产前实验室技术课件

一、产前实验室相关技术二、唐氏筛查申请单填写注意事项三、我们实验室开展的项目第1页/共47页产前实验室相关技术卫生部《产前诊断技术管理办法》要求：产前诊断实验室能够开展：①生化免疫；②细胞遗传；③分子遗传具体包括：唐氏筛查染色体核型分析羊水细胞培养染色体分析脐带血染色体核型分析绒毛染色体核型分析分子遗传学基因诊断荧光原位杂交

无创染色体非整倍体产前检测第2页/共47页1、唐氏筛查可筛查：①唐氏综合征（21-三体综合征）②18-三体综合征③开放性神经管缺陷第3页/共47页（1）实验室检测的母体血清标记物方案，

选择下列任一种：

a)二联法：血清甲胎蛋白（AFP）+血清人绒毛膜促性腺激素游离β亚基（Freeβ-HCG）或者AFP+血清人绒毛膜促性腺激素（HCG）

b)三联法：AFP+Freeβ-HCG+血清游离雌三醇（uE3）或者AFP+HCG+uE3或者AFP+Freeβ-HCG+抑制素A（InH-A）c)四联法：AFP+Freeβ-HCG+uE3+InH-A或者AFP+HCG+uE3+InH-A中孕期母血清学产前筛查标准第4页/共47页（2）结果的判别

筛查结果分为高风险和低风险：

a)唐氏综合征筛查结果可采用1/270为阳性切割值（临界值），即筛查结果风险率≧1/270者为高风险妊娠；b)18-三体综合征筛查结果可采用1/350为阳性切割值，筛查结果风险率≧1/350者为高风险妊娠；c)开放性神经管缺陷宜以母血清AFP≧，为阳性切割值，筛查结果AFP≧者为高风险妊娠。第5页/共47页（3）产前筛查的检出率要求二联法：T21≧60%假阳性率＜8%T18≧80%假阳性率＜5%ONTD≧85%假阳性率＜5%

三联法：T21≧70%假阳性率＜5%T18≧85%假阳性率＜5%ONTD≧85%假阳性率＜5%四联法：T21≧80%假阳性率＜5%T18≧85%假阳性率＜1%ONTD≧85%假阳性率＜5%第6页/共47页时间分辨荧光免疫法时间分辨荧光免疫测定：是一种非同位素免疫分析技术。用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨。特异性好。发光时间长。由于蛋白质等本底物质所发出的荧光发光时间较短，因此可以通过延长时间去除本底干扰，提高准确性。稳定。第7页/共47页抽母体外周血，检测AFP、

β-hCG、uE3，结合孕妇年龄、孕周、等信息，评估孕唐氏儿的风险值。时间分辨荧光免疫分析仪、三联筛查假阳性率小于5%时，检出率70%（4）我院的检测方法第8页/共47页筛查出的高风险孕妇需要进一步诊断。21-三体高风险18-三体高风险羊水穿刺染色体核型分析NTD高风险超声诊断第9页/共47页2、细胞遗传学检查染色体检查、染色体核型分析取样方法绒毛穿刺取样羊膜腔穿刺取样脐带血穿刺取样外周血取样产前诊断第10页/共47页有自然流产史、死胎、葡萄胎、女性原发不孕、继发不孕的夫妇；生过遗传病患儿及先天畸形患儿的父母；男性少精、弱精、畸精、死精症及婚后不明原因不育的夫妇；两性畸形及性器官发育异常的患者；原发闭经、继发闭经的妇女；染色体异常的患者及患者的父母和同胞；染色体检查适应证：

第11页/共47页原因不明的智力低下及生长发育迟缓的患者；本人及家系成员患有某种遗传疾病或先天畸形的患者；未婚青年的相恋对方或其家属患有某种遗传病或先天畸形的患者；长期接触不良环境因素的婚龄、育龄的男女青年；常规检查或常见遗传病筛查发现异常者；青年男女的婚（孕）前检查与咨询。第12页/共47页A：正常二倍体细胞核内有2个21号染色体信号B：21-三体患者细胞核内有3个21号染色体信号3、荧光原位杂交

以21号染色体的相应片段序列作探针，进行原位杂交，可快速、准确进行诊断。

21-三体综合征患儿的细胞中呈现3个21号染色体的荧光信号。第13页/共47页FISH具有其不可比拟的优点：1.操作简便，探针标记后稳定，一次标记后可使用二年。2.方法敏感，能迅速得到结果。3.在同一标本上，可同时杂交几种不同探针。4.不仅可用于分裂细胞染色体数量或结构变化的研究，而且还可用于静止期细胞的染色体数量及基因改变的研究。目前羊水FISH产前诊断：可快速诊断胎儿13、18、21、X、Y染色体数目的异常。第14页/共47页4、无创染色体非整倍体产前检测母体外周血含有的cffDNA，几乎全部来源于胎盘滋养层细胞怀孕4周可检出，8周后含量上升并稳定存在母体外周血中的cffDNA含量在5%-50%之间。孕周越大外周血中胚胎DNA的含量越高胎儿游离DNA：cell-freefetalDNA（cffDNA）Lancet.1997第15页/共47页无创：10ml外周血，无须空腹风险小：无流产、感染风险孕12周以上即可检测DNA水平检测，准确率99%以上检测周期短，10个工作日出检测结果无创DNA产前检测技术与传统诊断技术相比具有如下优势：第16页/共47页嵌合体和多胎目前不能检影响因素：孕妇染色体异常孕妇近期接受过异体输血、移植手术、干细胞治疗胎儿其他染色体异常样本自然溶血或因个体差异造成的cffDNA含量过低孕周计算不准确抽血时孕妇体重超过100kg局限性和风险：第17页/共47页一、产前实验室相关技术二、唐氏筛查申请单填写注意事项三、我们实验室开展的项目第18页/共47页唐氏筛查申请单填写项目中孕期唐氏综合征血清学筛查检测的孕周范围为15-20周6天，早孕期唐氏筛查检测的孕周范围为9-13周6天。请开单医生严格把关。孕妇的电话号码一定要如实填写，以便核实信息、高风险通知和日后随访。采血日期应填写采血当日日期（公历）。出生日期应为孕妇的实际出生日期（公历）。如农历生日应换算成公历后再填写或在申请单上清晰标注。第19页/共47页体重单位为公斤，填写时需注意。唐氏筛查风险评估软件中体重的检测范围为40-120公斤，如不在此范围内，将按最接近的临界值计算（如孕妇体重为38公斤，软件将按40公斤计算），因此在采样时须告知孕妇，得到知情同意后方可送检，并在申请单上标注。体重可以对孕妇血清中AFP，free-βhCG，uE3三个指标进行校正，以避免因体重的增加，使其在血液中浓度降低。唐氏筛查的风险评估软件默认规则的月经周期为28-30天，超出此范围均为不规则，不能应用末次月经来推算孕周，因此必须提供一份超声信息。单双胎必须填写。因为如为双胎，血清学指标会较单胎时偏，因此高风险评估软件会对结果进行校正。（从2013年4月7日开始，我中心不再对双胎做中期筛查）第20页/共47页怀孕方式应注明自然怀孕或辅助生殖，如为IVF，应填写取卵日期和植入日期，并提供超声信息。软件同样会进行校正。每一位受检孕妇均应提供一份超声信息，超声信息以孕早期超声头臀长（CRL）为最佳，如没有孕早期超声，至少应提供一份包括胎儿双顶径数值（BPD）或超声当日提示孕周，二者至少应有一项的超声结果，并注明超声日期。怀孕过程中是否有阴道流血的现象应如实填写，请开单医生在问诊时注意。异常妊娠史主要包括不明原因流产、死胎等现象。如孕妇曾生育过21-三体综合征、18-三体综合征，应直接建议孕妇做产前诊断，不建议做唐氏筛查。如孕妇特别要求，应交代清楚后再送检，并在申请单上标注清楚。第21页/共47页胰岛素依赖型糖尿病及吸烟史应如实填写，且为必填项目。因为有胰岛素依赖型糖尿病病史的孕妇血清中hAFP低10%；uE3低7%；freehCGb低11%。而吸烟的孕妇血清中free-βhCG较正常孕妇降低3%，AFP较正常升高3%。“中孕期母血清学产前筛查知情同意书”应按照知情选择、孕妇自愿的原则，医务人员应事先告知孕妇或其家属产前筛查的性质，孕妇及医生同时签字，不可由他人代签。年龄在35岁及35岁以上的孕妇，建议直接做遗传咨询。第22页/共47页第23页/共47页第24页/共47页第25页/共47页第26页/共47页第27页/共47页一、产前实验室相关技术二、唐氏筛查申请单填写注意事项三、我们实验室开展的项目第28页/共47页早孕期唐氏筛查中孕期唐氏筛查羊水细胞培养染色体产前诊断脐带血细胞培养染色体产前诊断外周血染色体核型分析羊水荧光原位杂交（FISH）产前诊断流产绒毛组织荧光原位杂交（FISH）先天性心脏病FISH产前诊断开展项目第29页/共47页早孕期筛查：（1）血清学筛查，是在孕9-13周6天进行，抽血检测孕妇血清中生化指标（PAPP-A和Free-βhCG），结合孕妇的年龄、体重、孕周等进行综合风险评估，得出胎儿患21-三体、18-三体综合征的风险。（2）一站式筛查，是在孕11周-13周6天做超声NT扫描，确定孕周在11周-13周6天内，然后抽血进行早孕期血清学指标检测，将NT指标与血清学指标、孕妇年龄、体重、采血日期等进行结合，评估胎儿罹患21-三体、18-三体的风险。第30页/共47页早孕期筛查的优势：（1）早孕期筛查把产前筛查的孕周窗提前，使孕妇更早掌握胎儿罹患21-三体、18-三体的风险，尽早进行相关产前诊断。（2）早孕期筛查还可以与中孕期筛查进行整合，提高21-三体、18-三体的检出率。第31页/共47页流产绒毛组织FISH快速检测发生率：50%以上的早期流产是由胚胎染色体异常引起，且大多数为染色体数目异常。原理：FISH快速检测使用13、16、18、21、22、X、Y探针，检测7个染色体的非整倍体。检测：取流产绒毛组织少许，浸泡生理盐水中送到产前诊断中心4楼前台，进行荧光原位杂交检测。第32页/共47页先天性心脏病FISH产前诊断发生率：活产婴儿中占8‰，每年新增15-20万例。原因：遗传因素——心脏调节基因的遗传突变。环境因素——药物、感染、母亲患病等。检测：妊娠11-14周进行B超检查，测量胎儿颈背透明带厚度。中期18-22周用胎儿超声心动图检测。

22q11荧光原位杂交检测。第33页/共47页

22q11荧光原位杂交检测第34页/共47页合作开展项目1、无创染色体非整倍体产前检测项目2、Array-CGH技术项目3、单基因遗传病检测项目第35页/共47页1.无创染色体非整倍体产前检测可筛查13、18、21染色体三倍体（发报告）还可观测到其他染色体的非整倍体异常（口头通知）检出率可达99%有专家建议：可以代替产前筛查的精密筛查项目提示：可供孕妇及其家属选择，但费用高。第36页/共47页2.Array-CGH技术第37页/共47页Array-CGH技术

应用于羊水细胞检测，是一种产前诊断技术。第38页/共47页Array-CGH技术原理与流程第39页/共47页第40页/共47页第41页/共47页第42页/共47页第43页/共47页3.单基因遗传病检测关键：找到先证者；查夫妻双方为携带者，可以指导下一胎生育。第44页/共47页目前开展700多种遗传疾病的诊断。成功案例：一夫妻