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3牛疣状毛癣菌诊断技术规范NY/T541动物疫病实验室检验采样方法3.1牛疣状毛癣菌病TrichophytonverrucosumforBovine4形态与生物学特性乏）、鼠尾形的大分生孢子（非常罕见）或链状厚膜孢当牛出现以下部分或全部症状时，可作为初步诊4保定患牛，使用75%酒精棉球涂擦患部消毒，取无菌手术刀刮取患处真菌培养箱培养10d，观察生长情况及菌落对照牛疣状毛癣菌典型菌落形态和菌体形态特征进行初步鉴别（取少量病料（皮屑、被毛等），放在清洗干净的载玻片上，滴加改良复方KOH溶入30mL蒸馏水中溶解后，依次加入DMSO40mL，甘油20mL，摇匀后加入蒸馏水至1000mL混匀）1~结果判断：将同一病料连续重复三次检查，以病料中查到特征性菌丝和孢子为将生长的疣状毛癣菌菌落转种在溴甲芬紫酪蛋白牛奶肌醇（BPC）培养基结果判断：25℃培养4~7天可在菌落周围将纯化后的菌种接种到SDA培养基中，27℃5库中已有序列比对分析，并选取GenBank中已登录的参考菌株，利用MEGA-X制作系统发育树，判定从发病的牛场选择有典型皮肤真菌病的牛，在病变与健康皮肤组织交界处，用无菌参照GenBank中疣状毛癣菌asparaginasefamilyprotein基因，使用Prim6霉素B软膏、克霉唑软膏等抗真菌药物进行外敷；口服酮康唑片、灰黄霉素片、制霉菌素片、克霉唑片789常规检测方法步骤如下：挑取疣状毛癣菌菌落于生理盐水配置成1×106CFU/mL。准备无菌培养皿，放入火入30mL蒸馏水中溶解后，依次加入DMSO40mL，甘油20mL，摇匀后加入蒸馏水至1000m将纯化得到的疣状毛癣菌接种至溴甲芬紫酪蛋白牛奶肌醇（BPC）A/C：疣状毛癣菌菌落正面；B/D：疣状毛癣菌菌落A/B:典型链状孢子结构；C:微分生孢子；D/E:大分生孢子将生长的疣状毛癣菌菌落转种在溴甲芬紫酪蛋白牛奶肌醇（BPC）培养基上，25℃培养4～7天。asparaginasefamilyprotein基因，使用PrimerExpress6M——DL2000标准分子量（TakaRa将有目的条带的扩增产物送往公司测序。将测序结果与NCBIGenBank数据库中已有序列比对分

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