GB/T 41716-2022 漆树中主要有效成分含量的测定 高效液相色谱法（正式版）

ICS65.020漆树中主要有效成分含量的测定高效液相色谱法国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会IGB/T41716—2022本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由国家林业和草原局提出。本文件由全国林化产品标准化技术委员会(SAC/TC558)归口。内得农业科技有限公司。1GB/T41716—2022漆树中主要有效成分含量的测定高效液相色谱法本文件描述了高效液相色谱法测定漆树中主要有效成分含量的方法。和漆酚)和黄酮(黄颜木素、漆黄素、硫黄菊素和紫铆花素)化合物单个或多个组分含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T36055林业生物质原料分析方法含水率的测定3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1饱和漆酚saturatedurushiol漆酚分子侧链脂肪烷烃中不含有碳碳双键的漆酚分子化合物。3.2单不饱和漆酚monounsaturatedurushiol漆酚分子侧链脂肪烷烃中具有一个碳碳双键的漆酚分子化合物。3.3二不饱和漆酚diunsaturatedurushiol漆酚分子侧链脂肪烷烃中具有二个碳碳双键的漆酚分子化合物。3.4三不饱和漆酚triunsaturatedurushiol漆酚分子侧链脂肪烷烃中具有三个碳碳双键的漆酚分子化合物。4原理在同一个分析周期内，按一定时间程序调节流动相配比，使漆树中主要有效成分按各自适宜的容量黄素、硫黄菊素和紫铆花素在特定波长下有最大紫外吸收，在其对应波长条件下进行检测，并用标准物质外标法直接定量分析。2GB/T41716—20225.8漆树漆酚标准工作溶液：分别吸取适量的5.6中各漆树漆酚标准储备溶液配制质量浓度为5.9漆树黄酮标准工作溶液：分别吸取适量的5.7中各漆树黄酮标准储备溶液配制质量浓度为7样品将漆树不同部位的原料在40℃经真空干燥箱干燥处理后，含水率不应超过5%,按照GB/T36055称取漆树样品5.0g于250mL圆底烧瓶中，加100mL无水乙醇常温下浸泡3h,过滤，滤液在350℃下用旋转蒸发仪减压回收溶剂，所得提取物用150mL三氯甲烷-水(体积比3:1)溶液萃取3次，收集三氯甲烷层，用旋转蒸发仪减压回收溶剂后，所得漆树漆酚提取物样品浸膏用适量甲醇溶解并定容于25mL容量瓶中，摇匀后即得漆树漆酚的样品溶液。7.2.2漆树黄酮样品溶液的制备称取漆树样品5.0g于250mL圆底烧瓶中，加100mL无水乙醇，80℃(或根据实际大气压设定温度为保持溶剂微沸即可)下，提取3次，每次1h;过滤，合并滤液，在50℃下用旋转蒸发仪减压回收溶剂，所得提取物先用其10倍质量的乙酸乙酯溶液萃取，然后再用同体积的水进行反向萃取，整个萃取过程重复3次，收集乙酸乙酯层，用旋转蒸发仪减压回收溶剂后，所得漆树黄酮提取物样品用适量甲醇溶解并定容于25mL容量瓶中，摇匀后即得漆树黄酮的样品溶液。8试验步骤8.1高效液相色谱参考条件8.1.1漆树漆酚高效液相色谱参考条件漆树漆酚高效液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：C₁g,250mm×4.6mm(内径),粒径5μm,或柱效相当者；b)流动相：乙腈-水(体积比91:9);8.1.2漆树黄酮高效液相色谱参考条件漆树黄酮高效液相色谱参考条件如下：b)流动相：甲醇(A)-0.5%醋酸水溶液(B),采用梯度洗脱，1min～10min,65%B;10min~25min,50%B;25min～50min,25%B;50min～60min,10%B;60min～65min,65%B;e)检测波长：278nm(黄颜木素)、248nm(漆黄素)、257nm(硫黄菊素)和261nm(紫铆花素);8.2标准曲线的制作8.2.1漆树漆酚标准曲线分别向高效液相色谱柱中注入质量浓度为0mg/mL、0.10mg/mL、0.50mg/mL、1.00mg/mL、1.50mg/mL、2.00mg/mL的饱和漆酚、单不饱和漆酚、二不饱和漆酚和三不饱和漆酚的标准工作溶液，在8.1.1色谱条件下得到相应色谱峰面积，以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线。饱和漆酚、单不饱和漆酚、二不饱和漆酚和三不饱和漆酚的标准样品溶液(2.00mg/mL)的高效液相色谱图参见附录A中图A.1,其标准样品信息表参见表A.1。4GB/T41716—20228.2.2漆树黄酮标准曲线分别向高效液相色谱柱中注入质量浓度为0mg/mL、0.10mg/mL、0.50mg/mL、1.00mg/mL、1.50mg/mL、2.00mg/mL的黄颜木素、漆黄素、硫黄菊素和紫铆花素的标准工作溶液，在8.1.2色谱条件下得到相应色谱峰面积，以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线。黄颜木素、漆黄素、硫黄菊素和紫铆花素的标准样品溶液(2.00mg/mL)的高效液相色谱图参见附录A中图A.2,其标准样品信息表参见8.3样品溶液的测定对同一样品平行做两份试验。取待测样品溶液(7.2.1或7.2.2)中的样品溶液，经过0.22μm滤膜硫黄菊素和紫铆花素的浓度。8.4空白实验以相同体积的甲醇，采用与8.3中相同的测定步骤进行测定。9试验数据处理紫铆花素含量利用数据处理系统计算或按式(1)计算。式中：铆花素和硫黄菊素的含量，单位为毫克每克(mg/g);铆花素和硫黄菊素的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);V——试验样品的定容体积，单位为毫升(mL);测定结果以平行测定的算术平均值表示，计算结果保留至小数点后两位。10精密度在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。11注意事项样品吸收峰应在漆树漆酚和黄酮标准曲线的校准范围内，若待测样品溶液的吸收峰高于2.00mg/mL质量浓度的标准工作溶液的吸收峰，则应稀释样品溶液进行测定。另外，液相色谱操作推荐使用如上参考条件，但可以根据实际情况适当调节以达到最佳分离效果。5GB/T41716—202212试验报告试验报告应包括以下项目：c)所使用的试验方法；d)试验结果；e)试验中观察到的异常现象；6标准样品溶液的高效液相色谱图时间/min 7表A.1漆树漆酚标准样品信息表化合物种类检测波长/nm参考出峰时间/min结构式三