基因工程赋予生物新的遗传特性高二下学期生物浙科版选择性必修三

农杆菌转化法冠瘿病农杆菌冠瘿病与农杆菌农杆菌与植物细胞接触T-DNA区段的释放及转移T-DNA区段入核及表达农杆菌侵染植物改造后的工程Ti质粒Ti质粒在基因工程中的应用实验过程讨论为什么不使用天然的Ti质粒？相比于基因枪法、电击法等转化方法，农杆菌转化法的优点有哪些？③缺少标记基因①含有导致植物患冠瘿病的基因②没有方便目的基因插入的集中的酶切位点①成功率高，效果好②机理研究清楚，方法成熟，应用广泛③遗传稳定性好④操作比较容易，需要的仪器设备简单，易于推广课时总结农杆菌感染植物后，可自发地遗传转化植物细胞农杆菌不进入植物细胞，仅有T-DNA区段进入植物细胞T-DNA区段进入受体细胞后，会整合到受体细胞的核基因组中并进行稳定表达甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质，为了改善黄瓜的品质，科学家利用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，得到了转基因植株。下图1、图2分别为甜蛋白基因编码链（仅示部分碱基）和Ti质粒的示意图，其中①～⑤表示不同位点。请回答问题：(1)科研人员对载体Ti质粒进行改造时，需要插入多个限制酶单一切点，应选择在图2中的位点_________（填序号）处插入。T-DNA的作用是将甜蛋白基因导入黄瓜细胞并_________________________________。(2)将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建_________并导入________中。将其接种在含____________的培养基上，再利用液体培养基振荡培养，可以得到用于转化的侵染液。(3)剪取黄瓜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是_____________________，后再转化黄瓜细胞，转化后应在培养基中添加_________，筛选转化成功的愈伤组织。③整合到黄瓜细胞的染色体DNA上表达载体农杆菌卡那霉素利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞潮霉素微生物的蓝白斑实验一、实验目的学习蓝白斑筛选重组菌落的原理及方法。二、实验器材：1、材料：受体菌JM109（需在-80℃保存，或在干冰中短时间保存），pMD19-T载体试剂盒、ITPG溶液、X-Gal、NaCl、琼脂、酵母粉、蛋白胨、冰、烧杯、锥形瓶、玻璃棒、移液器、离心管、培养皿等。2、仪器：恒温培养箱、恒温摇床、离心机、搅拌器、冰箱等。

三、实验原理：

蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法。野生型埃希氏大肠菌（E.Coli）产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。在经人工插入外源基因后，突变型大肠杆菌的β半乳糖苷酶基因被插入的外源基因切断，无法形成完整的β半乳糖苷酶，故不能对无色化合物X-gal进行切割，菌落呈白色。

在指示培养基上，重组质粒的菌落是白色的，非重组质粒的菌落是蓝色的，以颜色不同为依据直接筛选重组克隆的方法。重组质粒：外源基因插入后，LacZ基因被破坏，不能产生蓝色产物。实验中，通常蓝白筛选是与抗性筛选同时使用的。含X-Gal的培养基同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素，这样，一次筛选可以判断出：（1）未转化的菌不具有抗性，不生长；（2）转化了空载体，即未重组质粒的菌，长成蓝色菌落；（3）转化了重组质粒的菌，即目的重组菌，长成白色菌落。

四、实验步骤：1、将ITPG和X-Gal配制为溶液，除菌后冷冻保存，备用。2、制备LB液体培养基、LB固体培养基、含氨苄青霉素（标记为Amp+）的LB固体培养基，备用。3、重组质粒的制备4、将质粒转化至大肠杆菌5、制备含ITPG、X-Gal的培养基（现用现制）：取适量ITPG、X-Gal溶液均匀涂布于含有氨苄青霉素的LB固体培养基表面，晾干。6、涂板：取100μL步骤4获得的转化细菌分别涂布于添加IPTG、X-Gal的培养基表面，37℃恒温培养箱倒置培养12h。7、观察：实验组和对照组经转化后的大肠杆菌菌落呈现出不同的颜色，分别统计实验组、对照组中的蓝斑和白斑数目。

四、实验步骤：

五、大肠杆菌表达体系的优点：1、积累了充足经验，有非常多的载体可供应用；2、可以因不同载体而选择不同菌种做宿主；3、操作安全，致病能力低；4、菌种取材方便，成本相对比较低；1.【2019年4月选考】通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物，其原因除水果中果胶含量较高外，还有______________________________________________________________。腐烂的水果中含产果胶酶的微生物较多油田淤泥中富含咔唑，能聚集降解咔唑的菌株2.【杭二中开学检测】咔唑是一种含氮有机物，对生物具有毒性，结构稳定，释放单环境中后难以被降解。科研人员从油田淤泥中分离筛选出降解咔唑的高效菌株。本实验选择从油田淤泥中分离降解咔唑的高效菌株的原因可能是_________________________________________________。3.科研人员从盐碱土壤中分离得到芽孢杆菌B3菌株，检测表明，

该菌株能分泌抗菌肽，对大肠杆菌、沙门氏菌等具有抑菌作用，该抗菌肽生产的基本流程如下：制备土壤悬液制备培养基液体

发酵制备抗菌肽粗提物分离提纯抗菌肽抑菌效果检测抑菌效果检测：①在培养基尚末凝固时加入适量的大肠杆菌菌液，制成试验平板备用；②制备无菌滤纸小圆片，浸泡于经______灭菌的抗菌肽溶液；③取出小纸片置于试验平板中培养一段时间后测定___________________的大小，判定抑菌效果。试验进一步观察发现，小纸片周围的细菌出现破裂、内容物流出的情况，说明抗菌肽会导致细菌_____________结构被破损。由于抗菌肽对真核细胞无毒性，可将其代替_________使用于动