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文档简介

1布鲁氏菌竞争磁微粒CLIA抗体检测方法本文件规定了布鲁氏菌竞争磁微粒CLIA抗体检测方法的试剂下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适NY/T5414缩略语CLIA：化学发光免疫分析法（ChemiluminescenceImmunoassELISA：酶联免疫吸附试验（EnzymeLinkedImmunosorbentAss2—离心机：最高转速：16000rpm；—1.5mL尖底离心管；本方法使用磁微粒化学发光免疫分析法，将布鲁氏菌脂多糖作为抗原偶联于3μm羧基磁微粒上，采用竞争法原理，同时加入待检血清和布鲁氏菌单抗AP酶标记的酶标抗体工作液进行竞争反加入化学发光底物，读取发光值，待检样本抗体含量和发光值呈负相关。本方法通过检测国家标准品建立标准曲线，进而定标工作校准品浓度；再通过检测布鲁氏菌抗体工作校准品建立校准曲线，而后将待测样本结果代入校准曲线计算布鲁氏菌抗体含量，判定阴阳性结果。3样品采集按照NY/T541进行。无菌注射器静脉采血，不少于2m一周内检测，可置2℃~8℃条件下保存，若超过一周检测，应置于-20℃以下冷冻保存。无离子水或灭菌蒸馏水应符合GB/T669操作步骤9.1校准曲线拟合9.2校准曲线校准将布鲁氏菌抗体产品校准品1和产品校准品2放入样本架，按说明书对校准曲线进行校准。4b)同一批次试剂盒使用周期超过28d；9.4样品检测d)计算：将发光值（RLU）代入校准曲线，计算样本中9.5计算结果290.5IU/mL）为横坐标、相应检测发光值为纵坐标拟合四参数为校准曲线，四参数模式为Y=(a-d)/[1+(x/c)*b]+d，当R2高于0.99时，可用于结果计算和判定。将待检样品检测发光值代入校准曲线，计算结果即为待检样本中布鲁氏菌抗体含量。56A.125×浓缩洗液配制表A.125×浓缩洗液配方62.16g225.00g13.75g加灭菌蒸馏水至600mL，溶解，定容至10A.2校准品稀释液配制名称称量磷酸氢二钠8.00g磷酸二氢钠0.20g牛血清白蛋白1.00g海藻糖5.00g0.50mL7），抗体水平合格标准：对采集的血清样品，按照GB/T18646中的ELISA方法进行抗体水平检测，以检测样本为阳性的最大稀释梯度判断布鲁氏菌病抗体水平，若结果大于ELISA检测临界值，则为合格B.2布鲁氏菌抗体工作校准品制备使用校准品稀释液梯度稀释布鲁氏菌国家标准血清（购自中国食品药品检定研究院，批号相应检测发光值为纵坐标拟合四参数（四参数模式为Y=(a-d)/[1+(x/c)*b]+d）为标准曲线。89名称范围标定11652769.6~2282696.2标定2716251.7~1169460.8标定3348736.6~

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