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农业部2122号公告—8—2014转基因植物及其产品成分检测抗虫水稻TT51-1及其衍生品种定量PCR方法2014-07-07发布2014-08-01实施I农业部2122号公告—8—20141农业部2031号公告—19-2013转基因植物及其产品成分检测抽样2KVM159:5'-TGGTGAGCGTTTTGKVM160:5'-CTGATCCACTAGCAGGATM013:5'-TGTTGTGCTGCCAATT51-1F:5'-AGAGACTGGTGATTTT51-1R:5'-GCGTCCAGAAGGATT51-1P:5'-ATCTGCCCCAGC6.3核酸定量仪3总体积根据仪器要求，可对反应体系做适当调整。“—”表示体积不确定。根据TaqMan反应液的浓度确调整水的体积，使反应体系总体积达到25.0μL。终浓度总体积调整水的体积，使反应体系总体积达到25.0μL,4农业部2122号公告—8—20147.6数据分析7.6.1设定阈值7.6.2记录Ct值根据标准溶液的扩增Ct值和初始模板拷贝数的对数间的线性关系，分别绘制TT51-1转化体和PLD基因的标准曲线。测试样品的Ct值按式(1)计算。y——测试样品的Ct值；x——模板拷贝数以10为底数的对数；7.6.4.3标准曲线的R²≥0.98,标准曲线斜率≥-3.6且≤-3.1。当TT51-1转化体和PLD基因的Ct值小于或等于定量极限对照样品的Ct值时，按式(2)计算试样中TT51-1转化体和PLD基因的模板拷贝数。y——测试样品的Ct值；7.6.5.2试样中TT51-1转化体含量的计算按式(3)计算试样中TT51-1转化体的百分含量。C——试样中TT51-1的百分含量，单位为百分率(%);56农业部2122号公告—8—2014A.1水稻内标基因PLD基因序列(AccessionN

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