质本身一般无害，但其含量的多少可以反映出药物的纯度水平，称其为“信号”杂质。如氯化物、硫酸盐等属于信号杂质。毒性杂质对人体有毒害的杂质。如重金属、砷盐、氰化物等应严格加以控制，以保证用药安全。

有机杂质残留溶剂

无机杂质

按化学类别和特性分类合成中未反应完全的原料、中间体、副产物、降解产物等生产中使用的有机溶剂来源于生产过程，一般是已知的和确定的，直接影响药物的稳定性，反映生产工艺情况

四、杂质的限量定义药物中所含杂质的最大允许量。计算百分之几或百万分之几（ppm）表示

检查方法限度检查法定量测定对照法比较法灵敏度法

样品管标准管注意事项：平行操作原则。对照法

在供试品溶液中加入一定量的试剂，在一定反应条件下不得有正反应出现，从而判断供试品中所含杂质是否符合限量规定灵敏度法取一定量供试品依法检查，测定特定待检杂质的参数与规定的限量比较，不得更大。比较法

示例3-1茶苯海明中氯化物的检查已知：求：L＝？解：

示例3-2谷氨酸钠中重金属的检查已知：S＝1.0gC＝10µg/mlL＝10×10－6求：V＝？解：

示例3-3

肾上腺素中酮体的检查解：已知：=435A=0.05求：L＝？

示例3-4卡比马唑片中甲巯咪唑的检查计算注意①单位一致②稀释体积③ppm的表示方法TLC法——

杂质对照品法解：卡比马唑片规格：5mg

第二节杂质的检查方法一、杂质的研究规范（一）有机杂质在药品质量标准中的项目名项目名称

杂质的化学名以某类杂质名根据检测方法选用肾上腺素中的“酮体”利巴韦林中的“有关物质”“杂质吸光度”

（二）杂质检查项目的确定确定原则：针对性原料药和制剂中的杂质根据其生产工艺、起始原料情况确定检查项目规定降解产物和毒性杂质的检查项目新药经研究和稳定性考察检出的，并在批量生产中出现的杂质和降解产物。对在合成、纯化和贮存中实际存在的杂质和潜在的杂质进行研究，包括无机杂质、有机杂质及残留溶剂。

单一对映体药物其可能共存的其他对映体应作为杂质检查消旋体药物当已有其单一对映体药物的法定质量标准时，应在该消旋体药物的质量标准中设旋光度检查项目。

（三）杂质限度的确定确定原则：合理性在确保用药安全有效的前提下，应考虑：生产的可行性及批与批之间的正常波动药品本身的稳定性根据每日剂量来制订质控限度有机杂质的限度规定应包括：每一个已知杂质、未知杂质及总杂质。仿制药品的杂质限度，应与已上市产品进行质量对比研究。

药物最大日剂量报告限度a鉴定限度b质控限度c原料药≤2g＞2g0.05%0.03%0.10%或1.0mg0.05%0.15%或1.0mg0.05%制剂≤1g＞1g＜1mg1~10mg＞10mg-2g＞2g＜10mg10mg-100mg＞100mg-2g＞2g0.1%0.05%1.0%或5μg0.5%或20μg

0.2%或2mg0.10%

1.0%或50μg

0.5%或200μg

0.2%或3mg0.15%原料药与制剂的杂质限度

报告限度（reportingthreshold）：超出此限度的杂质均应在检测报告中报告，并应报告具体的检测数据。b.鉴定限度（identificationthreshold）：超出此限度的杂质均应进行定性分析，确定其化学结构。c.质控限度（qualificationthreshold）：质量标准中一般允许的杂质限度，如制订的限度高于此限度，则应有充分的依据。

（四）杂质检查方法的选择与验证用于杂质检查的分析方法要求专属、灵敏。专属性：根据原料药或制剂的生产工艺及储存条件，以中间体、立体异构体、粗品、重结晶母液、经加速破坏性试验后的样品作为测试品进行系统适用性研究，考察产品中各杂质峰及主成分峰相互间的分离度是否符合要求。

采用HPLC法检查有机杂质时，常采用梯度洗脱。

检测限：要符合质量标准中对杂质限度的要求，最低检测限不得大于该杂质的报告限度。

二、杂质的常用检查方法物理性质外观性状分配或吸附

化学性质性质差异酸碱性

氧化还原性质

对光的吸收化学反应

常用方法化学方法色谱方法光谱方法物理方法

与试剂产生颜色与试剂产生沉淀与试剂产生气体杂质（一）化学方法

显色反应检查法杂质与试剂产生颜色比色法示例3-5氯硝柳胺中5-氯水杨酸和2-氯-4-硝基苯胺的检查氯硝柳胺5-氯水杨酸2-氯-4-硝基苯胺5-氯水杨酸的检查检查原理

2-氯-4-硝基苯胺的检查氨基磺酸铵的作用：将剩余的亚硝酸分解除去

要求：1min内不得出现浑浊。2.沉淀反应检查法杂质与试剂产生沉淀比浊重量法测定杂质的量

示例3-6盐酸肼屈嗪中游离肼的检查检查原理

4.滴定法滴定剂只与杂质反应，以一定浓度的滴定溶液滴定药物的杂质，可以定量地测定杂质的含量。检查原理示例3-7硫酸亚铁中高铁盐的检查

1.TLC法（1）杂质对照品法（二）色谱方法方法适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况样品对照品

示例3-8枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查判断结果供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照溶液品溶液主斑点比较，不得更深。供试品溶液：枸橼酸乙胺嗪（50mg/ml）对照品溶液：N-甲基哌嗪对照品(50μg/ml)点样→展开→晾干薄层板→检视斑点

（2）供试品溶液自身稀释对照法适用于杂质的结构不能确定，或无杂质对照品的情况。限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近的情况下使用。样品对照品结果判断供试品溶液所显杂质斑点与自身稀释对照溶液或系列自身稀释对照溶液所显主斑点比较，不得更深。

示例3-11吡罗昔康中有关物质的检查供试品溶液：20mg/ml对照溶液：0.2mg/ml结果判断：供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液所显的主斑点比较，不得更深。稀释

（3）杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用当药物中存在多个杂质时，其中已知杂质有对照品时，采用杂质对照品法检查；共存的未知杂质或没有对照品的杂质，可采用供试品溶液自身稀释对照法检查。样品对照品对照

判断：

供试品溶液如显杂质斑点不得多于2个，其中在与对照品溶液相同的位置上所显杂质斑点的颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深，另一杂质杂质的颜色与对照溶液主斑点比较，不得更深。示例3-13盐酸黄酮哌酯中有关物质的检查供试品溶液：20mg/ml对照溶液：0.10mg/ml对照品溶液：3-甲基黄酮-8-羧酸0.10mg/ml稀释

（4）对照药物法当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用与供试品相同的药物作为对照品，此对照药物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。

判断结果：供试品溶液①主斑点的位置与颜色应与对照品溶液的主斑点一致，如显杂质斑点，其颜色不得深于对照品溶液对应的杂质斑点，并不得有对照品溶液以外的杂质斑点；供试品溶液②除主斑点外，不得显任何杂质斑点。示例3-14马来酸麦角新碱中有关物质的检查供试品溶液①：5mg/ml供试品溶液②：0.2mg/ml对照品溶液：马来酸麦角新碱对照品，5mg/ml

系统适用性试验TLC检测灵敏度分离效能比移值（Rf）限量要求：规定杂质斑点数和单一杂质量、杂质总量

2.HPLC法（1）外标法测定供试品中某个杂质的含量供试品溶液杂质对照品溶液供试品溶液对照品溶液

进样AX和AR记录色谱图计算

示例3-15卡托普利及其片剂中卡托普利二硫化物的检查

供试品溶液：0.5mg/ml对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品，5μg/ml混合溶液：卡托普利和卡托普利二硫化物对照品0.1mg/ml和15μg/ml适用性试验：用混合溶液

R卡托普利和卡托普利二硫化物大于4.0

以峰面积计算其含量，原料药中的二硫化物不得超过1.0%，片剂中的不得超过卡托普利标示量的3.0%

（2）加校正因子的主成分自身对照法消除杂质与主成分的响应因子可能不同所引起的测定误差适用于已知杂质的控制。用杂质对照品测定f杂质，f杂质和相对保留时间直接载入各品种质量标准中，在常规检验时用相对保留时间定位，以f杂质校正该杂质的实测峰面积。药物对照品的峰面积杂质对照品的峰面积

方法调节检测灵敏度：用对照溶液主成分色谱峰的峰高约为满量程的10％~25％供试品溶液的制备对照溶液的制备进样：供试品溶液对照溶液分析时间：主成分色谱峰保留时间的2倍判断：供试品溶液中各杂质的峰面积分别乘以相应的校正因子后，与对照溶液中主成分的峰面积比较。

示例3-16红霉素A中红霉素B、C组分及有关物质的检查供试品溶液：4mg/ml对照溶液：0.2mg/ml调节检测灵敏度：用对照溶液主成分色谱峰的峰高约为满量程的20％进样：供试品溶液对照溶液分析时间：供试品溶液主成分色谱峰保留时间的4倍稀释

结果判断：

A红霉素B校正、A红霉素C校正<A红霉素A对照液A红霉素烯醇醚校正≤3/5A红霉素A对照液校正峰面积：红霉素Af=1.0

红霉素B0.7红霉素C1.0

红霉素烯醇醚0.09其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积

（3）不加校正因子的主成分自身对照法适用于没有杂质对照品的情况对照溶液：供试品的稀释液调节检测灵敏度进样：供试品溶液对照溶液分析时间：供试品溶液主成分色谱峰保留时间的2倍供试品溶液中各杂质的峰面积与对照溶液主成分的峰面积比较.

自身对照液供试品溶液A杂总=A1＋A2＋A3

供试品溶液：0.4mg/ml对照溶液：(0.4μg/ml)调灵敏度：对照溶液

使主成分色谱峰的峰高约为满量程的25%进样：供试品溶液对照溶液分析时间：供试品溶液主成分色谱峰保留时间的2倍判断：单个杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.25倍（0.25%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积。

示例3-18利巴韦林中有关物质的检查稀释

（4）面积归一化法适用于粗略测量供试品中杂质的含量。供试品溶液进样各组分峰面积记录色谱图计算计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积（含药物的峰面积，而不含溶剂峰面积）的百分率。该法一般不宜用于微量杂质的检查。

杂1杂2主成分

3.GC法主要用于药物中挥发性杂质的检查。方法：方法同HPLC标准溶液加入法标准溶液加入法杂质对照液+供试液外标法或内标法测定总量总量-加入的杂质对照品的量=杂质的量

采用下列公式计算：Cx供试品中组分X的浓度；Ax供试品中组分X的色谱峰面积；ΔCx加入的已知浓度的待测组分对照品的浓度；Ais

加入对照品后组分X的色谱峰面积L=Cx/C样×100%

示例3-19樟脑中有关物质的检查供试品溶液：100mg/ml

对照溶液：1mg/ml

混合溶液：3,7-二甲基-1,6-辛二烯-3-醇与乙酸龙脑酯系统适用性试验：混合溶液分离度应大于2.0调节检测灵敏度：对照溶液使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20％稀释

进样：供试品溶液对照溶液分析时间：供试品溶液主成分色谱峰保留时间的2倍判断：供试品溶液如有杂质峰，单个杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2.0%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积的4倍（4.0%）。

毛细管电泳法可以用于酶类药物中酶类杂质的检查。检查方法与高效液相色谱法相同。4．毛细管电泳法示例3-20抑肽酶中去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-抑肽酶的检查电泳条件：熔融石英毛细管柱（75μm×60cm，有效长度50cm），电极液为120mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH2.5），检测波长214nm，毛细管温度为30℃，分离电压12kv，1.5Pa压力进样，进样时间3s。

系统适用性试验去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶的相对保留时间为0.98去丙氨酸-抑肽酶的保留时间为0.99两个杂质之间的分离度应大于0.5抑肽酶峰的拖尾因子不得大于3。以抑肽酶为参照供试品溶液：5U/ml对照品溶液：抑肽酶对照品，5U/ml

测定：供试品溶液、对照品溶液计算：ri：去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶或去丙氨酸-抑肽酶的校正峰面积rs：去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶、去丙氨酸-抑肽酶和抑肽酶的校正峰面积总和要求：去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶的量不得大于8.0%，去丙氨酸-抑肽酶的量不得大于7.5%。

1．可见-紫外分光光度法在某一波长处杂质有最大吸收，药物无吸收。二羟基蒽醌地蒽酚（三）光谱方法依据药物和杂质对光选择吸收性质差异进行检查。示例3-21地蒽酚中二羟基蒽醌的检查均有紫外吸收

432nm

地蒽酚无吸收二羟基蒽醌有最大吸收规定0.01%地蒽酚氯仿溶液A432nm<0.12二羟基蒽醌地蒽酚

示例3-22两性霉素B中两性霉素A的检查在305nm处两性霉素A的吸收最强，而两性霉素B的吸收很小，ChP通过测定两性霉素B供试品溶液在305nm处的吸光度来控制两性霉素A的限量。两性霉素A两性霉素B

检查药物中无效或低效晶型。例：甲苯咪唑中A晶型的检查（C晶型有效晶型，A无效）样品25mg对照品25mg：含10%A晶型同法制样，记录IR图谱。2.红外分光光度法

662cm-1640cm-1803cm-1620cm-1基线：消除背景吸收D1D2

对照品＋10％A晶型

662cm-1640cm-1D2D1供试品D2’D1’>结果判断A晶型C晶型640cm-1有强吸收吸收很弱662cm-1吸收很弱有强吸收

3.原子吸收分光光度法通过测定药物中所含待测元素原子蒸气，吸收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的含量。限量检查对照品液：供试品＋对照品a供试品液bb<(a-b)符合规定b>(a-b)不合格吸光度

1.热分析法(thermoanalysis)（1）热重分析法(thermogravimetricanalysis,TGA)在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系，研究物质在加热同时失重的情况下，所发生的质的变化。应用：药物稳定性的研究；贵重和易氧化药物的干燥失重测定；药物结晶水和吸附水的区别以及结晶水含量的测定。（四）其他方法

TABCTiTfW1W2W反应区间=Tf–Ti减失重量=W1-W2方法：将样品置热天平中，按一定速度升温，记录样品重量随温度的变化，即热重曲线。物质在相变（失去结晶水，热分解等）时保持温度不变，热重曲线呈台阶状吸附水失去为渐进过程；结晶水失去在特定温度发生突跃，可以区分。

40～80℃：CuSO4·5H2O→CuSO4·3H2O+2H2O80～120℃：CuSO4·3H2O→CuSO4·H2O+2H2O200～250℃：CuSO4·H2O→CuSO4+H2O40℃80℃120℃200℃250℃（失重14.4％）

（失重28.8％）

（失重36％）

2.差示热分析（differentialthermalanalysis,DTA）是在程序升温下，测量被测物质和参比物之间的温差与温度关系的一种技术。参比物是一种惰性物质，在加热过程中不发生相变和化学变化。因此温差(△T)只与被测物质的质量变化有关。△T=0被测物未发生吸热或放热反应；△T=-为吸热峰(负峰)

；△T=+

为放热峰(正峰)。

T△T+－放热峰吸热峰峰宽峰高外推起始点（与熔点相当）典型的差热曲线

DTA在药物分析中的应用测定药物的熔点药物的定性分析尖峰为物理变化宽峰为化学变化估测药物的纯度

134~226℃CaC2O4·H2O→CaC2O4+H2O398~478℃CaC2O4→CaCO3+CO↑635~838℃CaCO3→CaO+CO2↑

3.差示扫描量热法（differentialscanningcalorimetry,DSC）在程序升温下，测量维持样品和参比物的温度相同，测量输给待测物质和参比物的能量差与温度(或时间)关系。DSC与DTA的区别：记录方式不同，DSC记录系统供给的能量，吸热供给能量；放热减少供给的能量。DSC-TG常联合用。

应用熔点测定：用于鉴别药物真伪例DSC扫描阿司匹林和扑热息痛

不同晶型的物质，其熔点不同，熔化吸热峰的位置也就不同。DSC也可用于药物中无效或低效晶型的检查。无味氯霉素的DSC曲线85℃是B型吸热特征峰90℃是A型吸热特征峰多晶型及其转变的表征例无味氯霉素有A型和B型

纯度检查条件：①样品纯度在98.0%以上②杂质不与主成分反应③杂质不与主成分形成共晶或固熔体④杂质与熔融试样有化学相似性⑤药物在熔融过程中化学性稳定⑥药物如存在多晶现象则必须全部转变成某一晶型。

酸碱滴定法pH法指示剂法酸碱性的差异2.酸碱度检查法

（1）酸碱滴定法例：己酸羟孕酮中正己酐、对甲苯磺酸的检查要求：V<0.50ml规定消耗滴定液的体积本品0.20g(NaOH0.02mol/L)显微蓝色中性乙醇溴麝香草酚蓝Vml

（3）pH值测定法（2）指示剂法将一定量指示液的变色pH值范围作为供试液中酸碱性杂质的限度指标。用电位法测定供试品溶液的pH值，衡量其酸碱性杂质是否符合限量规定。例地蒽酚的酸度检查取本品1.0g，加水25ml，摇匀，滤过；取续滤液10ml，加甲基红指示剂2滴，不得显红色。

3．物理性状检查法根据药物与杂质在性状上的不同，如臭味和挥发性的差异、颜色的差异、溶解行为的差异和旋光性等的差异进行检查。例乙醇中杂醇油的检查取本品10ml，加水5ml与甘油1ml，摇匀后，分次滴加在无臭滤纸上，使乙醇自然挥散，始终不得发生异臭。

例樟脑（合成）中不挥发物的检查在100℃，使樟脑完全挥发，残渣干燥至恒重后，称其重量来控制不挥发性杂质。例盐酸胺碘酮中游离碘的检查取本品0.5g，加水10ml，振摇30秒，放置5分钟，滤过，滤液加稀硫酸1ml与氯仿2ml，振摇，氯仿层不得显色。

例高三尖杉酯碱溶液澄清度的检查取本品10mg加0.1%酒石酸溶液10ml溶解后，溶液应澄清。例比旋度差异化合物浓度(%)温度(℃)[а]D黄体酮1～1.420～25+193°4°醋酸双烯醇酮0.920-31°±2°醋酸妊娠烯醇酮～1常温+20°±2°妊娠烯醇酮117～20+28°±2°黄体酮及其中间体的比旋度(溶剂：乙醇)

一、氯化物的检查法1.原理比较浊度Cl-

＋Ag+AgCl（白色浑浊）稀硝酸第三节一般杂质的检查方法2.方法标准氯化钠溶液：以50ml中含50~80μg的Cl为宜酸度以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜SRS：供试品溶液R：标准溶液

3.干扰的排除（1）供试品有色采用内消色法，按ChP附录规定的方法处理。供试品溶液供试品溶液AgNO3放置10min反复过滤澄清溶液AgNO3水标准NaCl溶液水对照溶液暗处放置5min后比浊

二、硫酸盐检查法SO42-

＋Ba2+BaSO4（白色浑浊）HCl1.原理比较浊度2.方法[SO42-]0.1mg~0.5mg/50ml,即相当于标准硫酸钾溶液1~5ml酸度稀盐酸2ml/50ml3.干扰的排除有色供试品采用内消色法排除干扰。SR

三、铁盐检查法1.原理Fe3+＋6SCN-[Fe(SCN)6]3-(红色)标准铁溶液:以硫酸铁铵配制。加入硫酸，防止鉄盐水解。50ml溶液中含Fe3＋为5~90μg时，溶液的吸收度与浓度呈良好线性关系。

2.方法HCl盐酸酸性:防止Fe3＋的水解

3.干扰的排除（1）当有Fe2+存在时，加氧化剂过硫酸铵将Fe2＋

氧化成Fe3＋用硝酸氧化时，需加热（红色）（2）当供试溶液管与标准溶液管色调不一致时，或所呈硫氰酸铁颜色较浅不便比较时,可分别移入分液漏斗，各加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色。

四、重金属检查法重金属在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等。在药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。ChP2010收载三种检查方法第一法硫代乙酰胺法第二法炽灼后的硫代乙酰胺法第三法硫化钠法

1.原理CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2SH2S+Pb2+pH3.5PbS+2H+适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物，是最常用的方法。第一法硫代乙酰胺法2.方法[Pb2＋]

10µg~20µg/25ml，相当于标准铅溶液1~2ml。酸度pH3.0~3.5

SRS+R醋酸盐缓冲液（1）供试品有色：可采用外消色法消除干扰。标准溶液稀焦糖溶液＋标准溶液调色后的样品溶液检查3.干扰的排除

（2）供试品中有微量Fe3+H2SFe3+弱酸性S混浊对比色有影响排除Fe3+Fe2+

Vc或盐酸羟胺干扰

适用于含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物。第二法炽灼后的硫代乙酰胺法原理重金属可能会与芳环、杂环形成较牢固的价键，需先将供试品炽灼（500~600℃

）破坏，残渣加硝酸进一步破坏，蒸干。加盐酸转化为易溶于水的氯化物，再按第一法进行检查。

炽灼温度应在500~600℃。温度过高，重金属损失。加硝酸加热处理后，必须蒸干，除尽氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。消除盐酸或其他试剂中可能夹杂重金属的影响。对于含钠盐或氟的有机药物，应用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿。2.注意事项

原理在碱性条件下用硫化钠作显色剂。Pb2＋＋S2-

→PbS↓第三法硫化钠法适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物。硫化钠试液应临用新制。

五、砷盐检查法砷盐是剧毒物质，多由药物生产过程中所使用的无机溶剂引入。ChPJPUSPBP古蔡氏法

Ag-DDC法

次磷酸法

各国药典砷盐检查法比较

1.原理As3+＋3Zn＋3H+3Zn2+＋AsH3AsO33-＋3Zn＋9H＋3Zn2+＋3H2O＋AsH3AsH3＋3HgBr23HBr＋As(HgBr)3(黄色)2As(HgBr)3＋AsH33AsH(HgBr)2(棕色)As(HgBr)3＋AsH33HBr＋As2Hg3(黑色)AsO43-＋4Zn＋11H+4Zn2+＋4H2O＋AsH3五、砷盐检查法（一）古蔡(Gutzeit)氏法

2.装置与试剂作用（1）验砷仪样品对照

①KI-SnCl2试液AsO43-＋2I-＋2H+AsO33-＋I2＋H2OAsO43-＋Sn2+＋2H+AsO33-＋Sn4+＋H2OI2＋Sn2+2I-＋Sn4+4I-＋Zn2+[ZnI4]2-有利于H3As的形成

Zn粒与氯化亚锡在锌粒表面形成Zn-Sn齐，起去极化的作用，有利于H2均匀连续发生。

②Pb(Ac)2棉S2-+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgSH2S+Pb(Ac)22HAc+PbS

除去硫化氢干扰3.干扰的排除(1)供试品为S2-、SO32-、S2O32-S2-、SO32-、S2O32-H2SSO42-H+HNO3干扰砷斑检查解决办法HgBr2试纸HgS,Hg（黑色斑点）氧化例:解毒药硫代硫酸钠中砷盐的检查

(2)供试品为铁盐（Fe3+）干扰原因：消耗KI、SnCl2，氧化AsH3解决办法：可以先加足量的KI或先加入酸性氯化亚锡试液，将Fe3+还原为Fe2+。例：枸橼酸铁铵中砷盐检查

（3）含锑药物例如：葡萄糖酸锑钠SbH3+HgBr2SbH2(HgBr)+HBr（灰色的锑斑）改用白田道夫(Betterdorff)法。干扰原因：解决办法:白田道夫法

2As＋+3SnCl2+6HCl→2As↓+3SnCl4+6H＋

(棕褐色的胶态砷)与一定量标准砷溶液用同法处理后的颜色比较干扰砷斑检查

环状药物须进行有机破坏，方法有：碱破坏法样品加Ca(OH)2小火灼烧，再于500℃～600℃炽灼至完全灰化。例：酚磺酞、呋塞米检查中砷盐检查

碱融破坏法适用于环状结构的有机酸碱金属盐用石灰法不能破坏完全的情况。以无水Na2CO3无水碳酸钠进行碱融破坏例：苯甲酸钠中砷盐检查

环状药物

（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）1.原理利用砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中的银还原为红色胶态银，以Ag-DDC溶液为空白，于510nm的波长处，测定吸收度，供试品溶液的吸收度不得大于标准砷溶液的吸收度。二乙基二硫代氨基甲酸银结构：（红色）

试剂的作用：同古蔡法2.装置与试剂作用有机碱：吡啶（USP法）三乙胺-氯仿溶液（ChP法）三乙醇胺、麻黄碱等本反应可逆，加入有机碱使与HDDC结合，有利于反应向右定量进行完全。

古蔡法Hg(Br)2试纸Pb(Ac)2棉花反应液（相同）Ag(DDC)Ag(DDC)法标准磨口锥形瓶导气管古蔡氏法与Ag(DDC)法的比较

六、干燥失重检查法主要检查药物中的水分和其它挥发性物质。常用的方法常压恒温干燥法减压干燥法与恒温减压干燥法干燥剂干燥法

（一）常压恒温干燥法适用于受热较稳定的药物。1.方法将样品置于相同条件下已干燥至恒重的扁形称量瓶中，除另有规定外，在105℃干燥至恒重，按下式计算：干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定的条件下继续干燥1h后进行。

2.注意事项供试品应平铺于扁形称量瓶中，其厚度不超5mm；如为疏松物质，厚度不超过10mm。含有较多结晶水的药物，在105℃不易除去结晶水，可提高干燥温度。某些药物中含有较大量的水分，熔点又较低，如直接在105℃干燥，供试品易融化，表面结成一层薄膜，使水分不易继续挥发。先于40℃～50℃加热，使结晶水缓缓释去；然后逐渐升高温度，在105℃干燥至恒重的方式。

适用于熔点低或受热分解的供试品。设备：减压干燥器或恒温减压干燥器条件：压力应在2.67kPa（20mmHg）以下，温度为60℃。干燥剂：减压干燥器中：无水氯化钙、硅胶和五氧化二磷恒温减压干燥器中：五氧化二磷。（二）减压干燥法与恒温减压干燥法

示例药物熔点(℃)干燥剂减压干燥时间（h)木糖醇91.0~94.5五氧化二磷24卡托普利104~110五氧化二磷至恒重奋乃静94~100五氧化二磷至恒重泛昔洛韦101~10580℃至恒重

（三）干燥剂干燥法适用于受热分解或易升华的供试品。常用的干燥剂：硅胶、硫酸、五氧化二磷等设备：干燥器硅胶的吸水力次于五氧化二磷例马来酸麦角新碱干燥失重检查将本品置于五氧化二磷燥器中至恒重，减失重量不得超过2.0%马来酸麦角新碱分子中具有酰胺结构，在较高的温度下会水解，干燥失重检查采用该法。

注意事项使用PO5时需将干燥剂铺于培养皿中，置于干燥器内。若发现干燥剂表层结块、出现液滴，应将表层刮去，另加新的PO5再使用；弃去的PO5不可倒入下水道，应埋入土中。PO5不能反复使用。使用H2SO4时，应将H2SO4盛于培养皿或烧杯中，不能直接倾入干燥器；搬动干燥器时，应注意勿使H2SO4

溅出；用过的H2SO4经加热除水后可再用。除水的方法是：将含水硫酸置烧杯中加热至冒白烟、保持在110℃左右约30分钟。

费休氏法甲苯法LOGO结合水LOGO吸附水ChP、USP和BP收载的方法七、水分测定法

原理:碘氧化二氧化硫为三氧化硫时，需要定量的

水分参与反应：

I2+SO2+H2O⇄2HI+SO2

无水吡啶：定量吸收反应产物HI和SO2形成氢碘酸吡啶和硫酸酐吡啶。

费休氏法A:供试品所消耗费休氏试液的体积B：空白所消耗的费休氏试液的体积F：每1ml费休氏试液相当于水的重量W：供试品的重量硫酸酐吡啶不稳定，可于水发生副反应，加入无水甲醇可形成稳定的甲基硫酸氢吡啶：滴定的总反应为：

称取碘（置硫酸干燥器内48h以上）110g，置干燥的具塞锥形瓶中，加无水吡啶160ml，注意冷却，振摇至碘全部溶解，加无水甲醇300ml，称定重量，将锥形瓶置冰浴中冷却，在避免空气中水分侵入的条件下，通入干燥的二氧化硫至重量增加72g，再加无水甲醇使成1000ml，密塞，摇匀，于暗处放置24h后进行标定。费休氏试液的配制

测定方法终点指示自身指示永停法美罗培南氨苄西林钠分子中具有β-内酰胺和酰胺结构，对水不稳定盐酸伐昔洛韦具有引湿性供试品空白

八、炽灼残渣检查法BP称为硫酸灰分控制有机药物经炭化或挥发性无机药物中非挥发性无机杂质。常采用重量方法进行检查。

注意

遗留的炽灼残渣需留作重金属检查时，炽灼温度应控制在500~600℃炽灼至恒重的第二次称重应在规定温度继续炽灼30分钟后进行。含氟药物对磁坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。恒重：系指供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下的重量。

九、易炭化物检查法本法是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，常采用目视比色法。对照液：①“溶液颜色检查”项下的不同色调色号的标准比色液；②由比色用氯化钴液、比色用重铬酸钾液和比色用硫酸铜液按规定方法配制成的对照液；③高锰酸钾液。

十、残留溶剂测定法主要检查在合成原料药，辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去有机溶剂。第一类：应该避免使用第二类：应该限制使用第三类：GMP或其他质控要求限制使用第四类：尚无足够毒理学资料

ChP规定采用GC法第一法：毛细管柱顶空进样等温法适用于所需要检查的有机溶剂数量不多，并且极性差异较小的情况。第二法：毛细管柱顶空进样程序升温法适用于所需要检查的有机溶剂数量较多并且极性差异较大时的情况。第三法：溶液直接进样法采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。（一）测定方法

色谱柱类型固定液/固定相毛细管柱非极性100％的二甲基聚硅氧烷极性聚乙二醇（PEG-20M）中极性(35%）二苯基-（65%）甲基聚氧硅烷，（50%）二苯基-（50%）二甲基聚氧硅烷，（35%）二苯基-（65%）二甲基亚芳基聚氧硅烷，（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚氧硅烷（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚氧硅烷弱极性（5%）苯基-（95%）甲基聚氧硅烷，（5%）二苯基-（95%）二甲基亚芳基硅氧烷共聚物填充柱乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他适宜的填料

（1）用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的N>5000，填充柱的N>1000。（2）色谱图中，待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度(R)应大于1.5。（3）以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD<5%；以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD<10%。（二）系统适用性试验

顶空条件的选择时间：一般平衡30min~45min温度：对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的顶空平衡温度；但应兼顾试品的热分解特性。

内标法外标法

限度检查被测溶剂峰面积与内标峰面积之比不得大于对照品溶液的相应比值被测溶剂峰面积不得大于对照品溶液的相应峰面积（三）计算法内标法外标法

定量测定

十一、溶液颜色检查法药物溶液的颜色及其与规定颜色的差异能在一定程度上反映药物的纯度。对溶液颜色进行检查，可以控制药物中有色杂质的含量。本法系将药物溶液的颜色与规定的标准比色液相比较，或在规定的波长处测定其吸收度，以检查其颜色。

1.目视比色法：标准比色液进行比较的方法比色用K2Cr2O7液比色用CoCl2液比色用CuSO4液标准比色液贮备液（黄绿、黄、橙黄、橙红、棕红）加水10个色号

2.分光光度法于规定波长处：A测得﹤A规定3.色差计法通过测定供试品与标准比色液或水之间的色差值来比较供试品与标准比色液之间的颜色差异。

十二、溶液澄清度检查法

检查药物中微量的不溶性杂质。原理：药物溶液中存在分散的细微颗粒，当直线光通过溶液时，细微颗粒可引起光的散射，测量光的散射就可以测量溶液的浊度。比较供试品溶液和浊度标准液的浊度，来判断供试品溶液的澄清度是否符合规定。

浊度标准原液（ml）2.55.010.030.050.0水（ml）97.595.090.070.050.0

级号0.51234不同级号浊度标准液浊度标准液的制备甲醛腙：白色

第四节特殊杂质的检查与鉴定一、特殊杂质的研究规范定性研究的意义：获得有关物质的结构信息，分析其形成过程，合成时可设法避免该杂质的形成，或经纯化使之降至可接受的水平，贮藏过程中控制好条件。

定性或确证结构的杂质表观含量在0.1%及其以上（或者等于或高于鉴定限度）的杂质表观含量在0.1%以下的具强烈生物作用的杂质或毒性杂质光学异构体检查在原料药制备工艺研究时，应严格控制手性原料与每步反应产物的光学纯度在质量研究中，应结合工