猪冷冻精液生产技术操作规程

猪冷冻精液生产技术操作规程范围本标准适用于猪冷冻精液生产的采精准备工作、公猪准备、采精操作和精液预处理。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。ＮＹ/Ｔ65-2004猪饲养标准ＧＢ/Ｔ25172－2010猪常温精液生产与保存技术规范ＧＢ/Ｔ23238－2009种猪常温精液术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1假台畜falsetableanimals采精时用于诱导公猪爬跨行为的仿生母猪制品。3.2鲜精freshsemen采集后未经稀释处理的新鲜精液。3.3冻精frozensemen经过深度冷冻并长期保存在超低温（-196℃）环境下仍具有受精能力的猪精液。3.4精子活力spermmotility精液中呈直线前进运动精子的总数。3.5精子畸形率spermabnormalrate

畸形精子数占总精子数的百分率。采精栏准备4.1检查假台畜是否稳当，擦拭假台畜后面及后躯下部。4.2检查橡胶防滑垫，放在假台畜后方，以保证公猪爬跨时，站立舒适。4.3对采精栏进行清洁卫生，冲洗干净，进行紫外线消毒。4.4采精室的温度能够控制，不应低于10℃，控制在16～25℃之间。公猪准备5.1种用公猪应具有种用性能，符合国家有关规定，饲养应符合ＮＹ/Ｔ65的要求。5.2采精前将公猪赶到采精栏，对体表进行清洁。刷拭掉公猪体表，尤其是下腹及侧腹的灰尘和污物。5.3公猪的阴毛不能过长，以免粘附污物。修整公猪的阴毛，一般以2cm以下为宜。5.4先用0.1%高锰酸钾溶液清洗，再用灭菌生理盐水清洗，并用消毒的干净毛巾擦拭干净包皮部，避免采精时残液滴或流入精液中污染精液。集精杯准备6.1将一层塑料袋放入集精杯中，然后将塑料袋外翻。将滤纸盖在集精杯口上，将橡皮筋撑开滤纸固定在集精杯外沿上。滤纸安装好后，纸面应下陷3cm左右，放在37℃的恒温箱中预热。6.2将消毒纸巾盒、ＰＥ手套、集精杯放在实验室与采精栏之间的壁橱内，关上壁橱门。6.3采精时拿出集精杯并盖上盖子，然后传递给采精人员。6.4当处理室距采精栏较远时，应将集精杯放入泡沫保温箱中，然后带到采精栏。采精操作7.1采精员从手套盒里抽取手套，往右手上戴两层手套。7.2采精员站在假台畜的头部，轻轻敲击假台畜以引起公猪的注意，并通过模仿发情母猪声音或在假台畜上洒发情母猪尿液等方式引导公猪爬跨。7.3当公猪爬跨有交配行为时，采精员迅速用右手按摩挤压公猪包皮囊，将其中的包皮积液挤净，然后用消毒纸巾将包皮口擦干净。7.4当公猪爬跨假台畜时，采精员应辅助公猪保持正确的姿势，避免侧向爬或阴茎压在假台畜上。7.5手握龟头呈节奏性松紧给予压力进行刺激，锁定龟头，脱去右手的外层手套，右手呈空拳，当龟头从包皮口伸入空拳后，用中指、无名指、小指锁定龟头，并向左前上方拉伸，龟头一端略向左下方7.6为了防止未挤净的包皮积液顺着阴茎流入集精杯中，采精时要保证阴茎龟头端的最高点高于包皮口。7.7最初射出的精液不含精子不能收集，当公猪射出乳白色的精液时，左手将集精杯口向上接近右手小指正下方。最后的精液稀薄基本不含精子，不要收集。7.8要保证公猪的射精过程完整。采精过程中，即使最后射出的精液不收集，也不中止采精，直到公猪阴茎软缩，试图爬下假母猪，再慢慢松开公猪的阴茎。7.9取掉集精杯上的滤纸，盖好集精杯盖，标明公猪耳号，送入化验室橱窗。鲜精品质8.1外观淡乳白色或灰白色，均匀一致，无杂质。8.2气味略带腥味，无异味。8.3活力活力≥70%。8.4畸形率畸形率≤15%。8.5检测方法检测方法按ＧＢ/Ｔ25172－2010执行，并做登记。精液营养液、冷冻稀释液、BTS解冻液配制9.1营养液配制营养液配方，见附录Ａ。9.2冷冻稀释液配制冷冻稀释液配方，见附录Ａ。9.3BTS解冻液BTS解冻液，见附录Ａ。鲜精处理10.1精液稀释要求最终稀释密度密度4亿/mL。10.2预稀释10.2.1营养液先预热到32℃。10.2.2将活力检测合格的鲜精，记录好精液密度、剂量等相关数据，按1：1比例与营养液混合均匀。10.2.3预稀释后的精液放入17℃恒温箱内，等同温至17℃后，进行离心操作。10.3离心10.3.1将预稀释精液装入100mL的离心管内，在17℃和重力900g条件下离心15min。10.3.2精液离心好后，吸走离心管的上清液。10.4稀释10.4.1冷冻稀释液预热至17℃。10.4.2以每毫升4亿的最终稀释浓渡，计算出需要的冷冻稀释液。10.4.3将2/3冷冻稀释液加到离心管中，以吸吐方式混合均匀、合并，再用剩下的1/3冷冻稀释液洗涤离心管底，合并。10.5平衡将稀释好的精液放至17℃水浴杯里，一同放进4℃冰箱，平衡4h。10.5分装10.5.1细管上应标明生产场、公猪品种、公猪号、生产日期。10.5.2检查灌装好的细管精液，将有气泡、未灌满的不合格的细管精液捡出。10.5.3将分装好的细管精液铺放在冷冻支架上。10.6冷冻10.6.1冷冻方式程序冷冻。在程控冷冻仪的冷冻柜里，以每分钟下降30℃的速度填充液氮把精液冷冻。自制冷冻箱或泡沫箱冷冻。冷冻箱的深度应该在50cm以上，使用前先将倒入液氮冷却10min以上。冷冻支架与液氮面保持2cm、冷冻8min即可。10.6.2将冷冻好的细管精液包装好，外包装上标明品种、猪号、支数、生产日期等。解冻11.1BTS解冻液预热至26℃。11.2从液氮罐中取出2～3支细管精液，迅速放到38℃水中，解冻15s，或50℃水中，解冻7s。11.3剪开细管精液封口端，挤入数滴精液至1mlB