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文档简介

血涂片制备和染色【目的】掌握血涂片的制备和染色。【原理】把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用瑞氏染液染色。不同的细胞种类及细胞的不同成分，对酸性及碱性染料的结合能力不同，而使各种细胞呈现出各自的染色特点。【器材】载玻片、推片、洗耳球、显微镜、香柏油、拭镜纸、清洁液。【标本】EDTA，静脉血。瑞氏染色法【试剂】1．瑞氏(Wright)染液(1)I液:包含瑞氏染料1.0g、纯甲醇600ml、甘油15ml。(2)Ⅱ液:磷酸盐缓冲液(pH6.4～6.8)，含磷酸二氢钾0.3g、磷酸氢二钠0.2g、蒸馏水加至1000ml。【操作】(1)采血(2)推片，推片与载片夹角30~45°平稳地向前移动，血膜应呈舌状，头、体、尾三部分，且清晰可见。(3)干燥:晃动。37℃温箱中促干。(4)染色:将玻片平置于染色架上，滴加(Ⅰ液)3～5滴，约0.5～lmin后，滴加等量缓冲液(Ⅱ液)，摇动玻片混匀。(5)冲洗:5-10min后用流水冲去染液，待干。(6)观察结果:将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。一张良好血涂片的要求：

厚薄适宜头体尾明显细胞分布均匀边缘整齐两端和两边留有空隙标准血涂片血涂片分布不均主要原因：推片边缘不齐、用力不均匀、载片不清洁

四、瑞氏染色法(Wright’sstain)

1.

瑞士染液成分：

①

美蓝（亚甲蓝）：M＋碱性染料，易氧化称为天青。

②

伊红：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-

ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定细胞形态；蛋白质呈颗粒或网状，增加细胞与染料的接触。H2O甲醇四、瑞氏染色法(Wright’sstain)

1.

染液成分：

①

美蓝（亚甲蓝）：M＋碱性染料

②

伊红（曙红）：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-

ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定细胞形态；蛋白质呈颗粒或网状，增加细胞与染料的接触。H2O甲醇

pH的影响：

H＋：碱性染料亲和力下降，增强伊红着色，出现红染OH－：酸性染料亲和力下降，增强美蓝着色，出现蓝染PBS缓冲液：pH6.4－6.8以维持恒定的pH环境3.染色方法

①

固定：滴加染液3~5滴，固定细胞0.5~

1min

②

染色：加1~2倍PBS缓冲液，混匀染5~10min

③

冲洗：用流水冲去染液或加PBS缓冲液冲洗，待干。4.染色结果

①

外观：淡紫红色

②

镜下：

红细胞――粉红色白细胞――胞核、胞浆及颗粒显示特有的染色特征5.注意事项

①

血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落；

②

染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好；

③

染液不能过少，以防蒸发沉淀；④冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。冲洗时间也不能长；⑤

染色过淡时可复染，复染时先将染料稀释好；

⑥

染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色；

⑦

分类最佳区域为体、尾交界处。

4.影响瑞氏染色

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