兔出血症防控技术规程

1兔出血症防控技术规程本标准规定了兔出血症的预防、诊断和疫情控制等要求。本标准适用于兔出血症的预防、实验室诊断、临床诊断、流行病学调查和兔出血症暴发后的疫情控制，也适用于分离毒株的鉴定和对无特定病原体(SPF)兔的监控。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程NY/T541动物疫病实验室检验采样方法NY/T572兔病毒性出血病血凝和血凝抑制试验方法NY/T3075畜禽养殖场消毒技术NY5131无公害食品肉兔饲养兽医防疫准则DB32/T1458兔出血症病毒的检测RT-PCR方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1兔出血症病毒rabbithemorrhagicdiseasevirus（RHDV）杯状病毒科（Caliciviridae）、兔病毒属（Lagovirus）病毒。含有一条单股正链RNA，由7437个核苷酸组成，只有2个开放阅读框架(ORF)，并由ORF1的3′端部分序列编码RHDV衣壳蛋白VP60，其基因片段长度为1740bp，共编码579个氨基酸。3.2兔出血症rabbithemorrhagicdisease（RHD）由兔出血症病毒引起的一种以急性、高度传染性、大面积死亡为特征的兔传染病。4预防4.1生物安全管理4.1.1养殖场条件养殖场应符合NY5131规定的条件。4.1.2隔离应对引进家兔进行隔离观察15d～30d，经检查健康合格后，方可将引进家兔与本场家兔一起饲养。4.1.3清扫和清洗2应对兔舍、车辆等用具、笼具等设备、兔场环境等进行定期清扫和清洗。4.1.4消毒可参照NY/T3075-2017进行。养殖场应建立严格的卫生（消毒）管理制度，并定期对兔舍、车辆等用具、笼具等设备、饮水及兔场环境等进行定期严格消毒；兔场出、入口处应设置消毒池，内置有效消毒剂；兔舍门口应设置消毒盆、消毒垫等，并放置消毒剂。4.1.5防鼠、防虫、防蝇兔舍内应有防鼠、防虫、防蝇等装置。4.2免疫监测定期随机采集兔场家兔血液样品，制备血清，用红细胞凝集抑制试验（HI）检测血清中RHDV抗体，具体方法可参照NY/T572-2016进行。如群体血清阳性率低于85%，应实施疫苗免疫接种。4.3免疫接种4.3.1疫苗应使用经兽医主管部门批准使用的含有兔出血症病毒抗原的疫苗。4.3.2免疫程序一般情况下，应按疫苗的使用说明书规定的程序进行免疫，也可参照附录A实施。5诊断5.1诊断流程依据兔出血症流行病学特点、临床症状、病理学变化做出初步诊断,然后经病原学检验进行确诊。5.2流行病学特点兔出血症流行病学有以下特点：a)易感动物该病仅感染兔。小于5周龄的兔子感染后不易死亡，无明显临床症状；2月龄以上家兔感染后，死亡率高达70%～90%。b)传染源感染RHDV的兔子是主要的传染源，包括感染病死兔和带毒未死的兔子。c)传播途径病毒通过直接和间接途径传播。病死兔和带毒兔通过其排泄物、分泌物、血液、兔毛等污染饮水、饲料、用具、笼具、空气等，引起易感兔发病和疫病流行。人、鼠、蚊、蝇和其它畜禽等也可机械性地传播病毒。5.3临床症状兔出血症有以下临床症状：a)最急性型常发生在非疫区或流行初期。患兔死前无任何明显症状，常表现为突然死亡，死后勾头弓背或“角弓反张”，少数兔鼻孔流出带有泡沫的血液。b)急性型病程一般12h～48h，患兔精神萎顿、不爱活动、食欲减退、喜饮水、呼吸迫促、体温达41℃。临死前表现狂躁，倒地后，四肢划动，抽搐或惨叫，很快死亡。少数死兔鼻孔流出少量带有泡沫的血液。c)亚急性型多发于2月龄以内的幼兔，兔体消瘦，被毛焦枯无光泽，病程2d～3d或更长，随后死亡。5.4病理学变化3最急性、急性病死兔剖检时可见全身实质器官淤血、出血。气管软骨环淤血，气管内含带有泡沫的血液；胸腺水肿，并有大小不等的出血点；肺脏出血、淤血、水肿、有大小不等的出血点；肝脏淤血、肿大、质地变脆、色泽变淡；脾脏肿大、淤血，呈黑紫色；肾脏淤血、出血；十二指肠、空肠粘膜出血。5.5病原学检验5.5.1样本采集、保存和运输样本采集、保存和运输参照NY/T541-2016执行，并按照GB16548处理病死家兔。5.5.2红细胞凝集试验（HA）红细胞凝集试验可参照NY/T572-2016进行。5.5.3核酸识别技术—RT-PCR方法核酸识别技术可参照DB32/T1458-2009进行。5.5.4非免疫兔接种技术非免疫兔接种技术参见附录B。5.6结果判定5.6.1疑似兔出血症符合5.2和5.3或/和5.4的。5.6.2确诊符合5.6.1且符合5.5.2或者5.5.3或者5.5.4的。6疫情控制6.1隔离封锁发生兔出血症时，应紧急隔离封锁发病兔场，严禁兔场人员，特别是饲养及管理人员互相串舍，同时严禁家兔相关物品流通。6.2消毒应对病毒污染和可能被污染的一切场所、用具和物品等进行清洁、消毒，并对养殖场实施灭鼠、灭蚊蝇等防控措施。6.3病死家兔处理按照GB16548处理病死家兔。6.4紧急接种当发生兔出血症时，应对其他未死亡家兔进行紧急预防接种。用经兽医主管部门批准使用的含有兔出血症病毒抗原的疫苗，2～4倍剂量/只，颈部皮下注射或用兔出血症病毒高免血清，4毫升～6毫升/只，颈部皮下注射，7天～10天后，再注射一次。4附录A（规范性附录）免疫程序A.1繁殖种兔群A.1.1繁殖母兔应每年2次定期免疫接种。a)用符合规定的疫苗，2倍剂量/只，颈部皮下注射；b)6个月后，用符合规定的疫苗，2倍剂量/只，颈部皮下注射。A.1.2种公兔应每年2次定期免疫接种。a)用符合规定的疫苗，1个剂量/只，颈部皮下注射；b)6个月后，用符合规定的疫苗，1个剂量/只，颈部皮下注射。A.2非繁殖青年、成年兔群应每年2次定期免疫接种。a)用符合规定的疫苗，1个剂量/只，颈部皮下注射；b)6个月后，用符合规定的疫苗，1个剂量/只，颈部皮下注射。A.3肉兔A.3.170日龄出栏的肉兔在家兔35日～40日龄时，用符合规定的疫苗，2倍剂量/只，颈部皮下注射。A.3.270日龄以上出栏的肉兔a)在家兔35日～40日龄时，用符合规定的疫苗，2倍剂量/只，颈部皮下注射；b)在家兔60日～65日龄时，用符合规定的疫苗，1个剂量/只，颈部皮下注射。A.4仔、幼兔a)35日～40日龄用符合规定的疫苗，2倍剂量/只，颈部皮下注射；b)60日～65日龄用符合规定的疫苗，1个剂量/只，颈部皮下注射。5附录B（规范性附录）非免疫兔接种技术B.1材料B.1.1实验动物2月龄以上未免疫兔出血症疫苗的临床健康家兔，兔出血症病毒抗体HI效价≦B.1.2兔出血症病死兔肝脏悬液取肝脏组织，剪碎，按1:10加入PBS，匀浆，反复冻融3次，于-20℃保存备用。B.1.3疑似兔出血症病死兔肝脏悬液处理方法同B.1.2。B.2接种方法用兔出血症病死兔肝脏悬液颈部皮下注射实验动物5只，1mL/只，作为阳性对照组；用疑似兔出血症病死兔肝脏悬液颈部皮下注射实验动物5只，1mL/只，作为疑似样品组，同时设立不接种肝脏组织的实验动物5只，作为阴性对照组，分别于隔离器中饲养，观察7日，记录试验兔临床症状、死亡情况和病理学变化，并采集病死兔肝脏样品做红细胞凝集（HA）试验，具