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第第页土壤硝酸还原酶（Solid—NitrateReductase，S—NR）试剂盒说明书土壤硝酸还原酶（SolidNitrateReductase，SNR）试剂盒说明书微量法100管/48样注意：正式测定前务必取23个预期差别较大的样本做猜测定测定意义：SNR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐，是土壤硝态氮还原的关键酶。研究SNR的活性对合理施肥，降低氮素的损失具有紧要意义。测定原理：SNR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ+NADH+H＋→NO2ˉ+NAD＋+H2O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及α萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在540nm有最大汲取峰，可用分光光度法测定。需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。试剂的构成和配制：试剂一：液体12mL×1瓶，20℃保管。试剂二：液体8mL×1瓶，20℃保管。试剂三：液体9mL×1瓶，4℃保管（如显现结晶析出，60℃90℃水浴溶解后使用）。试剂四：液体9mL×1瓶，4℃保管。试剂五：标准品储备液1mL，20℃保管。0.1μmol/mL标准液的配制：用时将试剂五稀释100倍，即取0.1ml加蒸馏水定容至10ml。样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30～50目筛。测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调整波长至540nm，蒸馏水调零。2、样本测定试剂名称1mL带盖离心管测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.060.060.1μmol/mL标准液（μL）60蒸馏水（μL）225285试剂一（μL）225225试剂二（μL）75757575混匀后，盖盖后37℃水浴24h，8000g25℃离心10min，取上清液上清液（μL）130130130130试剂三（μL）85858585试剂四（μL）85858585混匀，25℃显色20min，4000g，25℃离心10min，取200uL上清液至微量石英比色皿或96孔板中，540nm下读取各管吸光值。标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。注意点：务必先做2个样本的猜测定，少部分土壤由于样本特殊性可能显现测定管小于对照管，请及时与我司技术支持联系，以获得针对样本特殊性的调整测定方法。SNR活性计算：单位的定义：每天每g土样中产生1μmolNO2ˉ的量为一个SNR活力单位。SNR（μmol/d/g土样）=C标准×（A测定管A对照管）÷（A标准管A空白管）×V反总÷W÷T=0.5×（A测定管A对照管）÷（A标准管A空白管）C标准管：标

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