临床免疫检查专家讲座

临床惯用免疫学检验山西医科大学第二医院风湿科高惠英临床免疫检查第1页临床惯用免疫学检验免疫功效检测血清免疫球蛋白血清补体细胞免疫本身抗体肿瘤标志物检测病毒性肝炎病原标志物检测及其它病原体感染免疫检测临床免疫检查第2页检测方法间接免疫荧光法(IIF)酶联免疫吸附法(ELISA)放射免疫法(RIA)被动血凝法(PHA)颗粒凝集法(PA)对流免疫电泳法(CIE)免疫双扩散法(ID)流式细胞术(FCM)临床免疫检查第3页

一、免疫功效检测

（一）血清免疫球蛋白体液免疫

(immunoglobulin,Ig)

由浆细胞合成份泌含有抗体活性一组球蛋白存在于血液、体液、外分泌液、细胞膜据功效和理化性质不一样分五大类IgGIgAIgMIgDIgE临床免疫检查第4页免疫球蛋白---体液免疫IgG含量最多，占70-80%，唯一能经过胎盘

再次免疫应答标志IgA

分两型:血清型，分泌型分泌型机体局部免疫（呼吸道、消化道、泌尿道感染）起更主要作用IgM分子量最大占5－10%。首次免疫应答Ig，最早出现IgIgE与Ⅰ型变态反应相关，血清中含量最少约0.002%与过敏原测定相关

临床免疫检查第5页免疫球蛋白临床意义1.IgGIgMIgA均升高：见于慢性感染、慢性肝病、肝硬化、淋巴瘤和本身免疫性疾病

IgE升高与过敏性疾病、寄生虫感染相关2.单一免疫球蛋白增高：见于免疫增殖性疾病如多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症3.免疫球蛋白降低各类先天性免疫缺点病、取得性先天性免疫缺点病、联合免疫缺点病、长久应用免疫抑制剂病人临床免疫检查第6页血清M蛋白—单克隆Ig由单克隆B细胞增殖产生临床意义

提醒单克隆Ig增殖性疾病，见于

多发性骨髓瘤(MM)巨球蛋白血症恶性淋巴瘤等临床免疫检查第7页（二）补体(complement,C)检测补体是一组具酶原活性糖蛋白九种成份C1-C9参加抗感染及免疫调整，也介导病理性反应补体功效下降、成份降低可用于疾病诊疗和疗效评定

临床免疫检查第8页总补体溶血活性(CH50)检测反应补体传统路径活化活性程度补体C3

含量最多是经典和旁路路径被激活关键物质

补体C4

功效较多经传统路径活化促进吞噬中和病毒预防免疫复合物从容

临床免疫检查第9页总补体溶血活性(CH50)、补体C3

C4临床意义

增高:急性炎症急性组织损伤恶性肿瘤急性传染病等减低:各种免疫复合物性疾病如肾小球肾炎SLE、RA等本身免疫病

慢性肝病、肝硬化、肝坏死、AIDS、重度营养不良症、遗传性补体缺乏症

临床免疫检查第10页补体C1q检测

意义

增高:骨髓炎、痛风等

减低:SLE、MCTD、重度营养不良等

临床免疫检查第11页（三）细胞免疫检测T细胞亚群

T细胞花结形成试验(测定T细胞数量)T细胞转化试验(体外测定T细胞生物学功效)T细胞分化抗原测定CD3＋、CD4＋(TH)、CD8＋

(TS)、

CD4＋

/CD8＋（FCM):检测AIDS、血液肿瘤分型、本身免疫疾病临床免疫检查第12页（三）细胞免疫检测临床意义CD3＋（总T细胞）降低：本身免疫性疾病:SLERACD3＋/CD4＋(TH)降低：恶性肿瘤、遗传性免疫缺点症、艾滋病、用免疫抑制剂者CD3＋/CD8＋(TS)降低：本身免疫病、变态反应疾病CD4＋

/CD8＋比值增高：本身免疫性疾病、变态反应、病毒性感染CD4＋

/CD8＋比值降低：艾滋病、恶性肿瘤复发临床免疫检查第13页（三）细胞免疫检测B细胞浆细胞

体内唯一能产生抗体（Ig分子）细胞CD19等单克隆抗体测定B细胞数升高见于急性白血病降低无丙种球蛋白血症、化疗和免疫抑制剂后

自然杀伤细胞（NK细胞）活性测定

判断机体抗肿瘤、抗病毒指标临床免疫检查第14页（四）细胞因子(cytokine,CK)检测-CK为免疫调整性小分子多肽检测方法酶联免疫测定ELISAPCR技术白细胞介素2活性及受体

免疫应答、抗病毒等作用肿瘤坏死因子抗感染效应、抗肿瘤作用干扰素一个非特异性防御因子抗病毒、抗肿瘤、调整免疫、控制细胞增殖临床免疫检查第15页二、本身抗体检测临床免疫检查第16页风湿性疾病临床免疫检查第17页风湿性疾病常见本身抗体抗核抗体类风湿关节炎早期血清学本身抗体抗中性粒细胞胞浆抗体临床免疫检查第18页１、抗核抗体（Anti-nuclearantibodyANA）

——结缔组织病临床免疫检查第19页(1)抗核抗体ANA——定义ANA：指抗细胞核成份（DNA，RNA，蛋白质和酶）抗体。ANA是结缔组织病筛选试验。ANA谱:针对不一样成份,组成抗核抗体谱（Anti-nuclearantibodies,ANAS)。有利于CTD诊疗、判别诊疗、分型、判断疗效及预后。临床免疫检查第20页(２)按抗不一样靶抗原成份抗体分类抗单链DNA抗体抗双链DNA抗体

抗非组蛋白抗体抗Sm抗体抗RNP抗体抗SSA抗体抗SSB抗体抗Scl－70抗体抗Jo－1抗体抗其它细胞成份抗体抗核仁抗体抗着丝点抗体抗DNA抗体ANAS分类抗组蛋白抗体抗ENA抗体临床免疫检查第21页(3)抗核抗体检测原理+复合物抗原抗体底物（抗原）被检血清（抗体）+

第二抗临床免疫检查第22页(4)检测方法及荧光图谱：间接免疫荧光法IIFHep-2细胞(人喉癌细胞)作抗原底物,当前国内外通用方法是金标准临床免疫检查第23页均质型又称弥散型，染色质均匀一致,此型与抗ds-DNA、抗组蛋白抗体和核小体抗体相关。可见于各种本身免疫性疾病。临床免疫检查第24页斑点型又称颗粒型，核质染色呈斑点状、斑块状，此型与可溶性核抗原抗体相关。临床免疫检查第25页膜型又称周围型，荧光染色在核周围，此型与抗纤层蛋白和抗ds-DNA抗体相关，多见于SLE，尤其是狼疮肾炎患者。临床免疫检查第26页核仁型仅核仁着染荧光，此型与针对核仁内RNA多聚酶抗体、抗Scl-70和PM-Scl抗体相关。多见于SLE、SSC患者。临床免疫检查第27页(5)ANA临床意义：筛选试验A．出现于各种结缔组织病中SLE95％、SS20-60%、RA20-50%、SSc30%、PM/DM20-30%、MCTD99％B．出现于其它恶性疾病中，往往是低滴度阳性，如淋巴瘤、淋巴细胞白血病等。C．核型意义：均质型和膜型提醒抗ds-DNA阳性，斑点型提醒抗ENA阳性。临床免疫检查第28页表ANA在一些CTD中阳性率系统性红斑狼疮（SLE）活动期95-100%非活动期80-100%药品性狼疮（DLE）95-100%混合性结缔组织病（MCTD）95-100%硬皮病（SSc）70-90%干燥综合征（SS）60-80%多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）40-60%类风湿关节炎（RA）30-50%幼年型类风湿关节炎（JRA）20-40%CTD疾病ANA阳性率临床免疫检查第29页2.抗ds-DNA——对SLE高度特异与疾病活动性相关特异性达95％，敏感性仅70％与疾病活动性及预后相关提醒肾脏损害临床免疫检查第30页3.抗Sm抗体——SLE标识抗体

特异性达99％，敏感性仅25％

可作为回顾诊疗与活动无关临床免疫检查第31页４、类风湿因子（rheumatoidfactor,RF)RF是变性IgG刺激机体产生一个本身抗体。是抗人IgGFc段本身抗体。分型：IgM;IgG;IgA;IgD;IgE型临床免疫检查第32页类风湿因子（rheumatoidfactor,RF)临床免疫检查第33页类风湿因子临床意义主要出现于类风湿关节炎患者血清和关节液中，敏感性70%，特异性60%。高滴度病情活动，相关节外表现时滴度高可出现于各种本身免疫性疾病中，如干燥综合征，系统性红斑狼疮，皮肌炎等。一些感染性疾病和老年人也可呈阳性。RF对类风湿关节炎（RA）不特异临床免疫检查第34页▼类风湿关节炎早期血清学本身抗体RF(类风湿因子)APF(抗核周因子)AKA(抗角蛋白抗体)抗CCP(环瓜氨酸肽)抗体临床免疫检查第35页临床免疫检查第36页临床免疫检查第37页临床免疫检查第38页5.抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）

---小血管炎胞浆型cANCA（cytoplasmicpattern）核周型pANCA（perinuclearpattern）临床免疫检查第39页ANCA主要靶抗原cANCA（cytoplasmicpattern）－蛋白酶3

（Proteinase3，PR3)pANCA（perinuclearpattern)－髓过氧化物酶

（myeloperoxidase，MPO）

临床免疫检查第40页ANCA临床意义诊疗系统性血管炎C-ANCA对WG高度特异（95%），且和活动相关抗PR3抗体P-ANCA可见于各种疾病：MPA、CSS等血管炎和其它继发性血管炎等抗MPO抗体临床免疫检查第41页6、其它组织和细胞抗体抗线粒体抗体AMAAMA-M2PBC抗心磷脂抗体ACL抗磷脂综合征抗甲状腺球蛋白抗体甲状腺疾病

抗甲状腺微粒体抗体甲状腺疾病抗乙酰胆碱受体抗体重症肌无力

抗平滑肌抗体本身免疫性肝炎临床免疫检查第42页三、肿瘤标志物(tumormarker)检测肿瘤标志物(tumormarker,TM)是由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生一类物质。有利于：肿瘤诊疗、疗效、监测复发、预后评定临床免疫检查第43页１、甲种胎儿球蛋白

（alphafetoprotein,AFP)甲胎蛋白是在胎儿早期由肝脏合成一个糖蛋白，胎儿血浆中AFP值可达3000μg/L,周岁婴儿浓度靠近成人水平，普通健康成人血浆AFP浓度低于20μg/L。临床免疫检查第44页甲胎蛋白AFP临床意义（1）原发性肝细胞癌AFP>300μg/L（2）生殖腺胚胎癌，胃癌，胰腺癌AFP也可升高（3）病毒性肝炎，肝硬化＜300μg/L（4）妇女妊娠3个月后开始升高，7-8个月到达高峰，分娩后3周恢复正常。临床免疫检查第45页２、癌胚抗原（carcinoembryonicantigen,CEA)癌胚抗原是由胎儿早期消化管及一些组织合成一个富含多糖蛋白复合物。是一个广谱肿瘤标志物。临床意义：

结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等。

连续随访检测。结肠炎、胰腺炎、肝脏疾病和肺部疾病轻度升高。吸烟者及肾功异常者。临床免疫检查第46页３、其它肿瘤标志物前列腺特异抗原测定前列腺癌（prostatespecificantigen,PSA)糖链抗原19-9胰腺癌（carbohydrateantigen19-9,CA19-9)癌抗原125CA125卵巢癌癌抗原242CA242胰腺癌、结肠癌、胃癌临床免疫检查第47页

四、病毒性肝炎病原标志物检测

及其它病原体感染免疫检测临床免疫检查第48页A病毒性肝炎HepatitisVirus肠道传输肠道外传输F,TTV?其它ENANBBDC病毒性肝炎-背景G临床免疫检查第49页病毒性肝炎病原体——

肝炎病毒(HepatitisVirus)主要7型甲型肝炎病毒(HAV)乙型肝炎病毒(HBV)丙型肝炎病毒(HCV)丁型肝炎病毒(HDV)戊型肝炎病毒(HEV)庚型肝炎病毒(HGV)输血传输肝炎病毒（TTV)临床免疫检查第50页

传染源粪便血液/血源性物质/体液血液/血源性物质/体液血液/血源性物质/体液粪便传输路径粪-口经皮肤/经粘膜经皮肤/经粘膜经皮肤/经粘膜粪-口慢性感染否是是是否病毒性肝炎类型ABCDE基因组类型ssRNAdsDNAssRNAssRNAssRNA临床免疫检查第51页（一）甲型病毒性肝炎甲肝是一个急性传染病经粪---口传输，可暴发流行，病后免疫巩固。不转变为慢性临床免疫检查第52页甲型肝炎病毒标志物检测1甲型肝炎病毒抗原和HAV-RNA测定与发病前两周即可于血中和粪便中检测，对早期诊疗含有特异性。2甲型肝炎病毒抗体测定IgM阳性是早期特异性诊疗指标，提醒甲肝感染期；IgG阳性是恢复期指标，终生存在。临床免疫检查第53页（二）HepatitisBVirus(乙型肝炎病毒)乙型肝炎病原体在全世界广泛流行，预计全球半数以上人口已被HBV感染过，5%人口为HBV慢性感染中国：乙肝高发区，人群HBsAg检出率达9.8%临床免疫检查第54页HepatitisBVirus临床免疫检查第55页HBVvirionTheinfectiousvirioniscalledtheDANEparticle.临床免疫检查第56页BothcomprisedofHBsAg临床免疫检查第57页HBVnomenclatureHBV:hepatitisB

virusHBsAg:hepatitisBvirussurfaceantigenHBsAb:hepatitisBvirussurfaceantibodyHBcAg:hepatitisBviruscoreantigenHBcAb:hepatitisBviruscoreantibodyHBeAg:hepatitisBviruse

antigenHBeAb:hepatitisBviruse

antibody临床免疫检查第58页抗原组成1.--HBsAg位于病毒表面，是一个糖蛋白4种亚型(adr,adw,ayr,ayw)欧美国家:adw我国汉族:adr我国少数民族:ayw判断HBV感染指标之一刺激机体产生保护性抗体即抗-HBs临床免疫检查第59页抗原组成2.--HBcAg位于Dane颗粒关键部分和肝细胞核内，在血清中不易检出游离HBcAgHBcAg判断病毒复制活跃指标,血液传染性强,预后差刺激机体产生抗-HBc(非保护性抗体)抗-HBc包含IgM,IgG,IgA在乙肝急性期、慢性肝炎、肝癌和HBsAg携带者中常可检出抗-HBc总抗体，主要反应抗-HBcIgG抗-HBcIgM在感染后最早出现，常提醒病毒处于复制状态临床免疫检查第60页抗原组成3.--HBeAg位于HBV关键,是一个可溶性蛋白抗原HBeAg和Dane颗粒出现相平行，且与DNA多聚酶在血中消长动态相符合血中HBeAg出现可作为HBV复制、病情活动及较强传染性指标刺激机体产生抗-HBe抗-HBe能与受染肝细胞表面e抗原结合,经过补体介导破坏受染肝细胞,抗-HBe出现是预后良好征象临床免疫检查第61页抗原组成4.--Pre-S抗原位于HBV外衣壳上，有两种Pre-S1，Pre-S2Pre-S1刺激机体产生抗Pre-S1，能阻断HBV与肝细胞受体结合，从而起到抵抗病毒作用Pre-S1抗原比HBeAg作为病毒复制指标敏感，

Pre-S1抗原转阴越早，Pre-S1抗体转阳越早，病程越短，预后越好Pre-S2是HBV侵入肝细胞主要结组成份，刺激机体产生抗Pre-S2是HBV中和抗体抗Pre-S1和抗Pre-S2出现，表示病情好转，趋向痊愈临床免疫检查第62页血源性传输输血、注射、外科和牙科手术、针刺等剃刀、牙刷和蚊虫叮咬等母婴垂直传输性传输HBV传输路径临床免疫检查第63页5.病原学诊疗(1)--抗原抗体检测项目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBcIgM方法ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，最惯用，定性)发光免疫分析(定量)反相间接血凝试验(少用)临床免疫检查第64页5.病原学诊疗(2)—核酸检测核酸杂交探针PCR引物临床免疫检查第65页HBsAg–感染标志Anti-HBs–既往感染/接种疫苗Anti-HBcIgM–急性感染标志Anti-HBcIgG–既往或慢性感染HBeAg–急性病毒复制，有传染性

Anti-HBe–病毒不再复制HBV-DNA–急性病毒复制，比HBeAg更准确；主要用于监测治疗反应临床免疫检查第66页血清学检测临床意义HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc临床意义

急性或慢性感染(大三阳)+-+-++++乙肝后期或慢性感染(小三阳)--++---潜伏期或急性乙肝早期--+++痊愈或恢复期,有免疫力-----+++--痊愈,有免疫力疫苗接种或曾经感染过,有免疫力临床免疫检查第67页（三）丙型肝炎病毒RNA病毒从急性感染(或隐性感染)变成慢性肝炎平均过程约10年，发展到肝硬变约20年，少数患者恶变为原发性肝细胞性肝癌需30年左右临床免疫检查第68页丙肝与乙肝比较无症状及无黄疸病例较多，有些患者不易被发觉传输方式与乙型肝炎相同，二者均可经过输血、血制品、血液透析及静脉内滥用药品等路径传输丙型肝炎也可能有性接触传输及母婴传输，但不如乙型肝炎发生机率高有没有症状丙肝病毒慢性携带者有向慢性肝炎或肝硬变发展倾向，其发生率甚至比乙型肝炎更高。与乙型肝炎相同，丙型肝炎也可发展为原发性肝癌。临床免疫检查第69页丙型肝炎病毒标志物检测丙型肝炎病毒RNA测定有利于HCV感染早期诊疗，阳性提醒复制活跃，传染性强；阴性提醒复制受抑，预后很好。丙型肝炎病毒抗体测定IgM主要用于早期诊疗，连续阳性作为转