动物实验基本技术专家讲座

动物试验基本技术1动物实验基本技术第1页试验动物抓取与固定试验动物分组与标识试验动物被毛去除方法试验动物给药试验动物麻醉试验动物取血试验动物处死动物试验基本技术2动物实验基本技术第2页一、试验动物抓取与固定目标：暴露手术操作部位小鼠抓取保定大鼠抓取保定豚鼠抓取保定家兔抓取保定3动物实验基本技术第3页1.小鼠抓取保定抓取：右手抓住鼠尾并提起，把小鼠置于笼盖或其它粗糙面上，向后方轻拉左手拇指和食指捏住其两耳和颈部皮肤右手拉紧小鼠尾部，拉直鼠身，左手无名指和小指压紧尾巴和后肢，中指和手掌心夹住背部皮肤，使小鼠呈一直线保定：四肢及门牙用棉线固定在解剖台上4动物实验基本技术第4页1.小鼠抓取保定抓取：右手抓住鼠尾并提起，把小鼠置于笼盖或其它粗糙面上，向后方轻拉左手拇指和食指捏住其两耳和颈部皮肤右手拉紧小鼠尾部，拉直鼠身，左手无名指和小指压紧尾巴和后肢，中指和手掌心夹住背部皮肤，使小鼠呈一直线保定：四肢及门牙用棉线固定在解剖台上5动物实验基本技术第5页2.大鼠抓取保定抓取：基本同小鼠右手抓住鼠尾并提起，把大鼠置于笼盖或其它粗糙面上，向后方轻拉左手次序按卡大鼠背部，稍加压力向头部滑行，拇指和食指捏住其两耳和颈部皮肤右手拉紧大鼠尾部，拉直鼠身，左手其余三指固定背部皮肤在大鱼际肌上保定：同小鼠6动物实验基本技术第6页3.豚鼠抓取保定抓取：左手轻轻扣、按住豚鼠背部，顺势抓住其肩胛上方皮肤，拇指和食指环握颈部右手托住其臀部抓取时必须快、准、稳、柔7动物实验基本技术第7页4.家兔抓取保定抓取：右手抓住颈背部皮肤，提起家兔左手托住其臀部保定：四肢和门牙固定在手术台上，其中前肢是交叉固定。8动物实验基本技术第8页4.家兔抓取保定抓取：右手抓住颈背部皮肤，提起家兔左手托住其臀部保定：四肢和门牙固定在手术台上，其中前肢是交叉固定。9动物实验基本技术第9页二、试验动物分组与标识1.分组：分组标准--随机分组每只动物都有同等机会被分配到各个试验组中去，防止人为原因对试验造成影响。建立对照组10动物实验基本技术第10页分组标准--随机分组(1)完全随机分组：将全部动物编号从随机数表中任取一段随机数字，给各个动物依次配号按所配数字奇偶（两组）或除以组数后余数（两组以上）作为归入组次分组最终随机调整，使各组动物数到达均等11动物实验基本技术第11页完全随机分组--如小鼠20只，分甲、乙两组小鼠编为1号～20号随机数表中取出20个随机数依次分配给1～20号动物设单数为甲组，双数为乙组（下表），结果甲组9只，乙组11只动物编号1234567891011121314151617181920随机数0347437386369647366168343013705574307712组别甲甲甲甲乙乙乙甲乙甲乙乙乙甲乙甲乙乙甲乙分组标准--随机分组(1)12动物实验基本技术第12页完全随机分组--如小鼠20只，分甲、乙两组小鼠编为1号～20号随机数表中取出20个随机数依次分配给1～20号动物设单数为甲组，双数为乙组（表1-3-2），结果甲组9只，乙组11只再查随机数表第21个数为13，将13÷11＝1余2。则将乙组中第二位（6号动物）取出给甲组。若差数﹥2，可依次法调整直至两组动物数相等。分组标准--随机分组(1)13动物实验基本技术第13页简化随机分组--实际工作中从随机数表中任一数字开始次序取数，把取得随机数除以组数，将所得余数作为这一轮开始分配组次，从该组开始次序分配一只再取下一个随机数，除以组数，所得余数作为下一轮分配开始组次，次序分配每组一只，直到分完为止。分组标准--随机分组(2)14动物实验基本技术第14页空白对照--不加任何处理，排除动物本身影响试验对照--试验条件对照标准对照--标准值对照（阳性对照）本身对照--本身前后对照相互对照--各试验组相互对照建立对照组15动物实验基本技术第15页目标--将同种动物进行区分，方便于观察。要求--编号方法不对动物生理或试验反应产生影响，且号码清楚、易认和耐久。惯用方法：染色法耳孔法烙印法挂牌法2.标识编号16动物实验基本技术第16页用化学药品在试验动物身体显著部位涂染，以染色部位、颜色标识区分试验动物。缺点：长时间使用，染色剂会自行褪色，需不停补充和加深染色--慢性试验不适用染色剂毒性对试验动物影响适用动物--大、小鼠染色法17动物实验基本技术第17页3%～5%苦味酸，染成黄色0.5%中性红或品红溶液，染成红色2%硝酸银溶液，染成咖啡色煤焦油酒精溶液，染成黑色染色法--惯用染色剂18动物实验基本技术第18页单色涂染法：单一颜色染色剂涂染涂染次序：从左到右，从上到下适合用于每组试验动物不超出10只染色法--染色方法19动物实验基本技术第19页双色涂染法：两种颜色同时染色标识，一个标识为个位数，另一个标识为十位数涂染方法同单色涂染法可标识100位以内号码直接标号法：染色剂直接在试验动物身上编写号码试验动物太小或号码位数太多不宜染色法--染色方法20动物实验基本技术第20页用打孔机直接在试验动物耳朵上打孔编号，依据打在动物耳朵上部位和孔多少来区分试验动物。打孔后须用消毒过滑石粉抹在打孔局部，以免伤口愈合将耳孔闭合。也可用剪刀在试验动物耳廓上剪缺口方法来区分试验动物。适用动物--家兔耳孔法21动物实验基本技术第21页用打孔机直接在试验动物耳朵上打孔编号，依据打在动物耳朵上部位和孔多少来区分试验动物。打孔后须用消毒过滑石粉抹在打孔局部，以免伤口愈合将耳孔闭合。也可用剪刀在试验动物耳廓上剪缺口方法来区分试验动物。适用动物--家兔耳孔法22动物实验基本技术第22页直接把标识编号烙印在试验动物身上，如盖印章一样，用来区分试验动物。适用动物--犬烙印法23动物实验基本技术第23页将编好号码烙印在金属牌上，挂在试验动物颈部、耳部、肢体或笼具上，用来区分试验动物。适用动物--犬、猴和猫挂牌法24动物实验基本技术第24页三、试验动物被毛去除方法目标：去除试验操作局部被毛，可防止影响试验操作和观察。惯用被毛去除方法：拔毛法剪毛法剃毛法脱毛法25动物实验基本技术第25页1.拔毛法方法：固定动物后，用食指和拇指将暴露部位毛拔去。优点：刺激局部组织产生扩张血管作用采取部位：血管暴露，进行采血或动、静脉穿刺，如兔耳缘静脉、鼠尾静脉采血26动物实验基本技术第26页2.剪毛法方法：固定动物后，用水湿润局部被毛，绷紧局部皮肤，用剪刀紧贴皮肤表面剪去被毛。采取部位：皮肤暴露，进行手术操作需要，如兔和犬颈部手术，兔胸、腹部手术注意：剪毛过程中不可提起被毛剪下被毛应及时清理27动物实验基本技术第27页3.剃毛法方法：固定动物后，用刷子蘸温肥皂水将局部被毛湿润，用剪毛法剪去被毛，然后用剃毛刀逆被毛生长方向剃去残余被毛。采取部位：皮肤暴露，大动物手术区域皮肤术前准备注意：剃毛时必须绷紧局部皮肤28动物实验基本技术第28页4.脱毛法方法：剪去局部被毛，用镊子夹棉球或纱布蘸脱毛剂涂抹在已剪去被毛部位，35min后用温水洗去脱下毛和脱毛剂，用干纱布擦干后涂上一层油脂。采取部位：皮肤暴露，如大动物无菌手术、局部皮肤刺激性试验和局部血液循环惯用脱毛剂：(鼠和兔用1、2，犬用3)配方1：硫化钠8g溶于100ml水中配方2：硫化钠:肥皂粉:淀粉为3:1:7，加水成糊状配方3：硫化钠10g和生石灰15g溶于100ml水中29动物实验基本技术第29页四、试验动物给药灌胃皮下注射静脉注射腹腔注射30动物实验基本技术第30页1.灌胃准备：连接灌胃针注射器吸入待灌药液31动物实验基本技术第31页1.灌胃准备：连接灌胃针注射器吸入待灌药液过程：一手固定动物，并使体位为头高位一手持注射器，将灌胃针从动物口角插入，并紧贴上腭，经咽后壁插入至预定深度深度：小鼠3cm，大鼠5cm灌胃量：小鼠0.01～0.03ml/g，大鼠0.01～0.02ml/g

32动物实验基本技术第32页1.灌胃准备：连接灌胃针注射器吸入待灌药液过程：一手固定动物，并使体位为头高位一手持注射器，将灌胃针从动物口角插入，并紧贴上腭，经咽后壁插入至预定深度深度：小鼠3cm，大鼠5cm灌胃量：小鼠0.01～0.03ml/g，大鼠0.01～0.02ml/g

33动物实验基本技术第33页2.皮下注射准备：注射器吸入待注射药液过程：局部皮肤消毒（背部）一手拇指和中指将背部皮肤提起，食指轻按其皮肤，使其形成一个三角小窝一手持注射器从三角窝下部刺入皮下，轻轻摆动针头，易摇动表明针尖在皮下，回抽无血后注入药液拔针时左手捏住针刺部位片刻，预防药液流出注射量：小鼠0.01ml/g，大鼠0.01～0.03ml/g

34动物实验基本技术第34页3.静脉注射（尾静脉）准备：全新注射器吸入待注射药液动物固定在固定器中，并露出尾巴用45℃～50℃温水浸泡尾部半分钟或用75%酒精棉球擦拭尾部，使血管扩张充血、表皮角质软化35动物实验基本技术第35页3.静脉注射（尾静脉）准备：过程：(1)一手拇指与食指捏住尾部两侧，中指从下托起尾巴，无名指和小指夹持尾尖部一手持注射器使针头与静脉平行（小于30°角）刺入，推进药液无阻力、无皮丘，可注入药液注射完成后尾部向注射侧弯曲或以消毒棉签止血36动物实验基本技术第36页3.静脉注射（尾静脉）准备：过程：(1)一手拇指与食指捏住尾部两侧，中指从下托起尾巴，无名指和小指夹持尾尖部一手持注射器使针头与静脉平行（小于30°角）刺入，推进药液无阻力、无皮丘，可注入药液注射完成后尾部向注射侧弯曲或以消毒棉签止血37动物实验基本技术第37页3.静脉注射（尾静脉）准备：过程：(2)一手食指与中指从下托起尾巴，无名指和小指夹持尾尖部,拇指轻按尾部38动物实验基本技术第38页3.静脉注射（尾静脉）准备：过程：注射量：0.005～0.01ml/g

39动物实验基本技术第39页4.腹腔注射准备：注射器吸入待注射药液过程：一手固定动物，腹部向上，且呈头低位40动物实验基本技术第40页4.腹腔注射准备：注射器吸入待注射药液过程：一手固定动物，腹部向上，且呈头低位局部皮肤消毒一手持注射器刺入下腹部皮下，针头向前推进3mm后，注射针头与皮肤面呈45°角刺入腹肌41动物实验基本技术第41页4.腹腔注射准备：注射器吸入待注射药液过程：一手固定动物，腹部向上，且呈头低位局部皮肤消毒一手持注射器刺入下腹部皮下，针头向前推进3mm后，注射针头与皮肤面呈45°角刺入腹肌42动物实验基本技术第42页4.腹腔注射准备：注射器吸入待注射药液过程：一手固定动物，腹部向上，且呈头低位局部皮肤消毒一手持注射器刺入下腹部皮下，针头向前推进3mm后，注射针头与皮肤面呈45°角刺入腹肌43动物实验基本技术第43页4.腹腔注射准备：注射器吸入待注射药液过程：一手固定动物，腹部向上，且呈头低位局部皮肤消毒一手持注射器刺入下腹部皮下，针头向前推进3mm后，注射针头与皮肤面呈45°角刺入腹肌注射量：0.01～0.02ml/g

44动物实验基本技术第44页五、试验动物麻醉目标：消除动物在手术或试验中疼痛，降低挣扎，使试验便于操作和顺利进行。关键：选择麻醉药和麻醉方法惯用麻醉药给药方法和剂量(表)45动物实验基本技术第45页五、试验动物麻醉麻醉药品浓度动物给药方法剂量（g/kg）维持时间（h）备注乙醚各种动物连续吸入试验决定戊巴比妥钠3%兔、狗、猫iv、ip0.032～4sc0.052～42%小鼠、大鼠ip0.042～4豚鼠ip0.042～4硫喷妥钠5%兔、狗、猫iv0.0215～30min呼吸抑制较严重，注射必须迟缓ip0.0415～30min2%小鼠、大鼠ip0.0415～30min氨基甲酸乙酯20%兔、狗、猫iv、ip1.002～4毒性较小，安全10%小鼠、大鼠ip1.002～4豚鼠ip1.002～4蛙淋巴囊2.002～4氨基甲酸乙酯+氯醛糖10%+1%兔、猫、大鼠iv、ip0.5+0.0556安全，肌松不完全46动物实验基本技术第46页六、试验动物取血剪尾取血法眼眶动脉和静脉取血法颈动脉及静脉、股动脉及静脉取血法断头取血法47动物实验基本技术第47页1.剪尾取血法过程：动物固定并露出尾巴用45℃～50℃温水浸泡尾部半分钟或用75%酒精棉球擦拭尾部，使血管扩张充血用剪刀剪断尾尖或尖锐刀片切割一段尾静脉，即可流出。用手轻轻地从尾根部向尾尖挤捏，可取到更多血液。取血量：0.3～0.5ml/次

48动物实验基本技术第48页2.眼眶动脉和静脉取血法过程：一手将鼠倒置固定，且用拇指和食指捏紧头颈部皮肤，使鼠眼球突出。一手持眼科弯镊或止血钳，钳夹一侧眼球根部，将眼球摘出，并用镊子头部捅破眼球后包膜，将血滴入玻璃管内，直至流血停顿取血量：体重4%～5%血液量

49动物实验基本技术第49页3.颈动静脉、股动静脉取血法过程：一手将鼠麻醉仰卧固定，分离暴露出上述血管一手持注射针沿动脉或静脉走向平行刺入血管，抽取所需血量取血量：小鼠抽血0.6ml/20g

大鼠抽血8ml/300g50动物实验基本技术第50页4.断头取血法准备：试验者带上厚手套过程：一手拇指和食指抓紧鼠颈部位皮肤，并将动物头朝下一手持剪刀，剪掉鼠颈部，让血流入试管内取血量：小鼠抽血0.8～1.2ml

大鼠抽血5～10ml51动物实验基本技术第51页七、试验动物处死和器官剖解试验动物处死目标：发扬人道主义精神，爱护和善待动物--试验结束后，应让动物无痛苦地死亡或尽可能降低死亡痛苦。小鼠和大鼠处死试验动物器官剖解小鼠和大鼠器官剖解52动物实验基本技术第52页1.小鼠和大鼠处死颈椎脱臼法：用摄子或用左手拇指与食指向下压住鼠头部枕骨处，另一只手抓住鼠尾用力向后拉，使之颈椎脱臼，鼠马上死亡。断头法：在鼠颈部用剪刀快速将鼠头剪掉，鼠因断头和大出血而死。

打击法：用手抓住鼠尾并提起，将其头部猛击地面，或用小木锤用力敲击鼠头，使鼠致死。过量麻醉法：快速过量注射麻醉药（麻醉时30倍）53动物实验基本技术第53页2.小鼠和大鼠器官剖解时间：处死后应马上剖解，越早越好，最好在处死后2～3min内解剖器官。

体位：以仰卧位固定动物尸体

次序：先腹腔后胸腔，再脑、脊髓、骨髓和皮肤肌肉等

54动物实验基本技术第54页腹腔器官暴露器官：沿腹部正中线切开腹前壁，再沿最低位肋骨分别向左右两侧切开侧腹壁至脊柱两旁，完全暴露腹腔器官。剖取次序：脾、肝、胃、胰、肠、肾和肾上腺等。盆腔器官：剥离相连组织后，将雄性动物两侧输尿管、膀胱、睾丸、精囊腺、前列腺一同取出；雌性动物可将两侧卵巢、输卵管、子宫角、子宫体一同取出。55动物实验基本技术第55页胸腔器官用镊子夹住胸骨剑突，剪断膈肌与胸骨连接，提起胸骨，在胸椎两侧分别剪断左、右侧胸壁肋骨，取下整个胸壁，依次取出胸腺和心脏。将下颌两下颌支内侧与舌连接肌肉切断，将咽、喉、气管、食管与周围组织分离，用镊子夹住气管向上提起，剪断肺与胸膜连接韧带，然后将咽、喉、气管、食管边同整个肺一并取出。56动物实验基本技术第56页颅腔及脑小动物：从枕骨剪开颅骨，小心剪去颅顶骨片，暴露大脑、小脑和延髓。大动物：可用弓形锯沿眉弓至枕外隆凸上0.5cm连线锯开，用刀背轻轻将脑从颅底分出，依次切断各对脑神经，借脑本身重量从颅内脱出，再切断延髓和脊髓交界处，用