水和鱼类中23三唑类杀菌剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICSFORMTEXT65.100.10CCSFORMTEXTG25T/FORMTEXTZNXXXXX—XXXX水和鱼类中23三唑类杀菌剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法Determinationof23triazolepesticidesresiduesinwaterandfishLC-MS-MSmethod（征求意见稿）2023-XX-XX发布2023-XX-XX实施FORMTEXT浙江省农药工业协会发布T/ZNXXXXX—XXXXI目次前言 II1范围 32规范性引用文件 33术语和定义 34方法原理 35试剂 36仪器和设备 37试样制备与保存 38分析步骤 39测定低限和回收率 3附录A 3附录B 3附录C 3附录D 3前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由浙江省农药工业协会提出。本文件由浙江省农药工业协会归口。本文件起草单位:浙江大学农药与环境毒理研究所、浙江省农业科学研究院农产品质量安全与营养研究所。本文件主要起草人:李舒盈、桂文君、蒋金花、赵学平。水和鱼类中23三唑类杀菌剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本文件规定了鱼肉和水中23种三唑类杀菌剂残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。本文件适用于鱼肉组织和水中戊唑醇、烯唑醇、粉唑醇、联苯三唑醇、己唑醇、三唑酮、苯醚甲环唑、腈苯唑、四氟醚唑、灭菌唑、苄氯三唑醇、戊菌唑、氟硅唑、氟环唑、三唑醇、腈菌唑、乙环唑、丙环唑、叶菌唑、环丙唑醇、硅氟唑、三环唑、多效唑残留量的检测和确证。本文件的方法仪器参数、色谱图、保留时间、检出限和回收率见附录A、B、C、D。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T9695.19肉与肉制品取样方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4方法原理水样中的三唑类杀菌剂残留经过滤处理，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。鱼类中的三唑类杀菌剂残留用乙腈提取，经固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。5试剂5.1除另有说明外，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。5.2乙腈：色谱纯。5.3甲醇：色谱纯。5.4氯化钠。5.5硫酸钠。5.6标准储备液的配制：分别称取20mg（精确至0.1mg）每种标准物质于10mL容量瓶中，用甲醇作为溶剂溶解并定容至刻度，标准储备液避光在0℃~4℃冰箱中可以保存12个月。5.7混合中间工作液的配制：分别准确移取一定体积的每种标准储备液，用甲醇稀释成适当浓度的混合标准中间工作液。0℃~4℃冰箱中可以保存一个月。6仪器和设备6.1超高效液相色谱-质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。6.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。6.3高速组织捣碎机：转速不低于20000r/min。6.4氮气吹干仪。6.5离心机：最大转速为4200r/min。6.6旋转蒸发仪。7试样制备与保存7.1水样试样制备与保存用磨口玻璃瓶采集水样，标明标记，将试样置于0~4℃冷藏保存。7.2鱼类试样制备与保按GB/T9695.19抽取的样品用绞肉机绞碎，充分混匀，用四分法缩分至不少于10g，作为试样，装入清洁容器内，密封后，标明标记，将试样置于-18℃以下冷冻避光保存。8分析步骤8.1提取方法水样：移取10mL试样，放入盛有1g氯化钠和4g硫酸钠的50mL离心管中，加10mL乙腈，在旋涡混合器上混合1min，静置15min后，取上清液2mL，0.22µm微孔滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱测定。鱼类：称取2g试样，放入50mL离心管中，加入20mL乙腈，用高速组织捣碎机在15000r/min均质提取30s，再用超声提取15min。在4000r/min离心3min，将提取液于40℃水浴用旋转蒸发器蒸发近干，加入5mL甲醇/水（5:95,v/v），待净化。8.2净化方法在HLB（200mg×6mL）固相萃取柱中分别加入4mL甲醇和4mL纯水进行预淋洗，将8.1待净化液加入HLB固相萃取柱中，再加入5mL甲醇/水溶液（甲醇:水=3:7，v/v）洗涤，最后用5mL甲醇/水溶液（甲醇:水=8:2,v/v）洗脱，以约1.0mL/min的流速收集洗脱流出液，于40℃水浴中旋转浓缩约至0.5mL，于35℃下氮气吹干，2mL甲醇溶解残渣，0.22µm微孔滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱测定。8.3液相色谱-串联质谱测定8.3.1液相色谱条件1)色谱柱:HSSCyano，1.8µm,100mm×2.1mm(内径)或相当者；2)柱温：40℃;3)流速：300µL/min;4)进样量：5µL5)流动相及梯度洗脱条件见表1；表1流动相及梯度洗脱条件时间/min流速/（mL/min）流动相A（0.1%甲酸水）/%流动相B（甲醇）/%0.000.3080.020.00.500.3080.020.01.000.3010.090.04.000.3010.090.04.100.3080.020.05.000.3080.020.08.3.2质谱条件1）离子源：电喷雾离子源（ESI）；2）扫描方式：正离子扫描;3）检测方式：多反应监测（MRM）;4）电喷雾电压：5500V;5）碰撞气(CAD):8psi；6）气帘气压力(CUR):25psi；7）离子源温度(TEM):350℃；8）雾化气压力(GS1):30psi；9）辅助气流速(GS2):20psi；10）监测离子对、碰撞气能量和去簇电压参见附录A8.3.3定性测定在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致，则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。本文件定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差见表2。表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%>50>20~50>10~20≤10最大允许偏差/%±10±15±20±508.3.4定量测定本文件中液相色谱-串联质谱采用外标-校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线,并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内。23种三唑类杀菌剂多反应监测（MRM）色谱图参见附录B。8.4空白试验除不称取试样外，按8.1、8.2、8.3步骤进行。8.5结果计算液相色谱-串联质谱测定水样试样中三唑类杀菌剂残留量采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果按公式(1)计算：Xi=ci×QUOTE（1）式中:Xi——试样中被测组分含量，单位为毫克每升(mg/L);ci——从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升(µg/mL);V1——样品溶液定容体积，单位为毫升(mL);V2——样品溶液所代表试样的质量，单位为毫升(mL)。注：计算结果应扣除空白值。液相色谱-串联质谱测定鱼类试样中三唑类杀菌剂残留量采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果按公式(2)计算：Xi=ci×QUOTE（2）式中:Xi——试样中被测组分含量，单位为毫克每千克(mg/kg);ci——从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升(µg/mL);V——样品溶液定容体积，单位为毫升(mL);M——样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。注：计算结果应扣除空白值。9测定低限和回收率9.1测定低限本方法中三唑类杀菌剂残留量的测定低限见附录C。9.2回收率样品的添加浓度及回收率数据见附录D。

附录A（资料性）液相色谱-串联质谱仪器参数液相色谱-串联质谱仪器参数：定性离子对、定量离子对、去簇电压(DP)、碰撞室入口电压(EP)、碰撞气能量(CE)、碰撞室出口电压(CXP)，见表A。表A23种三唑类杀菌剂监测离子对与电压参数中文名称英文名称定量离子（m/z）定性离子（m/z）去簇电压(DP)碰撞室入口电压(EP)碰撞气能量(CE)碰撞室出口电压(CXP)苯醚甲环唑Difenoconazole406.2/251.1406.2/253.148.54.425.0;25.05.0;5.0戊菌唑Penconazole284.0/159.0284.0/70.050.05.019.0;30.08.9;8.3叶菌唑Metconazole320.0/70.0320.0/125.049.05.030.0;30.00.8;8.3苄氯三唑醇Diclobutrazol328.0/70.0328.0/160.049.05.029.0;25.02.6;1.1腈菌唑Myclobutanil289.0/70.0289.0/125.012.06.5280;25.04.5;8.4氟环唑Epoxiconazole330.0/121.0330.0/101.015.06.027.0;65.56.2;11.5环丙唑醇Cyproconazole292.1/70.2292.1/125.255.05.030.0;29.010.1;8.7丙环唑Propiconazole342.1/159.1342.1/69.160.05.026.0;30.06.2;7.1灭菌唑Triticonazole318.0/70.0318.0/125.049.05.026.0;26.05.5;1.6三唑醇Triadimenol296.1/70.1296.1/227.250.05.030.0;30.09.5;7.9四氟醚唑Tetraconazole372.0/159.0372.0/70.065.05.024.0;28.03.4;7.9己唑醇Hexaconazole314.0/70.0314.0/159.042.53.025.0;28.05.4;8.1联苯三唑醇Bitertanol338.0/70.0338.0/269.050.04.522.0;22.05.4;8.1硅氟唑Simeconazole294.0/73.0294.0/70.041.53.530.0;30.07.9;11.1氟硅唑Flusilazole316.0/247.0316.0/165.049.05.022.0;25.05.4;8.1乙环唑Etaconazole328.2/159.1328.2/123.035.56.537.3;73.08.1;6.2三唑酮Triadimefon294.0/197.0294.0/225.010.06.121.1;27.08.4;5.0腈苯唑Fenbuconazole337.0/125.0337.0/70.072.05.022.0;30.08.4;5.0粉唑醇Flutriafol302.0/123.0302.0/109.042.06.025.0;25.09.2;10.1戊唑醇Tebuconazole308.0/70.0308.0/125.050.24.030.0;30.010.2;12.1三环唑Tricyclazole190.0/163.0190.0/136.045.04.525.0;25.08.7;6.8烯唑醇Diniconazole327.0/70.2327.0/159.041.25.263.8;40.09.2;9.8多效唑Paclobutrazol294.0/70.0294.0/125.045.04.530.0;30.011.4;7.8非商业性声明:附录A所列参数是使用AB5500质谱完成的，此处所列试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，使用者可尝试不同厂家和型号的仪器。

附录B（资料性）23种三唑类杀菌剂多反应监测（MRM）色谱图23种三唑类杀菌剂多反应监测（MRM）色谱图如下：

附录C（资料性）23种三唑类杀菌剂标准品保留时间和检出限表C23种三唑类杀菌标准品保留时间和检出限序号中文名称英文名称保留时间(min)检出限（µg/L）1苯醚甲环唑Difenoconazole2.300.142戊菌唑Penconazole2.250.593叶菌唑Metconazole2.280.304苄氯三唑醇Diclobutrazol2.250.285腈菌唑Myclobutanil2.220.336氟环唑Epoxiconazole2.280.427环丙唑醇Cyproconazole2.210.378丙环唑Propiconazole2.250.269灭菌唑Triticonazole2.220.7110三唑醇Triadimenol2.250.7811四氟醚唑Tetraconazole2.250.4712己唑醇Hexaconazole2.240.1813联苯三唑醇Bitertanol2.260.1814硅氟唑Simeconazole2.200.4515氟硅唑Flusilazole2.251.4416乙环唑Etaconazole2.221.9517三唑酮Triadimefon2.230.4718腈苯唑Fenbuconazole2.290.3519粉唑醇Flutriafol2.130.5820戊唑醇Tebuconazole2.270.3221三环唑Tricyclazole2.120.2222烯唑醇Diniconazole2.280.1523多效唑Paclobutrazol2.190.37

附录D（资料性）23种三唑类杀菌剂的添加回收率表D23种三唑类杀菌剂的添加回收率序号中文名称英文名称添加水平鱼肉水样AveRSD%AveRSD%1苯醚甲环唑Difenoconazole0.00584.64.190.82.30.0190.78.6101.19.80.05100.29.5111.28.82戊菌唑Penconazole0.00582.19.988.55.30.0196.19.1737.80.05100.53.992.27.43叶菌唑Metconazole0.00575.16.076.84.20.0179.66.4107.45.70.0593.99.497.610.74苄氯三唑醇Diclobutrazol0.00586.37.6103.74.80.0184.710.398.55.20.0590.78.293.54.55腈菌唑Myclobutanil0.00578.63.891.83.70.0195.34.6102.27.80.0595.43.7113.27.46氟环唑Epoxiconazole0.00584.08.979.29.50.01100.28.083.84.80.0591.04.2108.85.57环丙唑醇Cyproconazole0.00590.69.373.53.70.0185.76.893.24.30.0593.25.797.510.88丙环唑Propiconazole0.00574.810.892.610.70.0174.39.9106.26.30.05101.44.7110.75.19灭菌唑Triticonazole0.00573.710.277.96.50.0185.53.9115.610.80.0599.34.786.43.610三唑醇Triadimenol0.00593.56.078.75.60.0176.73.5108.58.00.0586.67.9101.18.611四氟醚唑Tetraconazole0.00586.65.399.710.40.0187.13.488.47.90.0595.74.1111.65.312己唑醇Hexaconazole0.00587.611.073.76.00.0184.96.976.15.50.0596.410.680.18.113联苯三唑醇Bitertanol0.00575.710.373.67.00.0181.8