LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用课件

LC-QTOF联用技术在药物杂质鉴定中的应用浙江省食品药品检验研究院化药所杨伟峰LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用杂质定义：药物化学实体之外的其他任何成分▲有机杂质（显著影响）种类：▲无机杂质（已知）▲残留溶剂（已知）LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用杂质来源杂质可以分为工艺杂质（包括合成中未反应完全的反应物及试剂、中间体、副产物等）、降解产物、从反应物及试剂中混入的杂质等。按照其毒性分类，杂质又可分为毒性杂质和普通杂质等。杂质还可按其化学结构分类，如其它甾体、其它生物碱、几何异构体、光学异构体和聚合物等。LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用起始物中间体降解物反应副产物药物质量和安全：显著影响有机杂质LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用杂质谱LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用ICHQ3A人用药物注册技术要求国际协调会（ICH）日剂量＞2g：0.05%日剂量≤2g：0.10%鉴定阈值：LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用杂质对比研究杂质对比研究是仿制药有关物质研究工作的重要环节。通过对比研究，比较试制品及被仿药品的实测结果，考察杂质种类是否一致，是否有新的杂质出现，杂质含量是否超过被仿药品，以确定后续进一步的研究工作方向。LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用杂质对比研究结果杂质谱与被仿品一致或杂质种类较被仿品少，各杂质含量也不超过被仿品，无含量超过鉴定限度的新杂质这种情况说明试制品的杂质控制达到了预期目标。LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用若通过改进工艺，杂质含量仍不能降至鉴定限度以下，则应参照杂质研究指导原则中杂质研究决策树进行后续的研究，必要时应提供杂质安全性的试验研究资料。但一般情况下，提供额外的安全性论证资料，往往不如通过改进工艺把杂质水平控制在限度值以下更为简便。LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用杂质对比研究结果杂质谱与被仿品一致或杂质种类较被仿品少，没有超过鉴定限度的新杂质，但一个或多个杂质的含量超过了被仿品这种情况下，应当通过改进完善制备工艺，降低杂质的含量。LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用杂质鉴定的难点1、杂质含量低，采用制备色谱分离纯化，所需的样品量较大。2、在分离纯化的过程中容易发生再次降解。3、由于制备色谱柱的柱效较低，有时难以得到有效分离。LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用高灵敏度高选择性不经纯化即可获得化合物信息HPLC-Q-TOF联用技术LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用头孢拉定有关物质测定1.23%未检出7-ADCA和双氢苯甘氨酸LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用时间（min）甲醇%水相%0158510158510.1307037307037.11585451585色谱柱温度：35℃；流速：0.9mL·min-1；检测波长：254nm；水相为水-2.18%醋酸铵（1564:30）用4%的醋酸调pH至4.0，进行梯度洗脱杂质XY杂质群LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用鉴定杂质X的结构头孢氨苄头孢拉定未知杂质相对丰都：19.9%、18.8%、19.7%不饱和度：10、9、8LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用偏差均小于3.6ppm杂质的裂解途径LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用Fragmentor150→200VLC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用杂质X来源分析双氢苯甘氨酸四氢苯甘氨酸苯甘氨酸LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用四氢苯甘氨酸可能的裂解途径LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用Y杂质群综合解析多一个氧原子1~5易脱水6不易脱水1、3、6为同分异构体2、4、5为同分异构体LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用解析结果LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用

HPLC-QTOF-MS联用技术鉴定盐酸吉西他滨中的未知杂质

注射用盐酸吉西他滨尚未被中国药典收载，地方试行标准以及美国药典有关物质检查项下仅对胞嘧啶及其α异构体进行控制原料药冻干粉针剂120606A120903110801111001杂质总量%0.0860.0390.150.13未知杂质含量%0.0630.0260.110.11USP方法测定结果样品溶液在24h内稳定，热破坏3h后未知杂质达3.692%LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用注射用盐酸吉西他滨LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用Q-TOF高分辨质谱结果分析Gemcitabine

Unknownimpurity多了一个O原子少了一个N原子，符合氮规则，不饱和度也未变化LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用偏差均小于17吉西他滨裂解途径LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用吉西他滨m/z112离子

胞嘧啶母离子

未知杂质m/z113离子尿嘧啶母离子

LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用注射用吉西他滨杂质吉西他滨杂质：2’-脱氧-2’，2’-二氟尿苷LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用胞嘧啶离子尿嘧啶离子偏差均小于23LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用NMR结构确证

H-HcosyLC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用dFdU来源分析胞嘧啶、六甲基二硅胺烷和硫酸铵高温回流1h在企业提供的起始原料胞嘧啶中没检查出尿嘧啶，但是在水浴2h后尿嘧啶明显增加到2.1%。来源一LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用来源二从合成过程分析，反应液先在甲醇中析晶得到粗品，再将粗品溶解于50℃超纯水中，最后于60℃的丙酮中重结晶得到盐酸吉西他滨成品，所以需要对温度、受热时间、以及充氮气是否对杂质产生影响做考察。LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法分析克拉屈滨注射液中主要杂质及其来源克拉屈滨结构式克拉屈滨为核苷类抗白血病药LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用色谱柱GraceC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为10mmol.L-1乙酸铵溶液-甲醇(80:20),柱温35℃,检测波长为265nm.以ESI为离子源,克拉屈滨注射液色谱图LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用克拉屈滨不同能量下的二级质谱图30kv30kv30kv15kvLC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用克拉屈滨杂质二级质谱图LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用克拉屈滨及其主要杂质的高分辨质谱数据Compounds[M+H]+Experimentalvalue（m/z）Theoreticalvalue（m/z）Deviation（×10-6）Cladribinefragmention123452-Chloroadeninefragmention123C10H13ClN5O3+C5H5ClN5+C5H4N5+C5H9O3+C5H7O2+C3H5O2+C5H5ClN5+C5H4N5+C4H3N4+C3H2N3+286.0722170.0240134.0463117.054399.043773.0283170.0245134.0478107.036280.0256286.0701170.0228134.0461117.054699.044173.0284170.0228134.0461107.035280.02437.37.11.52.64.01.410.011.29.316.2LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用杂质的[M+H]+峰m/z为170，为偶数，属于偶电子离子，应含奇数个氮，且离子丰度[M+1]+/[M+2]+为3:1，说明杂质中含一个氯原子，根据质谱裂解规律，并通过高分辨质量数的确证（见表1），推断出杂质为2-氯腺嘌呤。LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用分别考察克拉屈滨注射液在pH为4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0溶液及光强为4500lx,5%过氧化氢(H2O2),60℃环境中的稳定性。由降解试验推测该杂质可能是克拉屈滨在pH偏低和有氧条件下降解产生。结果表明克拉屈滨注射液在pH为6.5~8.0环境下最稳定，酸性越强，越不稳定；克拉屈滨易氧化，而受光照和温度的影响较小。LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用SynnoveLindemalm等人[6]研究了克拉屈滨在体内的代谢产物，指出代谢产物主要为本文所研究的杂质（2-氯腺嘌呤）。同时也指出克拉屈滨在低pH值时不稳定及在核苷磷酸化酶的作用下易发生去糖基反应生成2-氯腺嘌呤，其LD50与克拉屈滨一致，但未见抗肿瘤活性的报道。故在生产和储存时应特别注意溶液酸度和容器密封，必要时充氮，避免克拉屈滨降解。LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用苄达赖氨酸滴眼液76批次样品8家生产企业LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用acb杂质1LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用defLC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用gh杂质2杂质3LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用苄达酸杂质1杂质2杂质3LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用苄达酸杂质1LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用苄达酸裂解机理LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用苄达酸杂质1LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用苄达赖氨酸合成路径LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用苄达赖氨酸杂质结构LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用注射用阿洛西林钠有关物质和高聚物的分析LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用3.柱切换液质联用技术分析高聚物探索性研究1.UPLC梯度洗脱法测定有关物质2.杂质谱解析LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用中国药典2010年版新建方法方法HPLC法、等度UPLC法、梯度探索性研究---有关物质中国药典方法新建方法产品中国药典UPLC法最大单杂总杂杂质个数最大单杂总杂杂质个数A公司0.63%0.99%160.66%1.99%42B公司0.99%1.69%181.12%2.05%41LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用ⅩⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨ探索性研究---杂质谱解析UPLC法典型色谱图UPLC-MS/MS(TOF)典型总离子流图LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用ⅩⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨ杂质编号保留时间分子离子（m/z）元素组成MS/MS主要碎片Ⅰ0.5387.055C3H6N2O87.055Ⅱ1.59480.1547C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅲ2.35480.1545C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅳ4.94436.1648C19H25N5O5S218.1,246.1Ⅴ8.05476.2193C21H25N5O6S218.1,246.1Ⅵ8.87811.2535C36H42N8O10S2462.1,434.0Ⅶ9.50595.198C28H30N6O7S218.1246.1Ⅷ10.15923.2821C40H46N10O12S2218.1Ⅸ11.64764.2452C34H37N9O10S218.1,246.1Ⅹ13.76793.2433C36H40N8O9S2491.1,247.1阿洛西林裂解途径LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用杂质编号保留时间分子离子（m/z）元素组成MS/MS主要碎片Ⅰ0.5387.055C3H6N2O87.055Ⅱ1.59480.1547C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅲ2.35480.1545C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅳ4.94436.1648C19H25N5O5S218.1,246.1Ⅴ8.05476.2193C21H25N5O6S218.1,246.1Ⅵ8.87811.2535C36H42N8O10S2462.1,434.0Ⅶ9.50595.198C28H30N6O7S218.1246.1Ⅷ10.15923.2821C40H46N10O12S2218.1Ⅸ11.64764.2452C34H37N9O10S218.1,246.1Ⅹ13.76793.2433C36H40N8O9S2491.1,247.1阿洛西林裂解途径218.1246.187.1LC-Q-TOF在药物杂质鉴定中应用ⅩⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨ杂质编号保留时间分子离子（m/z）元素组成MS/MS主要碎片Ⅰ0.5387.055C3H6N2O87.055Ⅱ1.59480.1547C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅲ2.35480.1545C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅳ4.94436.1648C19H25N5O5S218.1,246.1Ⅴ8.05476.2193C21H25N5O6S218.1,246.1Ⅵ8.87811.2535C36H42N8O10S2462.1,434.0Ⅶ9.50595.198C28H30N6O7S218.1246.1Ⅷ10.15923.2821C40H46N10O12S2218