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抗虫玉米MIR162及其衍生品种定性PCR方法2013-12-04发布2013-12-04实施I农业部2031号公告—6—20131农业部2031号公告—6—2013本标准规定了转基因抗虫玉米MIR162转化体特异性的定性PCR检测方法。NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求农业部2031号公告—19—2013转基因植物及其产品检测抽样农业部1485号公告—4—2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化MIR162外源插入片段3'端与玉米基因组的连接区序列，包括转化载体3'端骨架序列和玉米基因4原理根据转基因抗虫玉米MIR162转化体特异性序列设计特异性引物，对试样DNA进行PCR扩增。5.4500mmol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0):称取18.6g乙二铵四乙酸二钠(EDTA-Na₂),加2zSSⅡb-F:5'-CTCCCAATCCTTTGACATCTGC-3';zSSⅡb-R:5'-TCGATTTCTCTCTTGGTGACAGGMIR162-F:5'-CCCGGGTCTAGACAATMIR162-R:5'-GCCCAGTAAAACAACTACC37.5.1.1每个试样PC终浓度水10×PCR缓冲液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)总体积“—”表示体积不确定。如果PCR缓冲液中含有氯化镁，则不加氯化镁溶液，根据TaqDNA聚合酶的浓度确定其体积，并相应调整水的体积，使反应体系总体积达到25.0μL。注：玉米内标准基因PCR检测反应体系中，上、下游引物分别为zSSIIb-F和zSSIIb-R;MIR162转体系中，上、下游引物分别为MIR162-F和MIR162-R。7.5.2对照PCR反应玉米基因组DNA作为阳性对照(或采用MIR162玉米与非转基因玉米基因组相比的拷贝数分数为4定PCR扩增的DNA片段是否为目的DNA片段。

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