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T/CVMA162—2024Visualloop-mediatedisothermalamplificationassayfordetectionofAfricanswinefevervirus2024-5-23发布2024-5-23实施中国兽医协会发布I本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及条目6猪瘟病毒的引物组、荧光可视化快速检测试剂盒及方法》相关专12规范性引用文件NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyriboNucleicAcid）PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）26.1.4.10.01mol/L磷酸盐缓冲液的配制，6.1.4.2病毒DNA提取试剂盒、Bst2.0D6.2.2PCR管：0.2mL，7.1高速台式冷冻离心机：离心速度可达120007.2冰箱：2℃~8℃、-20℃以下及-70℃冰箱。7.3金属浴或等效控温设备：25℃~100℃。3——猪全血、血清等液体样品，可直接取1mL加入离心管中，60℃条件下灭活30min后，编号备mol/L磷酸盐缓冲液，制成组织匀浆，4℃条件下8000r/min离心5min，取上清液编号备用；——口鼻拭子、环境拭子类样品，将装有口鼻拭子、环境拭子类样品的离心管，直接60℃条件下——饲料样品，取5g，放入装有钢珠的离心管中，加入800μL的0.01mol/L磷匀浆器中充分研磨后，60℃条件下灭活30min，4℃条件下8000r/min离心5min，取上清液编号备用。采集或处理的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24h；若需长期保存，应放置-70℃冰箱，避在样本制备区内，按照商品化的病毒DNA提取试剂盒操作说明8.5.2在样品制备区额完成加样，向8.5.1步骤编号的PCR核酸、阳性对照2μL，盖紧管盖，振荡混匀后，瞬时离8.5.3在扩增区，将PCR反应管放入金属浴或等效控温设备，设置温度63℃,时间55min。试验结9结果判定45非洲猪瘟病毒B646L基因（VP72）序列（Pig/HLJ/2018株，GenBa6注1：序列来自GenBank中公布的非洲猪瘟病毒Pig/HLJ7FIP溶液（100μmol/L）BIP溶液（100μmol/L）LB溶液（100μmol/L）DEPC处理水B.20.01mol/L磷酸盐缓冲B.2.10.2mol/L磷酸二B.2.20.2mol/L磷酸氢B.2.30.01mol/L磷酸盐缓冲液（8阳性对照制备方法：人工合成非洲猪瘟病毒VP72基因片段，序列参见附录A，将VP72基因克隆到pUC57载体上，获

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