SNT 3576-2013 转基因成分检测 大豆PCR-DHPLC检测方法_第1页
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文档简介

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准转基因成分检测1转基因成分检测本标准规定了大豆中转基因成分的PCR-DHPGB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法变性高效液相色谱技术(denaturinghigh-performanceliquidchromatography,DHPLC)是一种简腈(0.025%),DHPLC缓冲液B:TEAA(0.1mol/L,pH7.0)、乙腈(25%),DHPLC缓冲液D:乙腈26DNA提取及浓度测定骤1次；e)加入等体积预冷的异丙醇，轻轻摇晃，置于-20℃冰箱静置30min,12000r/min离心f)弃上清液，加入70%乙醇500μL,12000r/min离心3min,去上清液，重复该步骤2次；DNA浓度=50×OD₂somg/mL正向引物lectin-F:5’-CGTGGCCTCGCGATCTGACTT反向引物lectin-R:5’-CTCAGCGGCGGAGCTACAGAGGTTTTGGGGTGCCGTTT-3’。正向引物CaMV35S-F:5’-CGTGGCCTCGCGATCTGAC正向引物NOS-F:5’-CGTGGCCTCGCGATCTGACTTGAATCC正向引物CP4-F:5’-CGTGGCCTCGCGATCTGACTCCCACCGGTCCTTCATGTT-3’。反向引物CP4-R:5’-CTCAGCGG反向引物RRS-R:5’-CTCAGCGGCGGAGCTACAGATGCGAAGGATAGTGGGATTGT-3’。第一组反应体系总体积为50μL,各成分分别为：多重PCR反应混合液MultiplexPCRMix第二组反应体系总体积为50μL,各成分分别为：多重PCR反应混合液MultiplexPCRMixb)打开DHPLC控制软件Navigator,在检测方法中选择DS.MultipleFragments,同时设定最大——洗脱峰为196bp,判定样本中含有外源基因CaMV35S;——洗脱峰为184bp,判定样本中含有外源基因NOS; 结果

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