TSPPHN 004-2024 瓜类蔬菜病毒病综合防控技术规程

ICS01.040.65CCSB15/19湖南省植物保护学会团体标准T/SPPHN004-2024瓜类蔬菜病毒病综合防控技术规程CodeofIntegralPreventionTechnologyoftheCucurbitsVegetableViralDiseases2024-06-05发布 2024-06-05实施湖南省植物保护学会 发布T/SPPHN004-2024T/SPPHN004-2024前 言本文件是根据GB/T1.1-20201本文件由湖南省植物保护学会提出。本文件由湖南省植物保护学会归口。IT/SPPHN004-2024T/SPPHN004-2024PAGEPAGE10瓜类蔬菜病毒病综合防控技术规程范围本标准规定了瓜类蔬菜病毒病的术语和定义、发生流行规律、病害诊断、检测等技术要求。本标准适用于黄瓜、冬瓜、西葫芦、南瓜等瓜类蔬菜病毒病的综合防控。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB4285 农药安全使用标准GB8321 农药合理使用准则GB16715.1 瓜菜作物种子 第1部分：瓜类NY/T393 绿色食品农药使用准则术语和定义GB/T35333和界定的以及下列术语和定义适用于本文件。下列术语和定义适用于本标准。绿色防控技术 Greencontroltechnology葫芦科蔬菜Cucurbitaceaevegetables瓜类蔬菜主要包括黄瓜、西葫芦、南瓜、冬瓜等作物。病毒病Viraldisease病。发生与流行规律瓜类蔬菜病毒病主要由小西葫芦黄花叶病毒（Zucchiniyellowmosaicvirus,ZYMV）和黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus,CMV）等侵染引起。ZYMV和CMV月底至6ZYMV和CMV也可以通过机械摩擦和种子带毒传播。田间整枝、打杈、搭架、施肥、除草、采果ZYMVCMV能够侵染包括葫芦科在内的85科365属1000病害诊断病害田间诊断瓜类蔬菜病毒病的危害症状主要为叶片花叶、黄化、泡状突起、皱缩、畸形等症状（见附录A图A1）。生物学检测分子生物学检测asyureantNAKt）NA。以提取的总RNAcDNAcDNA为模板进行PCR扩增，PCR防治原则防治方法种苗防治选用抗病、优质、适合当地栽培条件的各类符合国家种子质量的瓜类蔬菜品种。种子消毒处理50℃～55℃的热水浸种10～1530℃温开水浸泡种子1～2h，搓去种子表面粘液；再用10%的磷酸三钠溶液浸种20min，捞出后用清水冲洗干净，然后催芽。培育无病壮苗，防止苗期病虫害育苗前，彻底清除苗床枯枝残叶和杂草，施入充分腐熟的有机肥和少量无机肥，深耕土壤30cm左50目以农业防治合理轮作倒茬合理轮作，实行2~3年以上轮作倒茬，有条件地区实行与水稻轮作，不要连续两年在同一块田种植瓜类蔬菜。选种无毒种苗严格选用无病虫健康的壮苗移栽到大田。田园卫生深耕耙耱，降低病虫基数肥水管理物理防治灯光诱杀防虫网防治传毒媒介昆虫40色板诱杀利用蚜虫、粉虱、蓟马等成虫对黄色或蓝色有较强趋性的特性，在田间放置30cm×40cm的黄350400hm21020cm，粘虫板满昆虫后及时更换。生物防治保护天敌保护田间有益昆虫，利用生物多样性控制传毒媒介昆虫。田间释放天敌控制传毒媒介昆虫药剂防治在黄瓜、节瓜等定植后（1~3）d，将25%噻虫嗪水分散粒剂稀释至1000~1500倍，按每株50mL灌根处理，对传毒媒介蓟马和粉虱进行预防。5%（蚜虫）或10%（蓟马、粉虱）时开始用药，选用高效、低毒、低残留、环境友好,2次及以上。加强病虫测报，实行统防统治建立防控档案每次防治前,对田间瓜类蔬菜病毒病发生、前茬作物、防治等信息进行调查与登记，具体调查内容见附录D。附录A（资料性附录）瓜类蔬菜病毒病主要症状瓜类蔬菜病毒病症状主要为叶片花叶、黄化、泡状突起、皱缩、畸形等，见图A1。花叶 黄化泡状突起 皱缩畸形 畸形图A1 瓜类蔬菜感染病毒病的主要症状附件B（规范性附录）病毒生物学检测和分子生物学检测病毒生物学检测病毒摩擦接种方法（400~500目）均匀撒到待接种的叶片表面,在营养钵内插上标签，注明处理及接种时间；左手食指和中指托住叶病毒分离与纯化采用上述摩擦接种方法，将汁液中病毒接种于枯斑寄主上；待寄主表现单斑后(B1A)，将单个枯斑切下，用接种缓冲液研磨，再接种枯斑寄主；第二次出现单斑后，再次切取单个枯斑,接种于枯斑寄主；第三次出现枯斑，切取单个枯斑，接种于系统寄主，出现系统症状(B1B)，取叶片进行检测。病毒的保存病毒致病力测定将经分离纯化的病毒分离物分别接种到寄主植物敏感品种上，测定其致病力的强弱(见图B2)。A B图B1 ZYMV分离物接种枯斑寄主和系统寄主的症状A.苋色藜上枯斑；B.普通烟上系统花叶A B图B2 ZYMV分离物接种南瓜和西葫芦的症状A.南瓜上泡状花叶；B.西葫芦上系统花叶病毒分子生物学检测RNAEasyPurePlantRNAKit购自北京全式金生物技术有限公司。应用该试剂盒提取瓜类蔬菜叶片组织的总RNA，具体步骤参考试剂盒操作手册。RT-PCR反转录反转录试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司，以提取的总RNA为模板，随机引物进行反转录，合成cDNA。具体反应体系及步骤如下：第一步配制反应混合液（表B1）表B1 反应混合液试剂体积TotalRNA1μL（50ng～5μg）OligodTPrimer（50μM）1μLdNTPMixture(10mMeach)1μLddH2O7μL总体积10μL第二步：反应混合液孵育将上述反应混合液65℃孵育5min,冰上迅速冷却。第三步：配制反转录反应液（表B2）B2反转录反应液试剂体积反应混合液10μL5×PrimeScriptIIBuffer4μLRNaseInhibitor(40U/μL)0.5μLPrimeScriptIIRTase(200U/μL)1μLddH2O4.5μL总体积20μL第四步：反转录反应421h后，953min终止反应。反转录反应液保存于-20。反应引物ZYMV的特异性RT-PCR引物见表B3。表B3ZYMV的特异性RT-PCR引物病毒名称引物序列（5ˊ→3ˊ）片段长度ZYMVCPF1：GTACAACACACGAGCGTCTC511bp430bpCPR：AGTGTGCCGTTCAGTGTCTTCGCPF2：GATGGGAGTTGTAATGAATGG反应体系ZYMV的特异性RT-PCR反应体系见表B4表B4ZYMV特异性RT-PCR反应体系试剂体积PremixExTaqVersion2.012.5μLCPF1（10μM）1.0μLCPF2（10μM）1.0μLCPR（10μM）1.0μLcDNA(反转录反应液10倍稀释液)1.0μLddH2O8.5μL总体积25μL反应程序94℃预变性4i94℃变性30sec6℃30se7℃延伸45sec2个循环，7℃延伸10min。琼脂糖凝胶电泳取扩增产物8μL，加入到1.5%琼脂糖凝胶（100mL1.5%琼脂糖凝胶含有5µLDNAgreen）的点样孔内。电泳缓冲液1×TAE，120V，电泳30min。检测结果判定电泳结束后，取出琼脂糖凝胶，通过凝胶成像仪观察结果并拍照记录，扩增片段与预期目标条带B.4123567ZYMV；B.44ZYMV；图B3瓜类蔬菜是否感染ZYMV的RT-PCR检测结果T/SPPHN004-2024T/SPPHN004-2024CPAGEPAGE1（规范性附录）防治瓜类蔬菜上传毒媒介昆虫主要农药一览表表C1防治瓜类蔬菜上传毒媒介昆虫主要农药一览表媒介昆虫防治农药瓜类蔬菜施用方法防治时期蚜虫40%、70%啶虫脒水分散粒剂黄瓜喷雾虫株率≧5%40%啶虫脒可溶粉剂黄瓜喷雾100克/升顺式氯氰菊酯乳油黄瓜喷雾35%高氯·矿物油乳油黄瓜喷雾36%噻虫啉水分散粒剂黄瓜喷雾1.5%苦参碱可溶液剂黄瓜、苦瓜、西葫芦喷雾10%氟啶虫酰胺水分散粒剂黄瓜喷雾10%溴氰虫酰胺可分散油悬浮剂黄瓜喷雾10%溴氰虫酰胺悬浮剂黄瓜喷雾10%异丙威烟剂黄瓜（保护地）点燃放烟蓟马19%溴氰虫酰胺悬浮剂黄瓜喷雾虫株率≧10%20%呋虫胺可溶粒剂黄瓜（保护地）喷雾25%噻虫嗪水分散粒剂节瓜喷雾5%多杀霉素悬浮剂节瓜喷雾28%杀虫·啶虫脒可湿性粉剂节瓜喷雾200克/升丁硫克百威乳油节瓜喷雾粉虱19%溴氰虫酰胺悬浮剂黄瓜喷雾虫株率≧10%10%溴氰虫酰胺可分散油悬浮剂黄瓜喷雾20%呋虫胺可溶粒剂黄瓜（保护地）喷雾25%噻虫嗪水分散粒剂黄