自身抗体的检测及应用

关于自身抗体的检测及应用一、自身免疫

【概念】

当机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成份包括正常或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶类等自身抗原产生免疫应答反应，出现自身抗体或致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫。第2页,共53页，星期六，2024年，5月一、自身免疫自身免疫可以是正常生理性的，例如：针对衰老或死亡的自体细胞。自身免疫也可以是病理性的，引起自身免疫病。第3页,共53页，星期六，2024年，5月二、自身免疫性疾病

【概念】

在内因与外因的共同作用下，机体的自身免疫应答失控，反应过度，直接或间接破坏自身组织，并引起相应器官病变，导致临床症状，则为自身免疫性疾病。分为器官特异性和全身性。第4页,共53页，星期六，2024年，5月二、自身免疫性疾病自身免疫性疾病的特点：（1）多数自身免疫性疾病是自发或特发性的，感染，药物等外因可能有一定的影响。（2）患者血清中存在有高水平的γ－球蛋白。（3）患者血清中有高效价的自身抗体或出现与自身抗原反应的致敏淋巴细胞。（4）病损部位有变性的免疫球蛋白沉积，呈现以大量淋巴细胞和浆细胞浸润为主的慢性炎症。第5页,共53页，星期六，2024年，5月二、自身免疫性疾病自身免疫性疾病的特点：（5）病程一般较长，发作与缓解交替出现，仅有少数为自限性。（6）女性多男性，老年多于青少年。（7）有遗传倾向。（8）应用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂有效。（9）常有其它自身免疫病同时存在。（10）可复制出相似的动物疾病模型。第6页,共53页，星期六，2024年，5月三、自身抗体

【概念】

由各种原因造成的机体B细胞产生针对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。第7页,共53页，星期六，2024年，5月RA自身抗体谱及临床意义RF 60％RA中出现，量与RA活 动性及严重性呈正相关。 亦在其它CTD出现抗CCP 在50％RA中出现（抗环瓜氨酸肽抗体） 特异性较高AKA（抗角蛋白抗体） 在40％RA阳性APF（抗核周因子） 在52％RA阳性抗RA33 RA阳性率为35％抗Sa 在部分RA阳性

以上抗体阳性有助于早期RA及不典型RA的诊断和早期开展治疗，改善预后第8页,共53页，星期六，2024年，5月自身抗体与疾病的关系

某些自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特异性，已经成为该病的血清标记抗体或特异性抗体。某些自身抗体与疾病的活动性有相关性，少数自身抗体参与了免疫病病理性损伤。第9页,共53页，星期六，2024年，5月特异性较强的自身抗体抗Sm 系统性红斑狼疮抗Scl-70 系统性硬化症抗SSA/SSB 干燥综合征抗CCP 类风湿关节炎第10页,共53页，星期六，2024年，5月抗体滴度的高低可判断疾病的活动性抗双链DNA SLEaCL SLE、磷脂抗体综合征RF 类风湿关节炎第11页,共53页，星期六，2024年，5月预测疾病的预后及临床亚型抗Jo-1 皮肌炎合并肺间质病变抗Scl-70 弥漫性系统性硬化抗rRNP 狼疮脑病第12页,共53页，星期六，2024年，5月自身抗体的意义

自身免疫性疾病的诊断；疾病活动性的判断；疗效的观察及预后；指导临床用药等；进行不同疾病的鉴别诊断。第13页,共53页，星期六，2024年，5月自身抗体常用检测方法第14页,共53页，星期六，2024年，5月自身抗体的检测方法：（1）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：该法检测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法在临床免疫实验室的应用受到一定限制。第15页,共53页，星期六，2024年，5月（2）酶免疫斑点(条带)实验

【优点】将经亲和层析纯化的抗原包被在固定的位置，每一种抗原只对应一条条带，不会产生非特异性反应条带，结果灵敏度高、特异好，判断实验结果简单，每个反应区均有质控带，可以显示操作是正确，阴性与阳性的结果明显，容易判断，条带显色与抗体滴度相关。第16页,共53页，星期六，2024年，5月(3)间接免疫荧光法(IFT):检测ANA的金标准，具有很高的敏感性和特异性。第17页,共53页，星期六，2024年，5月间接免疫荧光法原理将稀释的血清与生物载片（反应区内固定有包被基质的生物薄片）温育，如果样本是阳性的，特异性IgG、IgA和IgM抗体与相应的核抗原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。第18页,共53页，星期六，2024年，5月抗核抗体(ANA)是以自身真核细胞成分作为靶抗原的一组自身抗体的总称，泛指各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。第19页,共53页，星期六，2024年，5月抗核抗体(ANA)均质型与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA有关，引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮核膜型与抗ds-DNA有关，多见于SLE，特别是有肾炎者第20页,共53页，星期六，2024年，5月抗核抗体(ANA)斑点型与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体核仁型多见于系统性硬皮病第21页,共53页，星期六，2024年，5月项目检验方法SLE四项

ANA间接免疫荧光抗DS－DNA抗体间接免疫荧光抗组蛋白抗体ELISA抗核小体抗体ELISAENA系列

抗RNP免疫印迹、ELISA抗SM免疫印迹、ELISA抗SSA免疫印迹、ELISA抗SSB免疫印迹、ELISA抗JO-1免疫印迹、ELISA抗SCL-70免疫印迹、ELISA抗核糖体P蛋白免疫印迹、ELISARA三项

AKA（抗角质蛋白抗体）间接免疫荧光抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项

P-ANCA（荧光模型为核周模型）间接免疫荧光C-ANCA（荧光模型为细胞质模型）间接免疫荧光MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常见的自身抗体及其检测方法(1)第22页,共53页，星期六，2024年，5月(2)自身免疫肝炎七项

检验方法ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧光抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）间接免疫荧光RF三项

RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综合征三项（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗β2-糖蛋白1抗体ELISA常见的自身抗体及其检测方法第23页,共53页，星期六，2024年，5月ds-DNA

判断疾病活动性---ELISA

诊断疾病-----IFT第24页,共53页，星期六，2024年，5月自身抗体检测结果正确解读检测方法局限性：假阳性，假阴性临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期临床表现阳性，实验室检查阴性实验室检查阳性，临床表现阴性第25页,共53页，星期六，2024年，5月自身免疫病自身抗体非常复杂SLE患者中存在100多种自身抗体SeminArthritisRheum.2004Oct;34(2):501-37.第26页,共53页，星期六，2024年，5月自身免疫病自身抗体非常复杂APS患者中存在30种自身抗体JAutoimmun,2008.30(1-2):p.74-83.第27页,共53页，星期六，2024年，5月NEnglJMed2003;349:1526-33.疾病预警自身抗体在SLE发病前9.4年出现第28页,共53页，星期六，2024年，5月疾病预警AMA在PBC发病前10年出现第29页,共53页，星期六，2024年，5月临床复杂性急性肝衰患者出现Ｍ2和PBC特异性抗体第30页,共53页，星期六，2024年，5月临床复杂性抗CCP抗体在丙肝中8.5℅第31页,共53页，星期六，2024年，5月指标阴性是否意味着疾病的排除？指标阳性意味着什么？第32页,共53页，星期六，2024年，5月特异性的局限各指标与对应疾病之间：如SLE抗Sm抗体特异性99%

敏感性仅为25%RARF阳性可出现在SLE,pSS,SSc,慢性肺结核，高球蛋白血症等，5%正常人可出现低滴度的RF。第33页,共53页，星期六，2024年，5月“自相矛盾”的结果

ANA(间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性ANA(间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性（膜条法），占10%，为客观存在ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%）第34页,共53页，星期六，2024年，5月特异性指标阳性，人无相应症状健康人---一过性阳性（感染、焦虑、疲劳等），2月后复查可能转阴或者下降。貌似健康人---检测—自身抗体（微观）影像---组织表现---器官（最晚）患者---但不是自身免疫性疾病，如传染病，观察滴度变化，一般会下降自身免疫性疾病---但不是指标对应的疾病

第35页,共53页，星期六，2024年，5月

自身抗体检测结果的解释疾病标记（志）性自身抗体疾病特异性自身抗体疾病相关性自身抗体疾病非特异性自身抗体生理性自身抗体疾病前期存在检测方法及检测程序局限性检测质量:假阴性﹑假阳性解读困难第36页,共53页，星期六，2024年，5月四、常见自身抗体的检测及应用

自身抗体种类很多，这里只是简单介绍几种常见的自身抗体的检测：（1）类风湿因子（RF）（2）抗ENA抗体谱

第37页,共53页，星期六，2024年，5月类风湿因子（RF）的检测及应用RF是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体，可与人或动物的变性IgG结合，而不与正常IgG发生凝集，最多见于类风湿性关节炎患者，RF有IgM、IgG、IgA和IgE型，IgM型为主要类型。第38页,共53页，星期六，2024年，5月类风湿因子（RF）检测方法：a.胶乳凝集试验：只能定性或定量，灵敏度及特异性不变，只能检测IgM型RF。b.速率散射比浊法：定量检测，准确、快速，准确性和敏感性高于胶乳凝集试验，也只能检测IgM型RF。c.ELISA法：可检出不同Ig类型的RF。第39页,共53页，星期六，2024年，5月类风湿因子（RF）临床应用RF在RA中的阳性率为70%~８０％，是诊断RA的重要标准之一。RF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良。第40页,共53页，星期六，2024年，5月RF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性

SLE30%SS70%~90%SSc20%~30%MCTD50%~60%5%以下的正常人RF阳性不等于一定就是RARF阴性也不等于一定就不是RA第41页,共53页，星期六，2024年，5月抗ENA抗体谱

是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体的总称，它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体、抗核小体抗体、抗核糖体P-蛋白抗体、抗着丝点抗体,抗dsDNA。不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗ENA抗体，ENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊断和鉴别具有重要意义。第42页,共53页，星期六，2024年，5月抗ENA抗体谱检测方法免疫印迹法（IBT）、ELISA法、双扩散法对流免疫电流、金标法等。免疫印迹技术不需要纯化抗原，灵敏度高、特异性强、操作简单，是广泛采用检测抗ENA抗体的技术。第43页,共53页，星期六，2024年，5月临床意义nRNPSmSS-ASS-BScl-70Jo-1CENPBdsDNA核小体组蛋白核糖体P蛋白第44页,共53页，星期六，2024年，5月nRNP高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率为95-100％，抗体滴度与疾病活动性相关。在30-40％的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。第45页,共53页，星期六，2024年，5月Sm抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的特异性标志，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标，但阳性率仅为5-10％。抗Sm抗体的检测对早期,不典型的SLE或治疗后的回顾性诊断具有很大帮助。第46页,共53页，星期