粮油检验 GC-MS法测定3-氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯

ICS67.200.10

X14

中华人民共和国国家标准

GB/TXXXXX—202X

粮油检验GC/MS法测定3-氯丙醇脂肪酸酯

和缩水甘油脂肪酸酯

Inspectionofgrainandoils—Determinationoffatty-acid-bound

3-chloropropane-1,2-diols(MCPDs)andglycidolbyGC/MS

（ISO18363-1:2015,ISO18363-2:2018,ISO18363-3:2017,ISO18363-4:2021,

IDT）

(征求意见稿）

（本稿完成日期：2022年12月11日）

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XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

国家市场监督管理总局

发布

国家标准化管理委员会

GB/TXXXXX—202X

粮油检验GC/MS法测定3-氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯

1范围

本文件规定了GC/MS法测定3-氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯的原理、试剂和材料、仪器和设

备、试样制备、试验步骤、结果计算、精密度等。

本文件适用于固体和液体油脂中3-氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯的测定，其中，第一法用于

油脂中3-氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯的测定，第二法、第三法和第四法用于油脂中3-氯丙醇脂

肪酸酯、2-氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯的测定，第二法不适用于乳和乳制品及其脂肪，第四法

不适用于乳和乳制品及其脂肪、婴儿配方奶粉、乳化剂、游离脂肪酸等油脂衍生物。

本文件的检出限（LOD）为30µg/kg，定量限（LOQ）为100µg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T5524动植物油脂扦样

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T15687动植物油脂试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

第一法GC/MS法测定3-氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯差分

法

4原理

本方法由两部分试验组成。样品在碱催化酯裂解后，3-氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯分别转

化为3-氯丙醇和缩水甘油；在试验（A）中添加氯化钠的酸性水溶液将缩水甘油转化为3-氯丙醇，在试

验（B）中添加溴化钠的酸性水溶液将缩水甘油转化为3-溴丙醇；经苯基硼酸衍生化后进行气相色谱-

质谱分析，内标法定量；试验（A）以3-氯丙醇含量表示样品中3-氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯

含量之和，试验（B）以3-氯丙醇表示样品中3-氯丙醇脂肪酸酯的含量；样品中缩水甘油脂肪酸酯的含

量与两部分试验的差值（A–B）成正比，由缩水甘油到3-氯丙醇的转化率计算缩水甘油脂肪酸酯的含量。

1

GB/TXXXXX—202X

5试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯试剂；实验用水应符合GB/T6682中一级水的规定。

5.1甲苯：色谱纯。

5.2叔丁基甲醚：色谱纯。

5.3甲醇：色谱纯。

5.4异己烷：色谱纯。

5.5乙醚：色谱纯。

5.6乙酸乙酯：色谱纯。

5.7异辛烷：色谱纯。

5.8无水硫酸钠，颗粒状。

5.9氢氧化钠。

5.10氯化钠。

5.11溴化钠。

5.12苯基硼酸（≥97%）。

5.13硫酸（95%）。

5.14甲醇钠溶液：准确称取2.0g氢氧化钠（5.9），充分溶于100mL甲醇（5.13）。

5.15硫酸溶液（25%）：移取25mL硫酸（5.13）至盛有50mL水的100mL容量瓶中，用水定容至刻

度线后混匀。

5.16氯化钠的酸性水溶液：准确称取20g氯化钠（5.10），充分溶于100mL水，加入3.5mL硫酸

溶液（5.15）后，混匀。

5.17溴化钠的酸性水溶液：准确称取60g溴化钠（5.11），充分溶于100mL水，加入3.5mL硫酸

溶液（5.15）后，混匀。

5.18饱和苯基硼酸溶液：准确称取200mg苯基硼酸（5.12），加入10mL乙醚（5.5），震荡并充分

混匀，静置使未溶解的苯基硼酸沉淀下来，衍生时使用上清液。

5.19标准品：3-氯-1,2-丙二醇（3-MCPD，C3H7ClO2，CAS号96-24-2），纯度≥99.0%；缩水甘油硬脂

酸酯（Gly-S，C21H40O3，CAS号7460-84-6），纯度≥98.0%；3-氯-1,2-丙二醇-二棕榈酸酯（PP-3-MCPD，

C35H67ClO4，CAS号51930-97-3），纯度≥95.0%；氘代-3-氯-1,2-丙二醇-二棕榈酸酯（d5-PP-3-MCPD，

C20H32ClD5O4，CAS号1185057-55-9），纯度≥95.0%；于-18℃贮存。

5.20标准工作液：PP-3-MCPD和d5-PP-3-MCPD的甲苯溶液浓度分别为26.6µg/mL和26.87µg/mL。

5.21滤膜：0.22µm有机膜。

2

GB/TXXXXX—202X

6仪器和设备

6.1分析天平：感量0.1g，0.0001g和0.00001g。

6.2气相色谱-质谱联用仪，配置程序升温进样口。

6.3氮吹仪。

6.4超声水浴。

6.5涡旋振荡器。

7试样制备

扦样按GB/T5524执行。

试样制备按GB/T15687执行。

8试验步骤

8.1酯裂解和缩水甘油转化

称取两份100mg±0.5mg油脂样品于螺帽小瓶中，分别用于试验A和试验B，然后分别依次加入

100µL标准工作液（5.20）和100µL叔丁基甲醚（5.2），充分混匀。然后分别加入200µL甲醇钠溶

液（5.14），旋紧震荡，室温下反应3.5min～5.5min。试验A中加入600µL氯化钠的酸性水溶液（5.16）

终止反应，试验B中加入600µL溴化钠的酸性水溶液（5.17）终止反应。向试验A和试验B中分别加

入600µL异己烷（5.4），旋紧并剧烈震荡后在室温下静置约5min。

8.2净化

弃去待净化液（8.1）的上层液相，再向试验A和试验B中分别再加入600µL异己烷（5.4），旋紧并

剧烈震荡后在室温下静置约5min，弃去上层液相后的残留液待衍生化反应。

8.3衍生化

分别用600µL乙醚（5.5）/乙酸乙酯（5.6）混合液（3:2,v/v）萃取试验A和试验B的残留液（8.2）

三次，分别合并有机相至装有少量无水硫酸钠（5.8）的螺帽小瓶中，然后分别加入10µL～100µL饱

和苯基硼酸溶液（5.18），涡旋混匀，室温下超声处理约5min。氮吹（35℃～40℃，15min～20min）

至干，再分别加入500µL异辛烷（5.7）复溶，涡旋至充分溶解，滤膜（5.21）过滤后分别转移到进样

瓶中待测。

8.4测定

8.4.1气相色谱参考条件

色谱柱：50%二苯基-50%二甲基聚硅氧烷石英柱(30m×0.25mm×0.25µm)或性能相当色谱柱，带

预柱（例如，RestekRxi○R17或HPDB17-MS）。

进样量：1µL～2µL。

载气：高纯氦气（纯度≥99.999%）。

3

GB/TXXXXX—202X

流速：1mL/min～1.2mL/min。

进样口升温程序：初始温度为85℃，以300℃/min的速率升温至165℃，保持10min，以300℃

/min的速率升温至320℃，保持8min。

进样方式：不分流进样，吹扫流量50mL/min，0.5min～1min，隔腔吹扫3mL/min。

气相色谱柱温箱升温程序：85℃保持0.5min，以6℃/min的速率升温至150℃，再以12℃/min

的速率升温至180℃，然后以25℃/min的速率升温至280℃，保持7min。

8.4.2质谱参考条件

传输线温度：300℃。

离子源温度：230℃。

四极杆温度：150℃。

离子源：电子轰击模式（EI）。

扫描模式：选择离子监测模式（SIM）。

监测离子如表1所示。

表1监测离子信息

序号化合物名称定量离子（m/z）定性离子（m/z）

13-MCPD的苯基硼酸衍生物147146、196、198

2d5-3-MCPD的苯基硼酸衍生物150149、201、203

9结果计算

9.1由3-MCPD脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯生成的3-MCPD的总量，按式（1）计算：

SFw

Ad5-3-MCPD()A

w3-MCPD(A)=…………（1）

SFiA

式中：

w3-MCPD(A)——试验A中3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

wd5-3-MCPD(A)——试验A中d5-3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

SFA——试验A中3-MCPD衍生物的色谱峰面积；

SFiA——试验A中d5-3-MCPD衍生物的色谱峰面积。

9.2由3-MCPD脂肪酸酯生成的3-MCPD的含量，按式（2）计算：

SFw

Bd-3-MCPD()B

w3-MCPD()B=…………（2）

SFiB

式中：

w3-MCPD(B)——试验B中3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

wd5-3-MCPD(B)——试验B中d5-3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

SFB——试验B中3-MCPD衍生物的色谱峰面积；

SFiB——试验B中d5-3-MCPD衍生物的色谱峰面积。

4

GB/TXXXXX—202X

9.3添加等距浓度的缩水甘油脂肪酸酯，按试验A处理样品，得到校准曲线式（3），试验A中缩水甘

油到3-MCPD的转化因子按式（4）计算：

y=mx+n…………（3）

式中：

y——3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

x——缩水甘油的含量，单位为mg/kg。

1

t=…………（4）

m

9.4缩水甘油脂肪酸酯的含量是式（1）和式（2）结果之差乘以转化因子t（式（4）），按式（5）

计算：

wGlycidol=t()w3-MCPD(A)－w3-MCPD(B)…………（5）

式中：

wGlycidol——缩水甘油脂肪酸酯的含量（以缩水甘油计），单位为mg/kg；

w3-MCPD(A)——试验A中3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

w3-MCPD(B)——试验B中3-MCPD的含量，单位为mg/kg。

10精密度

10.1实验室间验证

附录A详述了本方法精密度的实验室间比对测试结果，提供的重复性、再现性数据对于其他浓度范

围和其他测试物质来说也许并不适用。

10.2重复性

在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，在短时间内对同一被测对象进行

的两次独立测试结果的绝对差值大于重复性限（r）的情况不得超过5%。

10.3再现性

在不同实验室，由不同操作者使用不同设备，按相同的测试方法，对同一被测对象进行的两次独立

测试结果的绝对差值大于再现性限（R）的情况不得超过5%。

第二法GC/MS法测定单氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯慢速

碱法酯交换用于测定2-氯丙醇、3-氯丙醇和缩水甘油

11原理

5

GB/TXXXXX—202X

样品在低温（-22℃～-25℃）下经碱催化酯裂解后，缩水甘油脂肪酸酯、2-氯丙醇脂肪酸酯和3-

氯丙醇脂肪酸酯分别转化为缩水甘油、2-氯丙醇和3-氯丙醇，添加溴化钠的酸性水溶液将缩水甘油转化

为3-溴丙醇，3-溴丙醇、2-氯丙醇和3-氯丙醇经苯基硼酸衍生化后进行气相色谱-质谱分析，内标法定

量，以缩水甘油、2-氯丙醇和3-氯丙醇含量分别表示样品中缩水甘油脂肪酸酯、2-氯丙醇脂肪酸酯和3-

氯丙醇脂肪酸酯的含量。当样品中3-氯丙醇脂肪酸酯含量较高时，用3-氯丙醇脂肪酸酯到3-溴丙醇的转

化系数以及同位素因子校正缩水甘油脂肪酸酯的含量。

12试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯试剂；实验用水应符合GB/T6682中一级水的规定。

12.1甲苯：色谱纯。

12.2叔丁基甲醚：色谱纯。

12.3甲醇：色谱纯。

12.4异己烷：色谱纯。

12.5乙醚：色谱纯。

12.6乙酸乙酯：色谱纯。

12.7异辛烷：色谱纯。

12.8无水硫酸钠。

12.9氢氧化钠。

12.10溴化钠。

12.11苯基硼酸（≥97%）。

12.12正磷酸（85%）。

12.13甲醇钠溶液：准确称取0.25g氢氧化钠（12.9），充分溶于100mL甲醇（12.3），储存于-22℃～

-25℃冰箱中。

12.14溴化钠的酸性水溶液：准确称取60g溴化钠（12.10），充分溶于100mL水，加入3.0mL正

磷酸（12.12）后，混匀，储存于-22℃～-25℃冰箱中。

12.15饱和苯基硼酸溶液：准确称取200mg苯基硼酸（12.11），加入10mL乙醚（12.5），震荡并

充分混匀，静置使未溶解的苯基硼酸沉淀下来，衍生时使用上清液。

12.16标准品：2-氯-1,3-丙二醇（2-MCPD，C3H7ClO2，CAS号497-04-1），纯度≥95.0%；氘代-2-氯

-1,3-丙二醇（d5-2-MCPD，C3H2D5ClO2，CAS号1216764-05-4），纯度≥95.0%；2-氯-1,3-丙二醇-二硬

脂酸酯（SS-2-MCPD，C39H75ClO4，CAS号26787-56-4），纯度≥95.0%；氘代-2-氯-1,3-丙二醇-二硬脂

酸酯（d5-SS-2-MCPD，C39H70D5ClO4，CAS号1329796-49-7），纯度≥95.0%；3-氯-1,2-丙二醇（3-MCPD，

C3H7ClO2，CAS号96-24-2），纯度≥98.0%；氘代-3-氯-1,2-丙二醇（d5-3-MCPD，C3H2ClD5O2，CAS号

342611-01-2），纯度≥95.0%；3-氯-1,2-丙二醇-二棕榈酸酯（PP-3-MCPD，C35H67ClO4，CAS号51930-97-3），

纯度≥95.0%；氘代-3-氯-1,2-丙二醇-二棕榈酸酯（d5-PP-3-MCPD，C35H62D5ClO4，CAS号1185057-55-9），

6

GB/TXXXXX—202X

纯度≥95.0%；缩水甘油油酸酯（Gly-O，C21H38O3，CAS号5431-33-4），纯度≥98.0%；d5-缩水甘油油

酸酯（d5-Gly-O，C21H33D5O3，CAS号1426395-63-2），纯度≥95.0%；于-18℃贮存。

12.17标准工作液：2-MCPD、d5-2-MCPD、3-MCPD和d5-3-MCPD的甲醇溶液浓度均为10.0µg/mL；

SS-2-MCPD和d5-SS-2-MCPD的甲苯溶液浓度分别为29.1µg/mL和9.3µg/mL；PP-3-MCPD和d5-PP-3-MCPD

的甲苯溶液浓度分别为26.6µg/mL和26.8µg/mL；Gly-O和d5-Gly-O的甲苯溶液浓度分别为22.8µg/mL

和23.2µg/mL；于-18℃贮存。

12.18滤膜：0.22µm有机膜。

13仪器和设备

13.1分析天平：感量0.1g，0.0001g和0.00001g。

13.2气相色谱-质谱联用仪，配置程序升温进样口。

13.3冰箱（可控温-22℃～-25℃）。

13.4氮吹仪。

13.5超声水浴。

13.6涡旋振荡器。

14试样制备

扦样按GB/T5524执行。

试样制备按GB/T15687执行。

15试验步骤

15.1酯裂解和缩水甘油转化

称取两份100mg±0.5mg样品于螺帽小瓶中，分别用于试验A和试验B。试验A中加入50µL

d5-2-MCPD、50µLd5-3-MCPD和100µLd5-Gly-O标准工作液，试验B中加入100µLd5-SS-2-MCPD和

100µLd5-PP-3-MCPD标准工作液。再分别加入600µL乙醚（12.5），充分混匀后置于冰箱中至少15min，

冷却至-22℃～-25℃，随后分别加入350µL甲醇钠溶液（12.13）并涡旋混匀，在-22℃～-25℃进

行酯裂解反应不少于16h。向试验A和试验B中分别加入600µL溴化钠的酸性水溶液（12.14）终止

反应，涡旋震荡后氮吹至有机相余液约100µL，再分别加入600µL异己烷（12.4），涡旋震荡后在室

温静置5min～10min。

15.2净化

弃去待净化液（15.1）的上层液相，再向试验A和试验B中分别加入600µL异己烷（12.4），旋

紧并剧烈震荡后在室温下静置约5min～10min，弃去上层液相后的残留液待衍生化反应。

7

GB/TXXXXX—202X

15.3衍生化

分别用600µL乙醚（12.5）/乙酸乙酯（12.6）混合液（3:2,v/v）萃取试验A和试验B的残留液

（15.2）三次，分别合并有机相至装有少量无水硫酸钠（12.8）的螺帽小瓶中，然后分别加入20µL

饱和苯基硼酸溶液（12.15），涡旋混匀，室温下超声处理约5min。氮吹（35℃～40℃，15min～

20min）至干，再分别加入300µL～500µL异辛烷（12.4）复溶，涡旋至充分溶解，滤膜（12.18）过

滤后分别转移到进样瓶中待测。

15.4测定

15.4.1气相色谱参考条件

色谱柱：50%二苯基-50%二甲基聚硅氧烷石英柱(30m×0.25mm×0.25µm)或性能相当色谱柱，带

预柱（例如RestekRxi○R17或HPDB17-MS）。

进样量：1µL～2µL。

载气：高纯氦气（纯度≥99.999%）。

流速：1mL/min～1.5mL/min。

进样口升温程序：初始温度为85℃，以300℃/min至165℃，保持10min，以300℃/min至

320℃，保持8min。

进样方式：不分流进样。吹扫流量50mL/min，0.5min～1min，隔腔吹扫3mL/min。

气相色谱柱温箱升温程序：85℃保持0.5min，以6℃/min的速率升温至150℃，再以12℃/min

的速率升温至180℃，然后以25℃/min的速率升温至280℃，保持8min。

15.4.2质谱参考条件

传输线温度：300℃。

离子源温度：230℃。

四极杆温度：150℃。

离子源：电子轰击模式（EI）。

扫描模式：选择离子监测模式（SIM）。

监测离子如表2所示。

表2监测离子信息

序号化合物名称定量离子（m/z）定性离子（m/z）

1d5-3-MCPD的苯基硼酸衍生物150149、201、203

23-MCPD的苯基硼酸衍生物147146、196、198

3d5-2-MCPD的苯基硼酸衍生物201203

42-MCPD的苯基硼酸衍生物196198

5d5-3-MBPD的苯基硼酸衍生物245247

63-MBPD的苯基硼酸衍生物240242

注：在溴化钠的酸性水溶液存在时，缩水甘油的转化产物为3-溴丙醇（3-MBPD），d5-缩水甘油的转化产物为d5-3-

溴丙醇（d5-3-MBPD）。

16结果计算

8

GB/TXXXXX—202X

16.1缩水甘油脂肪酸酯的含量

16.1.13-MCPD脂肪酸酯含量较低时，试验A得到的缩水甘油脂肪酸酯含量无需校正。3-MCPD脂肪酸

酯含量较高时，3-MCPD向缩水甘油的转化会导致缩水甘油脂肪酸酯含量偏高。为了校正缩水甘油脂肪

酸酯的含量，用试验B中d5-PP-3-MCPD到d5-3-MBPD的转化系数确定试验A中3-MCPD到3-MBPD的转化

程度。

16.1.2缩水甘油脂肪酸酯的含量（以缩水甘油计），按式（6）计算：

SAw

w=3-MBPD()Ad5-glycidol(A)…………（6）

glycidoluncorrected(A)SA

d5-3-MBPD()A

式中：

wglycidoluncorrected(A)——试验A中缩水甘油的含量（未校正值），单位为mg/kg；

wd5-glycidol(A)——试验A中d5-缩水甘油的含量，单位为mg/kg；

SA3-MBPD(A)——试验A中3-MBPD衍生物的色谱峰面积；

SAd5-3-MBPD(A)——试验A中d5-3-MBPD衍生物的色谱峰面积。

16.1.33-MCPD通过缩水甘油转化为3-MBPD的程度，按式（7）计算：

SA

t=d5-3-MBPD(B)…………（7）

3-MCPDSA

d5-3-MCPD()B

式中：

t3-MCPD——d5-3-MCPD到d5-3-MBPD的转化系数；

SAd5-3-MBPD(B)——试验B中d5-3-MBPD衍生物的色谱峰面积；

SAd5-3-MCPD(B)——试验B中d5-3-MCPD衍生物的色谱峰面积。

16.1.4同位素因子按式（8）计算：

SA

I=3-MBPD…………（8）

SA

d5-3-MBPD

式中：

I——同位素因子；

SA3-MBPD——3-MBPD衍生物的色谱峰面积；

SAd5-3-MBPD——d5-3-MBPD衍生物的色谱峰面积。

16.1.5缩水甘油含量的校正值按式（9）计算：

(SA－(tSAI))w

w=3-MBPD()A3-MCPD3-MCPD(A)d5-glycidol(A)…………（9）

glycidolcorrected(A)SA

d5-3-MBPD()A

式中：

wglycidolcorrected(A)——试验A中缩水甘油的含量（校正值），单位为mg/kg；

t3-MCPD——3-MCPD到3-MBPD的转化系数；

I——同位素因子；

9

GB/TXXXXX—202X

wd5-glycidol(A)——试验A中d5-缩水甘油的含量，单位为mg/kg；

SA3-MBPD(A)——试验A中3-MBPD衍生物的色谱峰面积；

SA3-MCPD(A)——试验A中3-MCPD衍生物的色谱峰面积；

SAd5-3-MBPD(A)——试验A中d5-3-MBPD衍生物的色谱峰面积。

16.22-MCPD脂肪酸酯的含量用2-MCPD含量表示，按式（10）计算：

SAw

w=2-MCPD(B)d5-2-MCPD(B)…………（10）

2-MCPD(B)SA

d5-2-MCPD()B

式中：

w2-MCPD(B)——试验B中2-MCPD的含量，单位为mg/kg；

wd5-2-MCPD(B)——试验B中d5-2-MCPD的含量，单位为mg/kg；

SA2-MCPD(B)——试验B中2-MCPD衍生物的色谱峰面积；

SAd5-2-MCPD(B)——试验B中d5-2-MCPD衍生物的色谱峰面积。

16.33-MCPD脂肪酸酯的含量用3-MCPD含量表示，按式（11）计算：

SAw

w=3-MCPD(B)d5-3-MCPD(B)…………（11）

3-MCPD(B)SA

d5-3-MCPD()B

式中：

w3-MCPD(B)——试验B中3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

wd5-3-MCPD(B)——试验B中d5-3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

SA3-MCPD(B)——试验B中3-MCPD衍生物的色谱峰面积；

SAd5-3-MCPD(B)——试验B中d5-3-MCPD衍生物的色谱峰面积。

16.4单氯丙醇脂肪酸二酯的裂解程度

试验A中3-MCPD的含量按式（12）计算：

SAw

w=3-MCPD(A)d5-3-MCPD(A)…………（12）

3-MCPD(A)SA

d5-3-MCPD()A

式中：

w3-MCPD(A)——试验A中3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

wd5-3-MCPD(A)——试验A中d5-3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

SA3-MCPD(A)——试验A中3-MCPD衍生物的色谱峰面积；

SAd5-3-MCPD(A)——试验A中d5-3-MCPD衍生物的色谱峰面积。

d5-3-MCPD-二酯的裂解程度按式（13）计算：

100w3-MCPD()B

ec3-MCPD-diester=…………（13）

w3-MCPD()A

式中：

ec3-MCPD-diester——3-MCPD-二酯的裂解程度，单位为%；

w3-MCPD(A)——试验A中3-MCPD的含量，单位为mg/kg；

10

GB/TXXXXX—202X

w3-MCPD(B)——试验B中3-MCPD的含量，单位为mg/kg。

17精密度

17.1实验室间验证

附录C详述了本方法精密度的实验室间比对测试结果，提供的重复性、再现性数据对于其他浓度范

围和其他测试物质来说也许并不适用。

17.2重复性

在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，在短时间内对同一被测对象进行

的两次独立测试结果的绝对差值大于重复性限（r）的情况不得超过5%。

17.3再现性

在不同实验室，由不同操作者使用不同设备，按相同的测试方法，对同一被测对象进行的两次独立

测试结果的绝对差值大于再现性限（R）的情况不得超过5%。

第三法GC/MS法测定单氯丙醇脂肪酸酯和缩水甘油脂肪酸酯酸法

酯交换用于测定2-氯丙醇、3-氯丙醇和缩水甘油

18原理

样品中缩水甘油脂肪酸酯在溴化钠的酸性水溶液中转化为3-溴丙醇脂肪酸酯，然后，在酸催化下3-

溴丙醇脂肪酸酯、2-氯丙醇脂肪酸酯和3-氯丙醇脂肪酸酯分别转化为3-溴丙醇、2-氯丙醇和3-氯丙醇，

再经苯基硼酸衍生化后进行气相色谱-质谱分析，内标法定量，以缩水甘油、2-氯丙醇和3-氯丙醇含量

分别表示样品中缩水甘油脂肪酸酯、2-氯丙醇脂肪酸酯和3-氯丙醇脂肪酸酯的含量。

19试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯试剂；实验用水应符合GB/T6682中一级水的规定。

19.1无水四氢呋喃：色谱纯。

19.2甲醇：色谱纯。

19.3正庚烷：色谱纯。

19.4丙酮：色谱纯。

19.5甲苯：色谱纯。

19.6硫酸（95%）。

19.7碳酸氢钠。

11

GB/TXXXXX—202X

19.8硫酸钠。

19.9溴化钠。

19.10苯基硼酸（≥97%）。

19.11丙酮/水（19/1,v/v）：190mL丙酮（19.4）与10mL水混匀。

19.12溴化钠的酸性水溶液（溴化钠3mg/mL，硫酸5%，v/v）：准确称取1.0g溴化钠（19.9），充

分溶于10mL水；移取180μL至空瓶，加入0.3mL硫酸（19.6）和5.5mL水，混匀，建议临用现配。

19.13碳酸氢钠溶液（0.6%，w/v）：准确称取0.6g碳酸氢钠（19.7）至100mL容量瓶中，加水超

声溶解，定容至刻度线后混匀。

19.14硫酸/甲醇溶液（1.8%，v/v）：移取1.8mL硫酸（19.6）至100mL容量瓶中，用甲醇（19.2）

定容至刻度线后混匀，建议临用现配。

19.15饱和碳酸氢钠溶液：准确称取9.6g碳酸氢钠（19.7）至100mL容量瓶中，加水超声溶解，定

容至刻度线后混匀。

19.16硫酸钠溶液（20%，w/v）：准确称取20.0g硫酸钠（19.8）至100mL容量瓶中，加水超声溶

解，定容至刻度线后混匀。

19.17饱和苯基硼酸溶液：准确称取3.0g苯基硼酸（19.10），用12mL丙酮/水（19.11）溶解，震

荡并充分混匀，静置使未溶解的苯基硼酸沉淀下来，衍生时使用上清液。

19.18标准品：3-氯-1,2-丙二醇-二棕榈酸酯（PP-3-MCPD，C35H67ClO4,CAS号51930-97-3），纯度≥

95%；2-氯-1,3-丙二醇-二棕榈酸酯（PP-2-MCPD，C35H67ClO4，CAS号169471-41-4），纯度≥95%；氘代

-3-氯-1,2-丙二醇-二棕榈酸酯（d5-PP-3-MCPD，C35H62D5ClO4，CAS号1185057-55-9），纯度≥95%；缩

水甘油棕榈酸酯（Gly-P，C19H36O3，CAS号7501-44-2），纯度≥98%；氘代-缩水甘油棕榈酸酯（d5-Gly-P，

C19H36D5O3，CAS号1794941-80-2），纯度≥98%；于-18℃贮存。

19.19标准储备液I：准确称取PP-3-MCPD标准品10mg，用无水四氢呋喃（19.1）或甲苯（19.5）溶

解并定容至10mL，于-18℃贮存，保质期不少于三个月。

19.20标准储备液II：准确称取PP-2-MCPD标准品10mg，用无水四氢呋喃（19.1）或甲苯（19.5）

溶解并定容至10mL，于-18℃贮存，保质期不少于三个月。

19.21标准储备液III：准确称取d5-PP-3-MCPD标准品10mg，用无水四氢呋喃（19.1）或甲苯（19.5）

溶解并定容至10mL，于-18℃贮存，保质期不少于三个月。

19.22标准储备液IV：准确称取Gly-P标准品10mg，用无水四氢呋喃（19.1）或甲苯（19.5）溶解

并定容至10mL，于-18℃贮存，保质期不少于三个月。

19.23标准储备液V：准确称取d5-Gly-P标准品10mg，用无水四氢呋喃（19.1）或甲苯（19.5）溶

解并定容至10mL，于-18℃贮存，保质期不少于三个月。

19.24标准工作液I（PP-3-MCPD，55µg/mL）：移取550µL标准储备液I（19.19），用无水四氢呋

喃（19.1）或甲苯（19.5）定容至10mL，于-18℃贮存。

12

GB/TXXXXX—202X

19.25标准工作液II（PP-3-MCPD，5.5µg/mL）：移取1mL的标准工作液I（19.24），用无水四氢

呋喃（19.1）或甲苯（19.5）定容至10mL，于-18℃贮存。

19.26标准工作液III（PP-2-MCPD，55µg/mL）：移取550µL标准储备液II（19.20）,用无水四氢

呋喃（19.1）或甲苯（19.5）定容至10mL，于-18℃贮存。

19.27标准工作液IV（PP-2-MCPD，5.5µg/mL）：移取1mL的标准工作液III（19.26），用无水四

氢呋喃（19.1）或甲苯（19.5）定容至10mL，于-18℃贮存。

19.28标准工作液V（Gly-P，100µg/mL）：移取1mL标准储备液IV（19.22）,用无水四氢呋喃（19.1）

或甲苯（19.5）定容至10mL，于-18℃贮存。

19.29标准工作液VI（Gly-P，10µg/mL）：移取1mL的标准工作液V（19.28）,用无水四氢呋喃（19.1）

或甲苯（19.5）定容至10mL，于-18℃贮存。

19.30内标工作液I（d5-PP-3-MCPD，40µg/mL）：移取400µL标准储备液III（19.21），用无水四

氢呋喃（19.1）或甲苯（19.5）定容至10mL，于-18℃贮存。

19.31内标工作液II（d5-Gly-P，50µg/mL）：移取500µL标准储备液V（19.23），用无水四氢呋

喃（19.1）或甲苯（19.5）定容至10mL，于-18℃贮存。

19.32滤膜：0.22µm有机膜。

20仪器和设备

20.1分析天平：感量0.1g，0.0001g和0.00001g。

20.2气相色谱-质谱联用仪。

20.3可控温摇床。

20.4氮吹仪。

20.5超声水浴。

20.6涡旋震荡器。

20.7离心机。

21试验制备

扦样按GB/T5524执行。

试样制备按GB/T15687执行。

22试验步骤

22.1缩水甘油脂肪酸酯转化

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GB/TXXXXX—202X

称取100mg～110mg样品（精确至0.01mg）于螺帽小瓶中，加入50μL内标工作液I（19.30）、

II（19.31）和2mL无水四氢呋喃（19.1），充分混匀。加入30μL溴化钠的酸性水溶液（19.12），

涡旋后置于50℃摇床（20.3）反应15min（转速为200rpm），随后立即加入3mL碳酸氢钠溶液（19.13）

终止反应，再加入2mL正庚烷（19.3），旋涡混匀后静置，将上层液相转移至螺帽小瓶，氮吹至干（35℃～

40℃，最多15min～20min），然后用1mL无水四氢呋喃（19.1）复溶，待酯裂解。

22.2酯裂解

向待酯裂解液（22.1）中加入1.8mL硫酸/甲醇溶液（19.14），涡旋混匀后置于40℃摇床（20.3）

反应16h（转速为200rpm）。反应结束后立即加入0.5mL饱和碳酸氢钠溶液（19.15）终止反应。氮

吹（35℃～40℃）至余液约1mL，待净化。

22.3净化

向待净化液（22.2）中依次加入2mL硫酸钠溶液（19.16）和2mL正庚烷（19.3），充分混合后

静置，两相自然分层后弃去上层液相，用正庚烷（19.3）再提取1次并弃去上层液相，残留液待衍生化。

22.4衍生化

向残留液（22.3）中加入250μL饱和苯基硼酸溶液（19.17），涡旋混匀后室温下超声处理约5min。

加入1mL正庚烷（19.3），涡旋混匀后静置分层，转移上层液相至螺帽小瓶；用1mL正庚烷（19.3）

再提取一次，合并两次提取液的上层液相。氮吹（35℃～40℃，15min～20min）至干。加入1mL

正庚烷（19.3）复溶，涡旋至充分溶解，滤膜（19.32）过滤后转移到进样瓶中待测。

22.5测定

22.5.1气相色谱参考条件

色谱柱：聚二甲基硅氧烷毛细管色谱柱（如SupelcoEquity-1，30m×0.25mm×1.0µm）或性能

相当色谱柱。

进样量：1.0µL。

进样方式：脉冲不分流。

进样口温度：250℃。

载气：高纯氦气（纯度≥99.999%）。

流速：0.8mL/min。

气相色谱柱温箱升温程序：80℃保持1min，以10℃/min的速率升温至170℃，再以3℃/min

的速率升温至200℃，然后以15℃/min的速率升温至300℃，保持15min。

22.5.2质谱参考条件

传输线温度：300℃。

离子源温度：230℃。

四极杆温度：150℃。

离子源：电子轰击模式（EI）。

扫描模式：选择离子监测模式（SIM）

采集时间：5min～20min。

监测离子见表3。

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表3监测离子信息

序号化合物名称定量离子（m/z）定性离子（m/z）

13-MCPD的苯基硼酸衍生物147196、198

22-MCPD的苯基硼酸衍生物196198

150（3-MCPD定量离子）、

3d5-3-MCPD的苯基硼酸衍生物203

201（2-MCPD定量离子）

43-MBPD的苯基硼酸衍生物147240

5d5-3-MBPD的苯基硼酸衍生物150245

23结果计算

23.13-MCPD脂肪酸酯的含量

23.1.1用标准工作液（19.24和19.25）和内标工作液（19.30）配制不同浓度比例的标准溶液（附表

A.1），做标准曲线：

y=+axb…………（14）

其中：

y——3-MCPD衍生物定量离子（m/z147）与d5-3-MCPD衍生物定量离子（m/z150）的色谱峰面积

之比；

x——PP-3-MCPD（以3-MCPD计）与内标d5-PP-3-MCPD（以d5-3-MCPD计）的质量比；

a——斜率；

b——y轴截距。

样品中3-MCPD脂肪酸酯含量较低时，为了取得良好的准确度，应确保该标准曲线的线性良好

（R2>0.99），并且y轴截距最好<|0.02|。

23.1.23-MCPD脂肪酸酯的含量按式（15）计算：

A11

c=147−bIS…………（15）

A150aw

其中：

c——3-MCPD脂肪酸酯的含量（以3-MCPD计），单位为mg/kg；

A147——3-MCPD衍生物定量离子（m/z147）的色谱峰面积；

IS——加入待测样品中的内标物的质量，单位为μg；

A150——d5-3-MCPD衍生物定量离子（m/z150）的色谱峰面积；

a——式（14）标准曲线的斜率；

w——待测样品质量，单位为g；

b——式（14）标准曲线的y轴截距。

23.22-MCPD酯的含量

23.2.1用标准工作液（19.26和19.27）和内标工作液（19.30）配制不同浓度比例的标准溶液（附表

A.1），做标准曲线：

15

GB/TXXXXX—202X

y=+axb…………（16）

其中：

y——2-MCPD衍生物定量离子（m/z196）与d5-3-MCPD衍生物定量离子（m/z201）的色谱峰面积

之比；

x——PP-2-MCPD（以2-MCPD计）与内标d5-PP-3-MCPD（以d5-3-MCPD计）的质量比；

a——斜率；

b——y轴截距。

样品中2-MCPD脂肪酸酯含量较低时，为了取得良好的准确度，应确保该标准曲线的线性良好

（R2>0.99），并且y轴截距最好<|0.05|。

23.2.22-MCPD脂肪酸酯的含量按式（17）计算：

A11

c=196−bIS…………（17）

A201aw

其中：

c——2-MCPD脂肪酸酯的含量（以2-MCPD计），单位为mg/kg；

A196——2-MCPD衍生物定量离子（m/z196）的色谱峰面积；

IS——加入待测样品中的内标物的质量，单位为μg；

A201——d5-3-MCPD衍生物定量离子（m/z201）的色谱峰面积；

a——式（16）标准曲线的斜率；

w——待测样品质量，单位为g；

b——式（16）标准曲线的y轴截距。

23.3缩水甘油脂肪酸酯的含量

23.3.1用标准工作液（19.28和19.29）和内标工作液（19.31）配制不同浓度比例的标准溶液（附表

A.1），做标准曲线：

…………（18）

其中：

y——3-MBPD衍生物定量离子（m/z147）与d5-3-MBPD衍生物定量离子（m/z150）的色谱峰面积

之比；

x——PP-3-MBPD（以3-MBPD计）与内标d5-PP-3-MBPD（以d5-3-MBPD计）的质量比；

a——斜率；

b——y轴截距。

样品中缩水甘油脂肪酸酯含量较低时，为了取得良好的准确度，应确保该标准曲线的线性良好

（R2>0.99），并且y轴截距最好<|0.02|。

23.3.2缩水甘油脂肪酸酯的含量按式（19）计算：

A11

c=147−bIS…………（19）

A150aw

16

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其中：

c——缩水甘油脂肪酸酯的含量（以缩水甘油计），单位为mg/kg；