药物杂质检查-特殊杂质常用的检查方法（药物分析课件）

(一)紫外分光光度法

(二)可见分光光度法（三）红外光谱法（四）荧光分析法

四光谱行为差异光谱法肾上腺素肾上腺酮（一）紫外分光光度法——利用药物和待检杂质对光选择吸收性质的差异进行

例:肾上腺素中肾上腺酮的检查

四光谱行为差异

例:肾上腺素中肾上腺酮的检查规定：A310nm≯0.05方法限量计算杂质限量%=10012/1000100=0.0554530.05××

例:肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺酮的C(g/100mL)=A/E1%1cm（三）红外分光光度法

主要用于药物中无效或低效晶型的检查。某些多晶型药物由于其晶型结构不同，一些化学键的键长、键角等发生不同程度的变化，从而导致红外吸收光谱中某些特征峰的频率、峰形和强度出现显著差异。利用这些差异，可以检查药物中低效（或无效）晶型杂质，结果可靠，方法简便。

1酸碱性的差异例：苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查,甲基橙不得显红色

2氧化还原性的差异

例：氯化物中碘化物检查供试品与含亚硝酸钠的淀粉指示剂不得显蓝。

Cl－的氧化电位高(1.35)不能被氧化为Cl2.I-的氧化电位低(0.53)能被氧化为I2

二化学性质差异

3杂质与一定试剂反应产生沉淀间苯二酚中邻苯二酚检查4杂质与一定试剂反应产生颜色

Aspirin中游离水杨酸的测定5杂质与一定试剂反应产生气体盐酸乙基吗啡中胺盐检查.二化学性质差异检查原理紫堇色（有酚羟基）阿司匹林+Fe3+×（无酚羟基）水杨酸+Fe3+Aspirin中游离水杨酸的测定水杨酸鉴别反应

色谱法

(一)薄层色谱法(TLC)

(二)高效液相色谱法(HPLC)

(三)气相色谱法(GC)

三色谱行为差异

根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的解析能力不同(Rf值的差异),加以分离和检查.(一)薄层色谱法(TLC)

三色谱行为差异

本法灵敏、简便、快速；不需特殊的设备、费用低；分离和鉴定同步进行.1.TLC法特点

三色谱行为差异1)杂质对照品法

——适用于杂质已知并有杂质对照品的情况.

方法

根据杂质限量,取供试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液,分别点于同一薄层板上展开,定位后进行检查.

三色谱行为差异2.TLC法应用供试品对照品

判断：供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点优点：同一物质，同一Rf值比较，准确度高、直观性强；缺点：需要杂质对照品。——适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况.2)供试品溶液自身稀释对照法(高低浓度对照法)

三色谱行为差异2.TLC法应用例：氢化可的松中“其他甾体”检查供试液:3mg/ml对照液:60

g/ml(供试液稀释50倍)判断:供试液的杂质斑点数≯3个,且供试液的杂质斑点颜色≯对照液主斑点颜色.仅限于杂质斑点颜色与主成分斑点颜色相同或相近优点：以供试品的稀溶液作为对照液，不需要杂质对照品，简单、价廉，还可配成几种限量的对照溶液缺点：不同物质，不同Rf值的比较，准确度差、直观性差

3)杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照法并用当药物中存在多个杂质，有杂质对照品的采用杂质对照品法检查，没有的则采用供试品溶液自身稀释对照法检查。

——选用质量符合规定的与供试品相同的药物作为对照品.4)对照药物法

三色谱行为差异样（1)5mg/ml对(3)5mg/ml样（2)0.2mg/ml马来酸麦角新碱中有关物质的检查判断：１）主斑点颜色与位置应与３）主斑点颜色与位置一致，所显杂质斑点颜色不得深于３）中对应的杂质斑点，并不得有３）以外的杂质斑点；２）除主斑点外，不得显任何杂质斑点。5)以实验条件下显色剂对杂质的检出限来控制

根据供试品与杂质的对照品保留时间相同测定各杂质峰面积.(二)高效液相色谱法(HPLC)特点分离效能高、应用范围广，能准确、快速、分离分析同时进行

三色谱行为差异中国药典规定正文各品种项下的HPLC条件不得任意改变固定相种类、流动相组分、检测器类型可适当改变色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速和比例、柱温、进样量、灵敏度１、系统适用性试验

ChP

每次检测前，应对仪器进适用性试验，应达到规定要求

理论板数（n）分离度（R）重复性（RSD）拖尾因子（T）（一）理论板数（n）

如测得n低于规定，应改变柱长或载体性能、重填色谱柱等以求达到（二）分离度（R）

除另有规定外，R≥1.5（三）重复性（RSD）

1×5峰面积

3×3校正因子RSD≤2.0%（四）拖尾因子（T）

除另有规定外，T应0.95~1.051.内标法加校正因子测定供试品中某个杂质的含量

准确测定杂质含量

方法

内标+杂质对照品→溶液，进样，测定，计算校正因子

内标物+杂质对照品→校正因子内标物+样品→杂质含量内标物+杂质对照品→校正因子内标物+样品→杂质含量

供试品+内标→供试品溶液，进样，测定杂质和内标峰面积或峰高，计算杂质量2.外标法测定供试品中某个杂质的量供试品→供试品溶液

杂质对照品→对照品溶液进样，测定，计算杂质的含量

缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样

3.加校正因子的主成分自身对照法

方法将校正因子载入药品质量标准

分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分峰面积比较，计算供试品中杂质的量。

例：检查红霉素中红霉素B、C组分及有关物质。判断：红霉素B峰（0.7）和红霉素C（1.0）峰校正后的峰面积均不得大于对照液主峰面积（5.0%）红霉素稀醇醚校正后的峰面积不得大于对照溶液主峰面积的3/5(3.0%)

其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（5.0%）4.不加校正因子的主成分自身对照法

杂质峰面积与主成分峰面积相差悬殊时应用。

方法

分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积，与对照溶液主成分峰面积比较，计算供试品中杂质的量。

优点：不需杂质对照品，可同时控制各个杂质及其总量限度

缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，准确度差例：氧氟沙星中有关物质的检查判断：

供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（0.2%）各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2.5倍。5.峰面积归一化法

取一定量供试品溶液进样，测定各杂质及药物的峰面积，计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不能超过限量。注意溶剂峰不应计算在总峰面积内。例如：利巴韦林中有关杂质的检查：对照品液(5μg/ml)进样10μl,调灵敏度，使主峰达满量程的20%～25%

样品液(0.4mg/ml)进样10μl,杂质∑Ai＜(∑Ai+A主）的1.0%

优点：不需杂质对照品，简便易行。

缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，控制杂质峰面积百分率不一定就是杂质限量，准确度差，适用于粗略测量供试品中杂质的含量。

(三)气相色谱法(GC)——用于药物中挥发性杂质的检查,如药物中残留溶剂、农药残留量等.

三色谱行为差异(四)毛细管电泳法(HPCE)——用于酶类药物中酶类杂质的检查，方法与HPLC相同。（二）、化学性质的差异（一）、物理性质的差异二特殊杂质常用的检查方法（三）、光学性质的差异（四）、色谱性质的差异

臭味及挥发性差异颜色差异溶解行为差异旋光性质的差异对光吸收性质的差异吸附或分配性质的差异一物理性质差异

2.杂质无挥发性利用药物在室温或加热挥发后,遗留残渣于一定温度加热至恒重,其重量不得超过规定.

例：乙醇中不挥发物的检查.(一)嗅味及挥发性差异1.杂质有特殊气味：例：乙醇中的杂醇油（异臭）一物理性质差异

药物自身无色

生产中引入有色的有关物质或分解产物.例：磺胺嘧啶原料药颜色检查取本品2.0g,加氢氧化钠试液10ml溶解后，加水至25ml，溶液应澄清无色；如显色，与黄色3号标准比色夜比较，不得更深。

——磺胺苯环上胺基被氧化生成有色偶氮苯化合物.(二)颜色差异一