芦丁中黄酮对光老化裸鼠皮肤的修复作用

芦丁中黄酮对光老化裸鼠皮肤的修复作用

摘要：目的了解芦丁中黄酮提取物所制成的乳膏用于光老化裸鼠皮肤修复的具体作用。方法比较正常组（未接受光老化处理）、模型组（光老化处理后接受生理盐水涂抹治疗）、实验组（光老化处理后接受黄酮软膏涂抹治疗）裸鼠皮肤组织中SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型胶原蛋白含量的差异，同时观察裸鼠皮肤组织形态特征。结果实验后测三组裸鼠皮肤中SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型胶原蛋白的含量均有统计学差异（均有P<0.05），其差异主要来源是实验组和正常组、实验组和模型组之间的差异。结论芦丁中黄酮提取物所制成的软膏用于光老化裸鼠的皮肤修复，有助于裸鼠皮肤组织中多种有益物质的生成，最终有助于皮肤完整性的修复过程。关键词：芦丁；黄酮；光老化；裸鼠；皮肤衰老是生物界最基本的自然规律，皮肤的衰老除了内源性原因外，紫外线辐射、吸烟、接触有害性化学物质等均为导致皮肤老化的环境因素。随着大气平流层的臭氧层的进行性破坏，人类受到短波紫外线和部分中波紫外线的暴露机会越发强烈，皮肤老化性主要表现为皮肤粗糙、皱缩、无光泽，损伤严重者会引发皮肤免疫抑制反应，甚至形成皮肤肿瘤[1]。人类和动物皮肤光老化的共同机理是机体的氧化和抗氧化功能以及氧自由基的异常增多。生物类黄酮亦称为维生素P，在自然界中广泛分布，具有多种生物活性，配合维生素C在临床上运用已久，安全性和稳定性在临床上已经获得了充分肯定[2]。为探讨芦丁中黄酮提取物用于光老化小鼠，对其皮肤的具体修复作用，本研究小组特进行了对照实验研究，现将结果汇报如下。1对象与方法1.1研究对象：为光老化裸鼠造模，去毛成裸鼠（由长沙医学院动物实验中心提供）50只。在波长为280-320的UVB灯管（北京士博科技有限公司提供）下模拟紫外线长期照射（照射距离60厘米，每天照射1次，每次60分钟，连续2周），照射期间照常喂食。1.2分组及处理：在造模裸鼠中挑选40只按照体重匹配1：1均分为模型和实验两组，分别接受如下处理。

正常组：未经过光老化处理，且不做任何处理的正常裸鼠。模型组：经过光老化处理，生理盐水涂抹治疗的裸鼠，每12小时一次，为期1周。实验组：经过光老化处理，芦丁粉末（山西云鹏制药有限公司提供）制作成的乳膏进行涂抹治疗的裸鼠，每12小时一次，为期1周。1.3芦丁乳膏制作方法：芦丁黄酮提取物与乳剂基质按照常规制备工艺制作成水包油型的外用乳膏，其芦丁黄酮质量构成比为10%左右。1.4评定指标：取样皮肤组织进行SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型胶原蛋白含量的检测（检测方法略）；同时在光学显微镜下观察裸鼠皮肤结构的变化。1.5统计分析：采用统计软件SPSSl8.0建立数据库并分析，计量资料使用（均值±标准差）形式进行统计描述，两组计量资料的比较使用t检验，多组计量资料的比较使用F检验。检验水准取0.05，双侧概率。2结果2.1实验前测三组裸鼠基本情况三组裸鼠体重均位于20-25克之间，均为月龄5个月的雌鼠，每组20只。其中正常组裸鼠体重（22.50±4.63）克、模型组裸鼠体重（23.09±4.19）克、实验组裸鼠体重（29.15±4.25）克。三组裸鼠实验初体重、皮肤组织中生物物质含量的差异均无统计学意义（均有P>0.05），资料具有可比性。2.2实验后测三组裸鼠皮肤中各生化物质表达量的比较实验后测三组裸鼠皮肤中SOD、CSH-Px、CAT、MDA、Ⅰ型胶原蛋白的含量均有统计学差异（均有P<0.05）。实验组与正常组比较，SOD、CSH-Px、CAT含量的差异有统计学意义（均有P<0.05）。实验组与模型组比较，所有指标含量的差异均有统计学意义（均有P<0.05）。表1实验后测三组裸鼠皮肤中各生化物质表达量的比较组别数量SODCSH-PxCATMDAⅠ型胶原蛋白正常组20136.66±19.62129.52±16.29312.47±40.5222.45±6.471.20±0.62模型组20101.75±16.52103.41±3.48246.33±30.4329.88±7.540.56±0.09实验组20132.09±20.44ab120.87±10.44ab276.88±24.62ab24.30±5.18b1.15±0.23bF20.08227.46420.7137.15017.068P0.000*0.000*0.000*0.002*0.000*注：*表示差异有统计学意义；a实验组与正常组比较差异显著；b实验组与模型组比较差异显著2.3实验组裸鼠皮肤结构在光学显微镜（10×50）下观察显示，模型组裸鼠皮肤的表皮明显增厚，组织结构不完整，纤维组织排列较为紊乱，大范围出现断裂现象，炎症细胞浸润明显，而皮脂腺也出现了不规则增生现象。正常组和实验组裸鼠皮肤的表皮角质较薄，组织结构完整，各层细胞清晰，真皮层纤维组织均匀的呈现为波浪状分布。3讨论近年来由于紫外线照射所致皮肤损伤成为临床研究热点，有相关报道指出，中波紫外线所致的皮肤光老化主要原因在于，刺激皮肤分泌一系列炎症因子，启动了MAPK信号通路有关。黄酮化合物的发现历史颇为悠久，早在20世纪30年代就有药物化学家证实，黄酮（维生素P）的抗坏血作用远远胜过维生素C。随着黄酮提取物生物功效的相关研究日益深入，临床中黄酮药物的应用也日趋广泛[2]。本研究结果发现，对芦丁中黄酮进行提取后所制成的软膏，能较好的改善光老化皮肤功能，主要表现在皮肤中活性物质的逐步升高。SOD、CSH-Px、CAT均为抗氧化酶，具有清除自由基的作用，这些物质含量的升高有助于丝裂原活化蛋白激酶信号转导过程的回复，从而调控细胞的增殖、分化和凋亡过程。而皮肤中MDA（丙二醛）的进行性减少也与皮肤抗氧化功能的逐步恢复密切相关。显微结构观察也发现，使用黄酮软膏的裸鼠，其皮肤完整性更好，组织结构也较为清晰，说明黄酮药物的调理作用是持久、深层次的[3]。综上，芦丁中的黄酮提取物同甘草等物质一样，对于光老化皮肤具有一定修复作用，而其疗效的优势具体是黄酮单种物质的作用效果，还是芦丁中其他生物制剂的作用，则有待进一步深入研究以考证。参考文献[1]王燕华，蔡丽敏，杨晶，等.紫外线诱导人皮肤成纤维细胞形态改变及对基质金属蛋白酶表达的影响[J].基础医学与临床，2017，（3）：360-363.[2]火万琴，杜华.光敏性皮炎的中西医研究进展[J].西北国防医学杂志，2017，（2）：