医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测专家讲座

器材准备医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第1页自然界中微生物已经发觉微生物大约13万5千种，被认为非常危险有600种，在人间传染病原微生物380种。这些微生物存在于地球各个角落，从严寒极地到酷热赤道，从4.2千米地层深处到85千米高空（芽孢）,都有它们踪迹。空气、水、土壤、人体体表以及与外界相通腔道，都有不一样种类和数量微生物存在。存在于人体消化道细菌超出800种，数量可达100万亿（1014），菌体重量1～1.5千克。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第2页医学微生物学试验

综合性试验三(P38)空气与人体体表细菌学检验空气细菌学检验P38手指皮肤细菌学检验P41医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第3页空气细菌学检验P38空气是人类赖以生存环境之一，也是主要疾病传输媒介。空气中病原菌主要来自病人排泄物和分泌物。这些污物，因风吹，以及人类日常活动，以气溶胶形式悬浮于空中，使空气受到污染。环境：不利于微生物生长。种类：主要是病毒、真菌和细菌。在医院，公共场所致病菌数量比较多。作用：可快速全球传输。危害：引发培养基、生物制品污染，病原菌引发呼吸道传染病。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第4页试验方法：自然沉降法是依据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力作用下，以垂直自然方式沉降到培养基表面；培养以后，计数菌落形成单位（colonyformingunit，CFU），了解空气污染情况。试验步骤：每组1块平板，选择采样地点（试验室、宿舍、卫生间、饭堂或任选地点），将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁，平板暴露于空气中15分钟，然后盖上盖子，作标识。37℃温箱培养24小时，观察结果。★CFU/m3＝50000N÷AT≈86N(直径7cm平板）。N：平板上菌落数。A：平板面积(平方厘米)。T：采样时间(分钟)。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第5页空气细菌学检验组号地点时间(min)菌落形成单位(CFU)1卫生间152食堂153门诊大厅154呼吸科病房155呼吸科ICU156外科病房157外科ICU158外科治疗室159婴儿室1510试验室15医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第6页手指皮肤细菌学检验P41

在日常生活中，手接触范围广，使用频率高，受到污染机会也最多。一只外观比较“洁净”手，可携带10万个细菌、200各种病毒。所以，经手传输疾病很多，范围很广，包含肠道传染病、部分呼吸道传染病、皮肤传染病，以及一切可经手间接传输疾病。常住菌：存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和数量比较恒定。附着在皮肤上比较牢靠，用普通洗手方法，常不易去除。暂住菌：存在于皮肤表面经常暴露部位。暂住菌是外来非正常菌群，种类和数量不定。引发人类致病通常是暂住菌。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第7页医务人员，经常要与病人接触，不论是直接接触，还是间接接触，都有传输病菌可能。即使病菌直接起源是患者,不过造成病菌扩散主要路径则是气溶胶和医务人员手。所以，经常洗手和消毒是控制医院内交叉感染主要方法。实际上，预防感染办法中，最简单又十分有效方法就是洗手。据测定，只用自来水洗手可使暂住菌总数降低40%，用肥皂洗手可降低80%以上。洗手？医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第8页常规洗手方法（甲和丙操作）将手充分浸湿，涂抹肥皂或洗涤液。重复搓揉双手，搓揉时间不应少于30秒。用流水冲洗洁净，整个洗手过程不少于1分钟。※能有效地去除大多数手上暂住菌。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第9页医学微生物学试验室标准洗手方法（乙和丁操作）用流动水冲洗，将手充分浸湿，涂抹肥皂、洗涤液。分别搓擦10～15次。保持双手低于肘部，流水冲洗一分钟以上。1.掌心对掌心搓擦2.手指交织掌心对手背搓擦3.手指交织掌心对掌心搓擦4.两手互握互搓指背5.拇指在掌中转动搓擦6.指尖在掌心中搓擦医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第10页1.掌心对掌心搓擦2.手指交织掌心对手背搓擦3.手指交织掌心对掌心搓擦4.两手互握互搓指背5.拇指在掌中转动搓擦6.指尖在掌心中搓擦医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第11页医务人员洗手指征接触传染病患者之后。接触携带多耐药性细菌病人之后。接触病人血液、体液、分泌物和排泄物之后。接触高危病室两个病人之间、新生儿室两个新生儿之间。接触旧钱币之后。上厕所前后。进行微生物操作或作血、尿等生化、免疫测定之后。在施行各种手术前后。诊疗、治疗、护理尤其易感染病人之前。进食之前。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第12页132

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4手指皮肤细菌学检验第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。

2人1块平板上:甲、丙→常规洗手下:乙、丁→标准洗手甲（丙）乙（丁）丙丁医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第13页医学微生物学试验

综合性试验一(P2)脓汁和粪便标本中病原菌检测（二）临床标本检验程序细菌分离与培养P7※目标要求：掌握分离、纯化微生物基本操作技术。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第14页常见病原性球菌检验程序P47：直接涂片、革兰染色、镜检脓汁、痰、咽部分泌物观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板培养涂片染色镜检挑取可疑菌落生化反应↑纯培养动物试验药敏试验血液、穿刺液→肉汤增菌培养→培养液涂片染色境检常见肠道致病菌检验程序P48：粪便→SS琼脂、伊红美蓝平板培养→挑取可疑菌落↑↓血清学判定血、骨髓→增菌培养双糖铁培养基染色镜检生化反应

医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第15页平板划线分离法：借助于划线，将混杂各种细菌，在固体培养基表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见细菌集团。☆在固体培养基表面或基内，由单个细菌在局部位置不停增值稠密群体称为单菌落。☆在固体培养基表面，由多个菌落融合在一起形成细菌堆积物,称为菌苔。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第16页平板分区划线分离法步骤（5区）接种环烧灼灭菌，以免污染标本。取标本在平板表面上方密集涂布5～10mm2。烧掉接种环上多出标本（火焰后面烤干→烧灼）。晃动平板，当看到平板表面象镜面有反光时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，方便控制划线。接种环与平板呈30～40度角，经过密集涂布部分1～3次，使接种环重新沾上少许标本(细菌)，然后在平板表面，以曲线形式，作大幅度往返连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。转动平板，接种环经过第一区1次，一样方法划第二区。如此依次划完3～5区。接种环烧灼灭菌（火焰后面烤干→烧灼），以免污染环境。将平板倒置（盖在下，底朝上），37℃培养18～24h。★要充分利用平板面积，5区间隔尽可能小，不能划破琼脂。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第17页5～10mm2↓↙＞30条线平板划线不少于150条线医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第18页平板划线分离法P8甲→脓汁标本→普通平板（黄色）乙→脓汁标本→普通平板丙→粪便标本→伊红美蓝（紫色）丁→粪便标本→伊红美蓝医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第19页试验分组俩俩相对4人为一组,组号编在电源插座上。每组按从前到后,从左到右次序，分别编号为甲、乙、丙、丁。

甲乙4丙丁甲乙3丙丁甲乙2丙丁甲乙1丙丁甲乙5丙丁甲乙8丙丁甲乙7丙丁甲乙6丙丁甲乙10丙丁甲乙9丙丁讲台医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第20页接种环烧灼灭菌使用前，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝烧红即可。使用后，先在火焰后面将把环上标本烤干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，污染环境。金属杆快速经过火焰2～3次，杀灭表面微生物医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第21页接种环直径3mm环面垂直离开液面：快速3ul,慢速1ul。环面水平离开液面：快速6ul,慢速2ul。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第22页医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第23页医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第24页接种环与平板接触点和划线方法？医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第25页医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第26页5～10mm2↓↙＞30条线平板划线不少于150条线医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第27页37℃培养24小时

医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第28页37℃培养24小时

医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第29页37℃培养24小时

医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第30页37℃培养24小时

医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第31页安全警告接种环接种平板一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径＞100um沉降很快，＜50um在0.4s内扩散开，＜5um经过呼吸道直接抵达肺泡。Pike博士对试验室感染统计分析结果发觉，不明原因感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引发。试验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持平静、有序，尽可能少说话、少走动，以免感染病原菌。医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第32页思索题为何取链球菌作为空气卫生指标之一?为何金黄色葡萄球菌是医院内感染常见主要病原菌?为何接种环使用前后必须烧灼灭菌？忽略了有什么危害?做细菌培养时，平板为何要倒置?培养细菌惯用方法有哪些?从临床标本中分离病原菌，应注意哪些事项?医学微生物学实验脓汁和粪便标本中病原菌的检测第33页试验内容空气细菌学检验P38普通平板(1组1块）手指皮肤细菌学检验P41普通平板(2人1块→划分8格）平板划线分离法P8

甲，乙→脓汁标本→普通平板(黄色，1人1块）丙，丁→粪便标本→伊红美蓝(紫色，1人1块）