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DB21DB21/T2627—2016鱼淋巴囊肿病毒实时定量PCR检测方法Thereal-timePCRdetectionmethodforLymphocystisdiseasevirusoffish辽宁省质量技术监督局发布IDB21/T2627—2016本标准起草单位：辽宁出入境检验检疫局；山东出入境检验检疫局；大本标准主要起草人：李叶，岳志琴，杜雄伟，1DB21/T2627—2016件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用GB/T6682分析实验室用水规格和SN/T2123出入境动物检疫实验室样品采集、运输、Ct值每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历DNA脱氧核糖核酸。4仪器、耗材和试剂4.1.3高压灭菌器4.1.6生物安全柜2DB21/T2627—20164.2.8检测引物和探针，预计扩增产物82bp。正义引物P1：5’-CAAGCTATACAATCCAATT反义引物P2：5’-CAGCAGCAATACCCGG探针：5’FAM-TTCTCCTGTAATCTTTGACGGTGGAATTGCT-TAMRA-3’注：除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682后直接送实验室检测。按GB/T18088和30min或常温下1h，使其充分液化；若液化不完全，可适当再加入少量4％的NaOH；将液化后的在反应混合物配制区进行。从试剂盒中取出相应的荧光PCR反应液、Taq酶，在室温下融化后，2000r/min离心5sec。设被检样品总数为n，PCR反应体系中各成分3DB21/T2627—20162.5MgSO4(25mM)2.0将总样品反应组分充分混匀，向每个荧光PCR管中各分装15μL，在样本处理区进行。在各设定的荧光PCR管中分别加入5.3中制备的DNA溶液各10μL直接读取检测结果。阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好

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