朝鲜淫羊藿中性多糖与酸性多糖的理化特征 及抗氧化活性的比较

背景介绍朝鲜淫羊藿是小蘖科淫羊藿属植物，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿等多种药理作用，是《中国药典》2020年版中淫羊藿的主要来源之一。淫羊藿中含有多种化学成分，迄今已经有270多种化学成分被鉴定。目前对淫羊藿的研究多集中于黄酮类成分，而多糖作为淫羊藿的主要活性成分研究相对较少。多糖是中药中普遍存在的一类高分子物质，具有抗凝和溶栓、抑菌、免疫调节、抗氧化、神经保护、抗肿瘤等多种生物学功能。多糖结构复杂，其生物活性与其糖含量、电荷、单糖组成、分子量分布等特征密切相关，而不同的提取、分离纯化方法获得的多糖其理化性质、结构特征也存在差异。许多活性多糖都由均多糖和杂多糖构成总多糖，总多糖通过分级洗脱可得到中性多糖和酸性多糖组分。文章亮点1.采用水提醇沉法获得朝鲜淫羊藿粗多糖，通过除蛋白，经DEAE-52纤维素色谱柱(0.5mol/LNaCl溶液洗脱)，得到中性多糖(EFPN)和酸性多糖(EFPA)。2.

EFPN在清除自由基、金属离子螯合和还原能力方面IC50值均高于EFPA，EFPN提高了小鼠血清与肝脏中酶活性且抗氧化活性较好，是天然抗氧化剂的良好来源。内容简介1

实验部分1.1

主要仪器与试剂1.2

方法1.2.1

多糖的提取纯化与理化性质1.2.1.1

提取纯化1.2.1.2

糖含量测定1.2.1.3

蛋白含量测定1.2.1.4

单糖组成测定1.2.1.5

分子量测定1.2.2

体外抗氧化活性1.2.2.1

清除羟基自由基能力1.2.2.2

清除DPPH自由基能力1.2.2.3

螯合金属离子能力1.2.2.4

还原能力(FRAP)1.2.3

体内抗氧化活性1.2.3.1

模型的建立1.2.3.2

酶活力检测2

结果与讨论2.1

多糖的提取纯化与理化性质测定2.2

体外抗氧化活性测定2.2.1

羟基自由基的清除作用朝鲜淫羊藿多糖对羟基自由基清除率随其浓度的变化趋势得知：EFPN在1～5mg/mL范围内对羟基自由基的清除率呈剂量依赖性升高，5mg/mL时清除率达到最大值，为58.22%，EFPN的IC50值为0.45mg/mL；在同样浓度下，EFPA的抑制率为43.14%，EFPA的IC50值为0.58mg/mL，说明EFPN的清除能力明显优于EFPA，且两者的清除作用均低于阳性对照VC，IC50值为0.43mg/mL，结果见图3。2.2.2

DPPH自由基的清除作用2.2.3

金属离子螯合能力的测定2.2.4

还原能力（FRAP）的测定硫酸亚铁

(FeSO4)标准曲线如图6所示2.3

朝鲜淫羊藿活性多糖的体内抗氧化活性3

结论本实验以朝鲜淫羊藿为原料，水提醇沉获得粗多糖EFPC，分离纯化得到中性多糖EFPN和酸性多糖EFPA。单糖组成结果表明EFPC一种复杂的酸性杂多糖，EFPN和EFPA均是由5种单糖组成，分别为甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、半乳糖(Gal)和葡萄糖(Glc)，其物质的量比为0.6∶1.0∶1.4∶1.6∶1.7；甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、葡萄糖醛酸(GlcA)和阿拉伯糖(Ara)，其物质的量比为1.7∶7.4∶1.4∶1.8∶1.0。同同时测定了EFPN和EFPA的分子量，其分布范围分别为1.5×104

Da～1.4×105

Da与2.5×104

Da～9.8×104

Da。本研究通过体外氧化活性试验发现，两种多糖均有一定的自由基的清除能力，金属离子螯合能力以及还原能力，且在相同的质量浓度下，EFPN的抗氧化活性要优于EFPA，这可能与其结构包括单糖组成、所带电荷、分子量的不同相关。体内抗氧化活性试验中，EFPN可显著增强小鼠血清、肝脏内的SOD、CAT、GSH-Px、T-AOC的酶活力并降低MDA的水平，体现出了明显的抗氧化能力。EFPN给药组与提高衰老小鼠血清和肝脏中SOD、CAT、GSH-Px、T-AOC活性呈显著正相关性；与降低小鼠血清和肝脏中MDA含量呈显著负相关性，表明EFPN可以通过提高机体和细胞内抗氧化酶活力和减弱过氧化产物来完成抗氧化作用。依据《抗氧化功能评价方法》中结果判定动物实验中脂质化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质4项指标中3项呈阳性，判定EFPN抗氧化功能动物实验结果呈阳性，其具有