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ICS07.080A21中华人民共和国国家标准工业微生物菌株质量评价拉曼光谱法pvR国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会ⅠGB／T38569—2020本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位：中国科学院青岛生物能源与过程研究所、中国标准化研究院。本标准主要起草人：马波、籍月彤、何曰辉、李洵融、徐健、马爱进。1GB／T38569—2020工业微生物菌株质量评价拉曼光谱法本标准规定了用拉曼光谱法评价工业微生物菌株质量的方法。本标准适用于工业发酵用细菌、真菌、微藻等相对于参考菌株的质量一致性评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1利用拉曼光谱法开展工业微生物菌株质量一致性评价。3.2细胞内部化合物拉曼光谱的叠加信息可以反映该细胞的综合表型，通过比较待评价菌株与参考菌株单细胞拉曼光谱的相似性，可以判断待评价菌株是否具有与参考菌株可比较的发酵性能。5试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的二级水。按照菌种类型配制，或选用相应商品化培养基。氟化钙载玻片(25mm×75mm)。6仪器设备试验中所使用的仪器设备为：2GB／T38569—2020;b)培养箱；d)离心机。7测定步骤根据生产工艺配制工业微生物相应的固体平板和液体培养基，用无菌接种环分别蘸取参考菌株和待评价菌株的保种菌液，在固体平板上划线，根据生产工艺参数选择相应的温度等条件进行培养，直至中，根据生产工艺参数选择相应的温度和转速，培养至对数期。体培养基的容器中，根据生产工艺参数选择相应的温度和转速，培养至稳定期。7.3样品前处理释后的菌液，在洁净的氟化钙载玻片上点样，无菌环境下室温风干。7.4.1将风干后的氟化钙载玻片置于显微拉曼光谱仪载物台上，在透射式明场模式下选择单个细胞，切换至光谱采集模式，测定拉曼光谱信号。7.4.2每个样本随机选取至少20个单细胞作为样品信号。7.4.3在点样区内，采集3个无细胞处信号，并计算平均值，作为背景信号。数）和基于面积的归一化处理。数据，补充数据个数，使得待评价菌株组和参考菌株组具有相同的数据个数。8结果计算和分析8.1.1余弦距离按式(1)计算：GB／T38569—2020n式中：ii计算余弦距离的平均值和标准偏差，并以细胞数为横坐标，以变异系数为纵坐标作图，若曲线达到平台，说明细胞数已足够，若曲线未达到平台，则增加单细胞拉曼光谱采集个数，直至饱和为止。8.1.2相似度按式(2)计算：式中：R—待评价菌株和参考菌株的相似度；rr计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。

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