临检室项目作业指导书

HIV筛查室仪器指导书

文件编号：TY-3-HIV-3-01-12

第C版

依据《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》

《医学实验室一质量和能力的专用要求》

《医疗机构临床实验室达标验收标准》编制

编制：肖丽芳

审核：谢双琴

批准：肖叙平

生效日期：2015年8月18日

泰和县人民医院检验科

文件编号：

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容修订页生效日期：20140128

第2页共60页

目录

序号主题内容代号页号

1TY-3-HIV-3-014

2TY-3-HIV-3-025

3TY-3-HIV-3-036

4TY-3-HIV-3-047

5TY-3-HIV-3-058

6TY-3-HIV-3-069

7TY-3-HIV-3-0710

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

文件编号：

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容修订页生效日期：20140128

第3页共60页

修订页

序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第4页共60页

样品的采集、运送、接收、处理和保存管理程序

【目的】规范本实验室标本的采集、运送、接收、处理和保存，保证结果的准确性。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述

人员批准签字：科主任、专业主管。

【适用范围】HIV抗体筛查实验室

用于人免疫缺陷病毒（HIV）检测的全血、血清、血浆、尿液等样品的采集和处理方法，适用

于HIV抗体检测。

【规范性引用文件】

《全国艾滋病检测技术规范》（2009年版）

《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》，卫生部第45号令2006

年2月1日

【样品种类及相应的用途】

全血、血清、血浆以及尿液可用于HIV抗体检测。

【操作步骤】

1、采样前准备

根据检测项目的具体要求，确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法，按照临

床采血技术规范的要求操作，遵守生物安全要求。

要检查所需物品是否已备齐，是否在有效期内，有无破损，是否足量，特别应检查受检者信

息与样品容器表面的标记是否一致，并注明样品采集时间。选择合适的室内（外）采血空间，受

检者坐（卧）于合适的位置，准备采血用具、皮肤消毒用品、采血管及试管架、硬质废弃物容器

等。

①样品的编码和记录

②根据技术规范要求，制定样品编码的标准操作程序，规定样品编码的原则和方法，为样品

制定唯一性编码（编号），保证其唯一性。

③采血前，先对装有样品的离心管或滤纸进行标记，核对后编码。要将标签贴在试管的侧面。

④使用专门的样品接收、登记记录本记录样品，同时录入电脑进行电子版保存。

2、采集和处理样品

①血液或血清：根据需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取3〜5nli静脉血，最好室

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第5页共60页

温下自然放置1〜2h,待血液凝固、血块收缩后再用1500〜3000r/min离心15min,吸出血清，置

于合适的容器中，备用。

②样品采集后处理、保存、运输的时限和条件，因不同的检测项目而异，应参见不同检测项

目要求。

③采血完成后的穿刺针头必须丢弃于尖锐危险品容器里，妥善处理，防止发生职业暴露。

④尿液：使用清洁的容器收集尿液。女性应避开月经期。尿液样品可以在2〜8℃下存放。

存放时间、是否冻存以及是否添加防腐剂以试剂盒说明书为准。

⑤艾滋病抗体筛查阳性，自愿接受免费相关检测的人员需进行采血送确证实验室检测。用于

CD4.淋巴细胞检测，需用加有抗凝剂的（EDTA）的真空采血管抽取静脉血2管，各采全血5ml„

标本采集后将1管采集后的（5ml）全血在涡型振荡器上混匀30秒后，取1ml以上全血。置于2ml

的血清管内（平底带螺旋盖），用于CD4'淋巴细胞检测。吸完全血后，将管内多全血和另一管全

血3000转离心15分钟，上清为血浆，轻轻吸取出上层的血浆于带螺旋口的血清管中，共取二管，

每管不少于1.5ml,用于病毒载量检测。另取一份血清用于确证检测。

3、样品的保存

①用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于2〜8℃,-

周以上存放于-20℃以下。

②艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证实验室，筛查阴性样品，本室保

存不少于12个月。

4、样品的运送与接收

①本院各临床标本的运送由医护人员运送到实验室，实验室工作人员认真进行核对并签收。

核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样

品管和盛器消毒。

②标本接收时实验室工作人员应检查样品的状况，记录有无严重溶血，微生物污染、血脂过

多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品

情况立即通知送样人。

③核对标本和标签或标记与送检单是否一致，是否清晰，粘贴牢固。

对以下送检样品拒收：没有标记或字迹模糊不易辩认、严重溶血或已污染血样（已长细菌）、

样品不足检测所需量、送检单与血样不一致、样品管破损或外溢的等。对被拒收者要求完善各项,

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第6页共60页

重新采集标本送检。

④外送标本（如筛查阳性标本等）的运送与接收

a.应符合生物安全要求；要获得相应部门批准并由具有资质的人员专程护送。

b.应采用三层容器对样品进行包装，随样品应附有与样品唯一性编码相对应的送检单。送检

单应标明受检者姓名、样品种类等信息，并应放置在第二层和第三层容器之间。

c.第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记,

标明样品的唯一性编码或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料•，以

免碰碎。

d.第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、

防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。

e.第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签，注明

数量、收样和发件人及联系方式，同时要注明“小心轻放、防止日晒、小心水浸、防止重压”等

字样，还应易于消毒。

f.用于抗体检测的血清和血浆样品应于24小时内运送。用于CD4+和CD4+T淋巴细胞测定的

样品应在室温下（18〜25℃）或4℃（特殊要求时）运送。用于病毒载量检测的样品应在-20C以

下运输。每一件包装的体积以不超过50mL为宜。分装的每个样本管上标签信息（设区市、样本编

号、样本类型、姓名、采样时间），同时填写《江西省HIV免费检测送检单》《江西省艾滋病抗病

毒治疗前疾控机构免费检测服务申请表》。严禁使用玻璃容器，运送样品必须有记录。

g.样品的接收

样品包裹必须在具有处理感染性材料能力的实验室内、由经过培训的、穿戴防护衣、戴口

罩、防护眼镜的工作人员在生物安全柜中打开，用后的包裹应及时进行消毒。

核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，

对样品管和盛器消毒，同时报告实验室负责人和上一级实验室技术人员。

检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染

过重或者认为样品不能被接受，应将样品安全废弃。并将样品情况立即通知送样人。

接收样品时应填写样品接收单。

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第7页共60页

HIV抗体筛查流程

【目的】规范本实验室HIV抗体筛查的标准化，保证结果的准确性。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述

人员批准签字：科主任、专业主管。

【适用范围】HIV抗体筛查实验室

主要用于HIV抗体筛查的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各

类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫处机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV

感染者诊断和监测的实验室依据。

【规范性引用文件】

《全国艾滋病检测技术规范》（2009年版）

《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008）

【HIV抗体检测实验室要求】

应符合《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》中对实验室人员、建筑设施和设备等条件

的要求。

实验室的质量保证和实验室安全防护按本规范相关章节规定执行。

[HIV抗体检测的目的和要点】

1、HIV抗体检测的目的

①HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。

②以诊断为目的的检测是为「确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据

特殊需要进行的体检等。

③以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV,包括献血员筛查和原料血浆筛查。

④以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括种类高危人群、重

点人群和一般人群。

2、HIV抗体检测的要点

①根据目的选择检测方法及检测策略。

②严格遵守实验室SOPo

③筛查试验阴性，不需做确证试验。

④筛查试验阳性，需做确证试验。

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第8页共60页

⑤筛查试验和确证试验阳性应做好咨询工作。

3、常规HIV抗体筛查检测的方法和程序

HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。

①筛查试验

a.筛查试剂

必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检

合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。

b.筛查样品HIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。

c.筛查方法

（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）

可使用血液、尿液等样品，采用ELISA法检测HIV-1/2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载

体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。有效试验的阴

性和阳性对照必须符合试剂盒规定。

（2）快速检测HIV-1/2抗体试验

这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可在10s30分钟内得出结果。是

HIV血清抗体检测的一种简便方法。本实验室采用的是免疫胶体金快速试验：均以硝酸纤维膜为

载体，HIV抗原点状固定在膜上，加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。有效

试验的质控点必须显色。

d.筛查程序

（1）筛查试验

根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具

HIV抗体阴性（-）报告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。

（2）复检试验

对筛查呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外

两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必

须包括一种抗原抗体联合试剂.如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（-）;如均

呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验（如下图）。艾滋病检测筛查实验

室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责生效日期：20140128

第9页共60页

（3）筛查和复检流程图

样品

;筛查试剂

初筛试验

阳性反应阴性反应

原有试剂+另一不同原理

（或厂家）试剂或另外两种

J不同原理（或厂家）试剂

复检试验

均阳性反应一阴一阳均阴性反应

确证试验报告阴性一

HIV抗体筛查检测流程

（4）筛查试验结果的报告

IIIV抗体筛查试验阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。

（5）筛查试验呈阳性反应样品的转送

需送上级实验室进行复检，需要核对身份，补充个人信息（如姓名和身份证号码），必要时

采集第二份血样，持HIV抗体筛查报告，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室复

检。两次检测均阳性或一阴一阳报告为“HIV抗体待确证”；两次检测均阴性报告为“IIIV抗体阴

性（-）"。HIV抗体复检报告需由1名检验人员和1名审核人员签字。

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第10页共60页

HIV抗体筛查检测的质量控制管理程序

【目的】保证HIV抗体筛查检测结果准确,为临床疾病的诊治提供可靠依据。

【该SOP变动程序】本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述

人员批准签字：科主任、专业主管。

【适用范围】HIV抗体筛查实验室

【方法】

【分析前质控】

一、行政支持

应将艾滋病检测实验室的建设、发展和质量管理纳入地方卫生行政规划，保证实验室负责人

和主要技术人员队伍的稳定，保证实验室建筑和设备需要，给予充足的经费支持，并进行经常性

监督检查。

二、人员培训

检验人员必需经过上网培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：

1、检验项目的基本原理（ELISA原理）。

2、临床意义。

3、熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点。

4、熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）。

5、熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。

6、人员培训及其评价：实验室工作人员上岗前必须接受技术培训并获得合格证书。在工作中

要定期或不定期接受复训。实验室主管领导定期对工作人员进行评价，包括工作的准确性、效率、

执行安全条例、规章制度情况、职业道德、上岗资格等。

7、实验室规范化建设：艾滋病筛查实验室的设置及其建筑、设施、设备要符合《全国艾滋病

检测工作规范》的要求。HCV,HBV及梅毒等血清学检测在满足实验室管理要求和保证生物安全的

条件下，可以与HIV检测共享空间和设备，应避免交叉污染。

三、质控血清的选择与保存

1、本HIV抗体筛查实验室检测方法为ELISA,在每次实验中必须要有内部对照血清和外部

对照血清。

（1）内部对照质控血清：指试剂盒所提供的阳性和阴性对照血清。内部对照是质量控制的

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第11页共60页

基础。每一次检测必须使用内部对照，只能在同批号的试剂盒中使用。

（2）外部对照质控血清：是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而

由实验室设置的一套对照血清，包括强阳性、弱阳性、阳性对照血清。也可以只设置一个弱阳性

对照，以试剂盒临界（Cut-off）的2-3倍为宜。本实验室只设置一个弱阳性质控对照血清，以

试剂盒临界（Cut-off）的2-3倍为宜，质控品的选择：来源于江西省CDC或其他有资质厂家提

供的低浓度的质控血清。

2、外部对照血清的保存与使用

（1）按一周的实验使用量分装、分类、标记、封口、冻存于（-20℃）冰柜中。

（2）外部对照血清不可反复冻融，一亘融化后应该存放2-8℃,供一周内使用。

（3）外部对照血清的使用

每一次HIV检测必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了

解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。

3、外部对照质控物的质量要求

质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（cv<20%）,并且质控物的成分应在

稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响ELISA反应的防腐剂。

四、检验方法和试剂选择

必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。试剂的选择：应使用

可靠的检测方法和敏感性高、特异性好的试剂，并定期进行质量评价。

五、设备维护与校准

实验室设立常用仪器的维护及校准制度，建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP）,并严

格遵守本规章制度，以保证检测工作正常运转。必须经国家法定部门定期（每年至少1次）校准

的仪器至少包括：酶标仪/洗板机，加样器，温度计，高压灭菌器。加样器、温湿度计须经计量

部门校准。必要时可根据需求每1〜2个季度进行期间核查。其他精密仪器及出具实验结果的仪器,

如生物安全柜、离心机和水浴箱等也应定期（每年1次）校准，可请生产厂家校准。

1、移液器：①称重法：ELISA加样量小（5-100ul）,其准确性直接影响实验结果，利用称

重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内。

②计量校准法：每年至少送1次到有资质的计量单位进行校准检定，发现异常情况时应随时进行

校准。

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第12页共60页

2、水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许

有±1℃的误差。

3、洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul,人工扣板时，垫纸

不湿，定期检查管孔是否堵塞。所以，每次试验前应先检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现

象。定期清洁仪器表面，保护光学零件不沾灰尘。定期（每月至少1次）检查洗板机洗涤时各孔

是否与相应的冲洗头对位良好；负压是否符合规定要求。

4、酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性

能。酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等

等。优良的酶标仪的读数一般可精确到0.001,准确性为±1%,重复性达0.5猊酶标仪的可测范

围视各酶标仪的性能而不同。普通的酶标仪在0.000-2.000,新型号的酶标仪上限拓宽达2.900,

甚至更高。超出可测上限的A值常以“*”或“over”或其它符号表示。应注意可测范围与线性范

围的不同，线性范围常小于可测范围，比如某一酶标仪的可测范围为0.000〜2.900,而其线性范

围仅0.000-2.000,这在定量ELISA中制作标准曲线时应予注意。同时为保证检测结果的准确性

和可靠性，每年至少1次将酶标仪送到有资质的计量单位进行校准检定。

5、酶标仪校正程序

①通道差与孔间差检测：通道差检测是取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑，透明，无污染）以

酶标板架作载体，将其（内含200ul甲基橙溶液吸光度调至0.500A左右）置于8个通道的相应位

置，蒸锵水调零，于490nm处连续测三次，观察其不同通道的检测器测量结果的一致性，可用极差

值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家，同一批号酶标2板条（8条共96孔）分别加入200ul

甲基橙溶液（吸光度调至0.100A左右）先后置于同一通道，蒸馈水调零，于490nm处检测，其误

差大小用±1.96s衡量。

②零点飘移（稳定性观察）：取8只小孔杯分别置于8个通道的相应位置，均加入200ul蒸储

水并调零，于490nm处每隔30分钟测一次，观察各个通道4小时内吸光度的变化。

③精密度评价：每个通道3只小杯分别加入200ul高中低3种不同浓度的甲基橙溶解，蒸储水

调零，于490nm作双份平行测定，每日测二次（上下午各一次），连续测定20天。分别计算其批

内精密度，日内批精密度，日间精密度和总精密度及相应的CV值。

④线性测定：用电子天平精确称取甲基橙配制5个系列的溶液，于490nm平行测8次，取其均

值。计算其回归方程，相关系数及标准估计误差S,并用±1.96S表示样品测量的误差范围。双波

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第13页共60页

长测定评价：取一分甲基橙溶液，分别加入3种不同浓度的溶血液（测定波长为490nm,校正波

长为585nm）,先后于8个通道检测，每个通道测3次，比较各组之间是否具有统计学差异，以考

察双波长消除干扰组分的效果。

6、酶标仪、洗板机的保养、维护与校准

①每天（次）：核对滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象。

②每周：清洁仪器表面，保护光学零件不沾灰尘。

③每月：检查洗涤时各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定的要求。

④每年：检查清、洗滤光片，如果出现破裂或霉点则要更换。根据仪器内具有的校准程序

或使用校准板，对滤光片的精密度进行校准并保留记录。

⑤实验过程中发现异常情况，应随时进行处理，根据使用情况更换必要的部件。

©为保证检测结果的准确性和可靠性，每年至少1次将酶标仪送到有资质的计量单位进行校

准检定。

7、移液器的维护与校准

每年至少1次将移液器送到有资质的计量单位进行校准检定。发现异常情况随时进行校准或

维护。

8、冰箱和恒温箱

每天（次）检查和记录低温、低温冰柜及恒温水浴箱的的温度，并做好详细记录。

9、定期检查温度计等其它仪器设备

①用于记录温度的干湿度计•，每年至少1次送检2支或以上温度计或干湿温度计到有资质的

计量单位进行校准检定，然后再进行比对。

②精密仪器及出具实验结果的仪器必须定期校准，其它仪器定期检查并做好记录。ELISA实

验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才

能充分发挥ELISA的高灵敏，强特异的优点。因此，应建立实验项目的标准操作程序（SOP）。

③生物安全柜，高压灭菌器等，每次使用前检查仪器是否处于正常运转状态，

并做好记录。使用过程中或使用后检查发现问题，应及时报告，并请专业公司进

行维修，直至运转正常。

10、实验耗材

实验室需选购质量优良的耗材，以保证检测工作安全和结果的可靠性，并定期（每批次）或

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第14页共60页

在更换产品时对耗材进行质量评价。

六、标本的采集和保存

1、标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰，以HRP为标

记的ELISA测定中，溶血标本会增加非特异性显色造成假阳性。

2、细菌污染的标本同样的道理也易产生假阳性，因菌体中可能含有内源性HRP也会产生假阳

性反应。

3、抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是不使用

用肝素抗凝剂。

4、标本的采集、运送和处理：要严格遵守标准操作的要求。

【分析中的质控】

一、加样

1、加样应用微量移液器（加样枪）按规定的量加入微孔板底部，避免加在孔壁上部，不可溅

出，不可产生气泡。

2、每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头，以免发生交叉污染；干吸头预先在血清中抽吸三

次。

3、样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定要先加稀释液后加样本，特别注意加

样后要在微量振荡器上振荡30秒钟，同时注意防止液体溢出。如后面操作步骤中加二种以上试剂

时均需振荡混匀。

4、如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气泡的试剂后加样。

二、温育

1,抗原抗体反应需要在一定温度下（37°C）,经过一定的时间才能达到反应的平衡点。

2、ELISA边缘效应是由温育形成的。所以温育一般采用能使反应液温度迅速达到平衡的水浴

法。水要浸至板条的1/3处。

3、反应板不宜叠放，注意温育的温度和时间应按规定控制，一个人操作时，一次不宜多于两

块板同时测定。

三、洗涤

1、手工洗涤一般采用浸泡方法：①甩去孔内反应液；②用洗涤液过洗一遍（即注满孔后即甩

去）；③微孔重新注满洗液后浸泡2-3分钟，间歇摇动；④甩去孔内液体，拍板，用纸吸干。重复

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第15页共60页

以上操作至少5次。注意各种试剂盒的洗涤液尽量不要混用。

2,洗板机洗板一定要预先把板架放平，使洗板机上的每个放液和吸液纤孔都能一致地插入孔

底，将孔内液体全部吸干，同时要设置一定的浸泡时间。如出现机洗后拍板有较多残留液时应再

用手工洗2次以上。关机前要用蒸溜水冲洗管道，避免堵孔。

四、显色

1、HRP催化底物的一步呈色反应，同样需要一定的时间和温度。

2、一定要按照说明书规定的时间温度（一般为37°C,30分钟）恒定反应后终止。

五、酶标仪判读结果

1、显色反应终止后应立刻比色（30分钟内）。

2、常见的显色系统有0PD和TMB二种，以后者最为常见，而TMB酸不易终止因此必须尽快比

色以免影响结果。OPD终止后显棕色，测定波长为490nm；TMB终止后显黄色，测定波长为450nm,

二种底物的校正波长均用630nm。

3、使用双波长的优点可以消除反应板条上的划痕手印的干扰。同时要注意反应板应用纸吸干

后才能置酶标仪中比色，否则吸光度易出现负值或损坏滤光片。

六、质控图的绘制

1、（即刻法）质控法

本HIV筛查实验室选用的HIV抗体质控血清为临界值2—3倍的外部质控血清作为室内质量控制

血清，数值采用（S/C0值）进行质量控制。

当检测次数不多（非每日进行检测时）、试剂厂家更换或更换质控品等时，采用“即刻法”质

控（Crubbs氏法）进行，只需连续测定3次，即可对第3次检

验结果进行检验和控制。待累积达20次数据后进行常规控制。

Crubbs氏法（即刻法）具体计算方法

计算出测定结果（至少3次）的平均值（x）和标准差（s）。将SI上限、SI下限与SI值表中的

数字比较（具体数字与HIV质控即刻法上数据相同）。计算SI上限值、SI下限值和即刻法SI值表:

计算公式：

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第16页共60页

X最大值-X（均值）X最小值-X（均值）

SI上限=-------------------SI下限=--------------------

SS

（1）Crubbs氏法（即刻法）质控规则

①当SI上限和SI下限＜n2s时表示处于控制范围内，可以继续测定。继续重复以上各项计算。

②当SI上限和SI下限有一值处于n2s〜n3s值之间时说明该值在2s3s范围，处于“告警”状态。

③当SI上限和SI下限有一值〉n3s值时说明该值已在3s范围之外，属“失控”。数值处于“告

警”和“失控”状态应舍去，需重新测定该质控血清和病人样品。舍去的只是失控的这次数值，其

它测定值仍可继续使用。

（2）失控情况处理

①操作者在测定质控时，如发现质控数据违背了控制规则，应填写失控报告单，报告专业

组长做出是否发出与测定质控品相关的那批患者标本检验报告的决定。

②失控信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的那批病人标本报告可能作废。首先要尽

量查明导致的原因，然后再随机挑选出一定比例（例如5%或10%）的患者标本进行重新测定，最后

根据既定标准判断先前测定结果是否可接受，对失控做出恰当的判断。

③对判断为真失控的情况，应该在重做质控结果在控以后，对相应的所有失控患者标本进

行重新测定。如失控信号被判断为假失控时，常规测定报告可以按原先测定结果发出，不必重做。

（3）失控原因分析

①操作上的失误；试剂、校准物失效；质控品的失效；仪器维护不良；

②采用的质控规则、控制限范围；偶然因素等等。

（4）失控原因查找步骤与记录

①先回顾整个过程，思考会有哪个环节出现问题，然后作出相应初步处理。如未找到明显问

题再如下操作。

②重测同一质控品。此步是主要是用以查明人为误差，每一步都认真仔细得操作，以查明失

控的原因；另外，这一步还可以查出偶然误差，如是偶然误差，则重测的结果应在允许范围内（在

控）。如果重测结果仍不在允许范围，则可以进行下步操作。

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第17页共60页

③新开一瓶质控品，重测失控项目。如果新开的质控血清结果正常，那么原来那瓶质控血清

可能过期或在室温放置时间过长而变质，或者被污染。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。

④进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，查明光源是否需要更换，比色杯是否需要

清洗或更换？对仪器进行清洗等维护。另外还要检查试剂，此时可更换试剂以查明原因。如果结

果仍不在允许范围，则进行下一步。

⑤重新校准，重测失控项目。用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。请专家帮助。

©如果前五步都未能得到在控结果，那可能是仪器或试剂的原因，只有和仪器或试剂厂家联

系请求他们的技术支援了。⑦所有过程应记录可查。

2^ELISA法检测Levey-Jennings质控图的建立

用Levey-Jennings质控图，使用累计和技术或趋势分析技术的图形提供系统偏移和漂移的状

况。

(1)质控参数的建立

外部对照质控物的平均值和标准差建立在实验室常规使用方法对质控物重复测定的基础上。

数据来源于采用即刻法累积达20次数据后的数据进行常规控制。或者当更换新批号质控品时，每

个项目都应和现用的质控品作平行检测，最好是在不同天内至少作20瓶的检测。若无法从20天

内得到20个数值，至少在5天内，每天作不少于4次重复检测来获得。

①算术平均值(一X)：代表一组S/C0值的平均值。为了统计学上有显著性意义，应该采用

至少20次(天)所得到的外部对照质控血清S/C0值结果计算出平均值。其计算公式为：

2x

—X二----------

n

②标准差(S)：是描述样品与均之间离散程度的一个指标，是以对照质控血清S/C0值均数

值有关的预期范围。一组S/C0值的标准差以S表示。

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

生效日期：20140128

主题内容艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第18页共60页

其计算公式为：

工（Xn----X）

s=N------------

/n-l

③变异系数（cv）：是反应各次S/CO值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检

测的重复性或精密度。

其计算公式为：S

cv=X—100%—

—X

④控制限：由实验室根据对质控物检测结果的平均值和标准差来确定。Ls质控规则的控制

限为外部对照S/C0平均值±1S；12s质控规则的控制限为外部对照S/C0平均值±2S；13s质控规

则的控制限为外部对照S/C0平均值±3S。

（2）绘制质控图

质控图是把检测数据与已确定的（计算出的）“控制限”进行比较的图，包含一条中心横线和

其上、下两条平行控制线，并按时间顺序点入本实验室每次试验质控血清的测定值。

①在常规条件下，对同一批连续测定20次（天）或以上，获得一组S/C0值，求均数（-X）

和标准差（s）,超出2s或3s的数据不应删除。

②将均值（一X）和标准差（s）分别在质控框架图中标示出来。以S/C0值作纵座标（Y轴）,

每一次（天）试验作横坐标（X轴），绘制质控图。

③从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。

通常规定95%或99%的范围为统计学上的可接受置信区间，相应于此置信区间意昧着质控值落在均

数（一X）±2s或（一X）±3s的范围内，而在此范围内，则认为该分析批在控。

（3）L-J质控图的质控规则的使用

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第19页共60页

①告警（必）：当外部对照的S/CO值超出一X±2s范围时，系统处于告警状态，应予注意,

是否可以继续检测需要进一步观察。若将12s做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。

②失控（/）：当外部对照的S/CO值超出一X±3s范围时，系统处于失控状态，本次实验

结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差、或外部对照滴度下降造成。

③位移：连续几次（3-5次）外部对照S/CO值落在均值的一侧称为位移，提示实验条件发

生了较大的变化。

④连续几次（5-7次）外部对照S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢

改变引起。

⑤要点：出现一次2s范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需进

一步观察。

©出现一次3s范围的变化、连续两次出现同一方向2s范围的变化、连续四次出现同一方向

的1s范围的变化、连续10次结果都落在1s范围内，但都落在均值线的同一侧，均应判断为失控,

失控处理与分析同即刻法。

（4）质控图的分析及失控处理程序

①当质控已有计划并恰当地执行时，要求可靠的平均值和标准差用于计算质控限，将假失控

概率降到最低。当出现失控时，要必须找出问题原因，找出解决故障的方法，并消除原因，防止

将来出现同样的问题。

②长期和稳定地使用相同而且质量好的试剂盒，如更换不同厂家、改用新批号的试剂盒后，

必须重新绘制质控图，并在质控图上注明使用日期。

③发现质控结果失控，及时报告质量负责人，分析原因并决定是否发出检测结果报告。

④使用新批次的外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。变异系数小于20%,表示外部对

照血清处于稳定状态。

⑤所有失控应有处理分析与记录。

【分析后的质量控制】

【报告方式】

一、定性试验：ELISA定性试验的临床意义在于是否检出病原体，与检出量无关，因此QC要

保证试验的灵敏度和特异性。建议使用临界值血清界定法：将试剂盒所设的阴阳性对照作为内部

对照指示反应；另设临界值、高值质控血清，与标本同时检测，临界值S/C.021,高值质控血清

文件编号:TY-3-LJ-1-50

泰和县人民医院检验科HIV筛查室制度指导书版本/修订号：A/0

主题内容生效日期：20140128

艾滋病抗体筛查实验室工作人员职责第20页共60页

S/C.0>10,正常人血清A值在0.05~0.07之间，本室仅设有临界值血清。阳性质控血清失控（临

界值为灵敏度，高值为“HOOK”效应监控）应重做阴性标本；阴性对照失控应重做阳性标本。为

便于统一计算，一律按S/COV方式报告，S为标本A（或0D）值，COV即CutOff值（或COV）。

1、夹心法和间接法以S/COV》1为阳性；竞争法与中和法以S/COV<1为阳性。

2、COV的计算公式以试剂盒说明书的为准常见的有：

①C0V=2.1XN（当N不足0.05时按0.05计），此公式由P/N>2.1换算而来，常用于夹心法。

②C0VR.5XN,从抑止率公式换算而来，常用于竞争，中和法。

③COV=N+C（C为常数），用于间接法。

④C0V=CXP+N（C为常数），用于间接法。此公式最客观，但对厂家要求很高，阴阳性对照

测定值要基本恒定。

二、【记录】

1、实验室原始记录表

设计的原始记录表，要标明空白（使用双波长时可