HPV的讲课资料(市级)

人乳头状瘤病毒感染与宫颈癌的关系北京大学第一医院妇产科赵健第1页，共55页。

1977年Laverty在电镜中观察到宫颈癌活检组织中存在人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)颗粒,70年代末ZurHausen首先提出人乳头瘤病毒与宫颈癌发病可能有关的假想后,国内外学者进行了大量的研究,并获取了许多证据,1995年国际癌症协会(IARC)专题讨论会的学者们认为:HPV感染是宫颈癌的主要病因。HPV的历程第2页，共55页。人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）是一种感染皮肤和粘膜鳞状上皮细胞的小DNA病毒，病毒外层为衣壳蛋白组成的外壳，内部包裹着病毒核酸。HPV的结构第3页，共55页。HPV的结构(外观)第4页，共55页。HPV病毒颗粒直径约55nm,由72个病毒壳粒包被。HPV的结构(外观)第5页，共55页。HPV的结构(基因组)HPV基因由3个部分组成早期区(earlyregion,E)含有E1、E2、E4、E5、E6、E7共6个基因,是维持病毒复制、编码病毒蛋白、维持细胞内病毒的高拷贝数的基因晚期区(lateregion,L)长控制区(longcontrolregion,LCR)第6页，共55页。第7页，共55页。E2调控蛋白E2蛋白通过与病毒DNA结合抑制病毒基因转录。HPV基因整合宿主DNA后，往往丢失E2基因，从而失去对E6、E7基因的控制，导致细胞癌变病毒DNAE2蛋白第8页，共55页。E6癌蛋白

E6蛋白全长160氨基酸，包含两个锌指结构。高危型HPVE6同时具有抗细胞凋亡作用和干扰p53蛋白作用。E6蛋白首先与细胞泛素蛋白酶E6AP结合为复合体E6/E6AP,然后与p53蛋白结合，促使p53蛋白降解。。E6蛋白通过E6结合蛋白(E6AP、E6TP1)，结合hTERT启动子中的E-box元件，促进端粒酶基因的转录，从而促进细胞永生化。第9页，共55页。E7癌蛋白

E7蛋白较小，约100个氨基酸，同样具有两个锌指结构。E7蛋白是HPV致癌的关键分子，E7分为CR1、CR2、CR3和C端结构域。E7蛋白结合pRB蛋白使转录因子E2F被释放。E2F是一类转录激活因子，一般情况下受pRB蛋白的负调控，当pBR与E2F解离后，E2F即可激活基因转录，促进了众多细胞增殖相关基因的转录。。E7蛋白还可以结合RB相关的porket蛋白pRB、p107、p130等，导致这些蛋白通过泛素途径降解。第10页，共55页。HPV致癌机理第11页，共55页。高危HPV整合时E2断裂、E6、E7激活E6与P53结合，激活c-myc,H-ras，凋亡↓E7与Rb结合，激活P16、cyclinE，增殖↑激活端粒酶等使细胞增殖和永生化

FerenczyA,FrancoE.Lancetncol,2002;3:11HPV整合是宫颈癌发生的关键第12页，共55页。

HudelistG,etal.HPV6and11非整合状态正常上皮和CINI/IIHPV16and18非整合状态CINIII/CISHPV16(50%)HPV18(94%)整合状态结论：HPV-16型整合对致癌非必须，18型整合对致癌非常主要GynecolOncol.2004Mar;92(3):873-80.HPV16型的物理状态第13页，共55页。

当某一未知基因组与任何已知型别HPV进行杂交，其同源性小于50％时，被称为是一个独立的新型；而杂交的同源性大于50％，则称为一个亚型；如果仅出现限制性内切酶的酶切位点的数目不同，则被认为是一个突变株。据此标准，到目前为止，从不同人病灶组织中，已鉴定出HPV达70多个亚型，有资料报道为100种以上HPV型。HPV分型第14页，共55页。HPV分型目前世界上已发现的110余种HPV,大约35种型别涉及生殖道感染，约20种与肿瘤有关。根据不同型别HPV与癌发生的危险性高低分为高危型和低危型2种。

危险性型别引起疾病高危型HPV16,18,31,33,35,39,4551,52,56,58,59,68,73,82等

高度子宫颈上皮内瘤样变(CINⅡ、Ⅲ)和宫颈癌低危型HPV6,11,40,42,43,44,54,61,70,72,81,cp6108等

生殖道尤其是阴道下部及肛周皮肤的湿疣类病变和低度子宫颈上皮内瘤样变(CINⅠ)

第15页，共55页。

HPV大家族，超过100个亚型

根据是否会诱发宫颈癌可分为低危：6、11、42、43、44高危：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66及68型低危HPV基因组不能整合进宿主细胞染色体高危HPV基因组能整合进宿主细胞染色体

FerenczyA,FrancoE.LancetOncol,2002;3:11HPV的分型第16页，共55页。HPV感染途径性接触传播丈夫阴茎HPV的存在可使妻子宫颈受染的危险增加9倍，相同的HPV亚型可以在性伴侣中检出，与此相反，处女通常是检测不到HPV感染直接皮肤接触也被认为是主要的传播方式母婴传播母亲生殖道的HPV感染也可以传播至她们的婴儿的口腔中

第17页，共55页。HPV感染潜伏期

低危型HPV感染平均持续时间是4.8个月，高危型HPV感染平均持续时间大概是8个月。HPV感染的最常见的结局是没有明显的临床表现，绝大部分会被机体免疫力自动清除。Richardson,etal.2003第18页，共55页。HPV的免疫应答

机体对HPV的免疫可分为:先天性免疫获得性免疫第19页，共55页。

HPV的感染是非系统性感染，只局限于最初的感染的部位，感染部位的先天性免疫是阻止感染的第一道防线。主要由局部细胞因子和非特异性的效应细胞，如单核细胞、巨噬细胞和NK细胞。先天性免疫第20页，共55页。

HPV感染后可以激发机体产生特异性体液免疫和细胞免疫。针对衣壳蛋白L的IgG和IgA中和抗体在病毒感染的早期较为重要，针对早期蛋白的细胞免疫反应对最终清除病毒可能更为重要。获得性免疫第21页，共55页。HPV感染可能发生的结果潜伏感染（无临床及组织学异常表现）亚临床感染（无症状，有细胞学异常）临床感染（既有临床症状又有细胞学异常）

只有持续的HPV感染才会发生CIN或CC。一般平均8-24月可发生CIN1、CIN2和CIN3，再平均8-12年可发生浸润癌。第22页，共55页。HPV的感染过程第23页，共55页。HPV检测方法1.PCR-HPV2.IIC23.原位杂交第24页，共55页。采样杂交第25页，共55页。REVERSELINEBLOT(RLB)PCR结合杂交的方法第26页，共55页。高危型感染低危型感染第27页，共55页。其原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测。基本实验步骤如下：

1、样本DNA双链被释放并分解为核苷酸单链；

2、DNA单链与RNA探针结合为RNA-DNA杂交体；

3、特异性抗体将RNA-DNA杂交体固定在试管壁或微孔壁上；

4、结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与RNA-DNA杂交体结合，使信号放大；

5、碱性磷酸酶使酶底物发光。杂交捕获(HC)试验第28页，共55页。是否有高危型感染高危型包括13种HPV（16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59和68）HCII的结果第29页，共55页。HPV的流行病学第30页，共55页。WoodmanetalHPV检测阴性并开始活动平均1年者2011例随访3年•HPV感染率44％•最常见亚型16型•246例出现细胞涂片异常•28例进展为HSIL

Lancet,2001;9:357正常人群的HPV感染第31页，共55页。Beby-DefouxAetalHPV感染7.3%HR-HPV：5.3%；LR-HPV：2.4%；Mixed-HPV：0.9%；unknown-HPV:0.5%常见型别的顺序：16、58、18、30、33

JMedVirol2004;73(2):262-8正常人群的HPV感染第32页，共55页。正常人群的HPV感染北京市正常人群：23.9%HR-HPV：19.5%，LR-HPV：4.4%，Mixed-HPV：2.0%分布前10位的亚型：16、58、52、68、CP8304、31、33、59、18and11。

——国家十五科技攻关项目第33页，共55页。BeerensEetalHR-HPV：ASCUS72%;HSIL94.5%Mixed-HPV：HSIL35.8%常见型别：16、52、51、31；18型罕见

Cytopathology2005;16(4):199-205高危人群HPV的感染第34页，共55页。高危人群HPV的感染北大医院2285名门诊高危人群：HPV感染率：57.1%HR-HPV:41.0%;LR-HPV:7.2%;Mixed-HPV：8.9%HPV感染常见亚型是HPV16、58、52、53、33、6和CP8304。人群HPV感染高峰年龄在30~34岁

——国家十五科研攻关项目

中国实用妇科与产科杂志；22（6），444-445第35页，共55页。HPV与细胞学结果的关系第36页，共55页。ShlayJetal.195例细胞涂片为ASCUS后平均64（12－430）天行阴道镜检查和HPV检测，阴道镜异常再行活检结果:高危HPV总阳性率31.3%CINI36.4%CINII-III93.3%

ObstetGynecol,2000;96:410HPV分型检测与ASCUS第37页，共55页。Leeetal457例细胞学诊断为ASCUS/LSIL，行HPV检测和活检

LSIL且高危HPV阳性者,22.7%为CINII/IIILSIL但高危HPV阴性者，仅1％为CINII/III

ArchPatholLabMed,2001;125:1453HPV检测与ASCUS\LSIL第38页，共55页。Nobbenhuis等，观察353例HPV感染者.1年消退率平均消退时间低危HPV细胞轻、中度68％5个月重度53％6个月高危HPV细胞轻度37％17个月中度34％24个月重度12％>60个月

BrJCancer,2002;87:75HPV随访在宫颈病变中的作用第39页，共55页。HPV随访在宫颈病变中的作用MoscickiABetal187名LSIL，每4个月检测一次细胞学、阴道镜、HPVDNA。三次细胞学均为阴性为转归一年后转归：61%（95%CI53-71）三年后转归：91%（95%CI84-99）提示：HPV感染转阴与LSIL的转归有相关性

Lancet2004;364(9446):1678-83第40页，共55页。

●HPV感染先于细胞学发生●HPV感染消退也先于细胞学消退HPV感染与细胞学第41页，共55页。病例LEEP术后：HPV（-）第42页，共55页。HPV感染与各级宫颈疾病第43页，共55页。Plummeretal10058例宫颈癌，8550宫颈鳞癌，1508宫颈腺癌和宫颈腺鳞癌HPV16感染与宫颈癌的相关具有普遍意义宫颈鳞癌：HPV16占46-63%；HPV18占10-14%宫颈腺癌和宫颈腺鳞癌：HPV18占37-41%；HPV16占26-36%。HPV分型与宫颈癌第44页，共55页。HPV分型检测与宫颈病变北大医院463例（CIN）宫颈病变中，HPV阳性率76.9%,HR-HPV73.4%;LR-HPV12.1%;M-HPV31.3%（其中2型感染98例、3型感染31例、4型感染10例、5型感染4例、6型感染2例，多型感染都至少有一种高危型存在）。

——国家十五科研攻关项目第45页，共55页。HPV分型检测与CIN1\炎症CIN1\炎症HR-HPV：77.1%常见亚型分别是：HPV16、58、52、33、31、18和51型，且均为高危亚型感染。——国家十五科研攻关项目第46页，共55页。CIN2\3HR-HPV:94.0%，常见亚型：HPV16、33、58、31和52型LogisticRegression分析：HPV16、33和31与CIN2\3相关，是主要致病型。

——国家十五科研攻关项目

中国妇产科临床杂志；7（4）：253-256.HPV分型检测与宫颈病变CIN2\3第47页，共55页。HPV在宫颈治疗前后的比较第48页，共55页。宫颈治疗前后HPV的变化HoufflinDebangeVetalLEEP治疗205例CIN2或3的患者术前：HPV阳性94.1%术后：HPV阳性34.6%提示：治疗后HPV仍为阳性，复发的可能性大

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